4. Ý nghĩa của đề tài
2.2.2 Phương pháp hóa sinh
* Phát hiện hoạt tính catalase [5]
Nhỏ một giọt H2O2 3% lên bề mặt khuẩn lạc nếu thấy hiên tượng sủi bọt khí thì hiện đó được coi là có hoạt tính catalase (catalase + ). Ngược lại chủng vi khuẩn không có hoạt tính catalase (catalase - ).
Ngoài ra có thể nhỏ trực tiếp H2O2 lên sinh khối tế bào của chủng vi khuẩn nghiên cứu được tách ra từ dịch nuôi cấy bằng cách đem li tâm 5000 vòng/phút, quan sát hiện tượng như trên.
* Phát hiện khẳ năng oxy hóa rượu etylic thành acid acetic
Nuôi cấy chủng vi khuẩn trên môi trường có thành phần (g/l): Cao nấm men: 10g Rượu êtylic: 10% - 15%(vol/vol) Nước máy: 1000ml pH: 6,8 - 7,0
Xanh Bromophenol (BPB) 0,04%: 20ml
Phân môi trường vào các ống nghiệm (4 – 5 ml), khử trùng ở 121ºC trong 20 phút, để nguội khoảng 30ºC cấy vi khuẩn nghiên cứu mới hoạt hóa, nuôi 7 ngày trong điều kiện thích hợp. Quan sát thấy môi trường chuyển sang màu vàng là dương tính, không đổi màu là dương tính, không đổi màu âm tính.
Pha dung dịch BPB 0,04%: cân 0,1g BPB nghiền nhỏ cốc sứ, sau đó bổ sung 14.9 ml NaOH 0,001N hòa tan cho đều. Đổ tất cả vào bình định mức thêm nước cho đến khi thể tích đạt 250ml [3].
* Phát hiện khả năng oxy hóa acid acetic [22]
Sử dụng môi trường sau để thử khả năng oxy hóa acid acetic của vi khuẩn tuyển chọn.
Thành phần(g/l): Cao nấm men: 10 g Canxi axetat: 10 g
Nước máy: 1000 ml pH: 7,0 - 7,2
Phân môi trường vào bình tam giác khử trùng ở 121ºC trong 20 phút, để nguội khoảng 40 - 45ºC đổ thạch đĩa, cấy vi khuẩn tuyển chọn mới hoạt hóa (18 - 24 giờ) nuôi 6 - 7 ngày ở điều kiện thích hợp. Quan sát hiện tượng: nếu xung quanh khuẩn lạc có vòng phân giải canxi là phản ứng dương tính, ngược lại là âm tính.
* Phát hiện khả năng chuyển hóa glucose thành acid [22]
Để xác định khả năng hình thành acid của chủng vi khuẩn trên môi trường thạch. Nếu xung quanh khuẩn lạc tạo vòng phân giải canxi, chứng tỏ chủng tuyển chọn có khả năng hình thành acid từ glucose.