Các chồi của D. transparens đƣợc cấy lên môi trƣờng MS bổ sung tổ hợp BAP (0,5-2,0 mg/l) kết hợp với 0,2 mg/l NAA để thăm dò khả năng nhân nhanh chồi in vitro. Kết quả sau 8 tuần nuôi cấy đƣợc trình bày ở bảng 3.5.
Bảng 3.5. Ảnh hƣởng của tổ hợp BAP kết hợp NAA lên khả năng nhân chồi của
D. transparens sau 8 tuần nuôi cấy
BAP (mg/l) NAA(mg/l) Số chồi/mẫu Số lá/mẫu Chiều cao chồi (cm) ĐC 0 3,00 ± 0b 3,00 ± 0a 1,1 ± 1a 0,5 0,2 2,33 ± 0,57ab 3,00 ± 1a 0,93 ± 0,57b 1,0 0,2 1,33 ± 0,57a 3,00 ± 0a 1,53 ± 0,57c 1,5 0,2 4,67 ± 0,57c 3,67 ± 0,57ab 2,13 ± 0,57d 2,0 0,2 2,00 ± 1a 4,33 ± 0,57b 1,77 ± 0,57e
Các chữ cái khác nhau trong cùng một cột thể hiện sự khác biệt với mức ý nghĩa α = 0,05
Kết quả tại bảng 3.8 cho thấy khi bổ sung thêm NAA vào môi trƣờng, sự có mặt của auxin đã ảnh hƣởng đến sự tích luỹ cytokinin, do đó hoạt tính của BAP yếu hơn nên số lƣợng chồi cũng giảm theo. Cụ thể, hệ số nhân nhanh chồi cao nhất đạt 4,67 chồi/mẫu ở môi trƣờng bổ sung 1,5 mg/l BAP kết hợp 0,2 mg/l NAA (Hình 3.5) trong khi đó ở môi trƣờng chỉ bổ sung 2,0 mg/l BAP hệ số nhân chồi cao nhất đạt 5,67chồi/mẫu. Điều này cũng đúng với nhận định của Gaspar et al (1996) là auxin có thể ức chế sự tích luỹ cytokinin [29].
Hình 3.5. Chồi in vitro của D. transparens sau 8 tuần nuôi cấy trên môi trƣờng MS + 1,5 mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA
3.3. Tạo rễ - hình thành cây in vitro hoàn chỉnh
Tạo rễ là giai đoạn cuối cùng của quá trình nhân nhanh in vitro. Với mục đích tạo cây con có sức sống cao, đạt tiêu chuẩn ra cây. Đối với nuôi cấy mô và tế bào thực vật auxin đƣợc sử dụng để kích thích phân chia tế bào và phân hoá rễ. Những auxin đƣợc dùng rộng rãi trong nuôi cấy mô và tế bào thực vật là NAA và IAA. Để tăng khả năng ra rễ cho chồi giống lan nghiên cứu chúng tôi đã tiến hành lấy chồi của D. transparens thu đƣợc từ các thí nghiệm trên tách riêng lẻ và cấy lên môi trƣờng cơ bản MS bổ sung NAA (0,3; 0,5; 0,7 mg/l ) và IAA (0,3; 0,5; 0,7 mg/l) để khảo sát khả năng tạo rễ in vitro.