Qua tham khảo đề tài “Nghiên cứu bào chế nano azithromycin bằng phương pháp nhũ hóa khuếch tán dung môi” của dược sĩ Nguyễn Cảnh Hưng [12], xây dựng phương pháp bào chế tiểu phân nano FB như sau:
2.3.1.1. Cô g thức
Bảng 2.2. Công thức bào chế tiểu phân nano FB
Thành phần Số lƣợng
Eudragit EPO + FB 1,5 g
Ethyl acetat 10 ml
Dung dịch PVA 0,5% (bão hoà với 5 ml ethyl acetat) 50 ml Dung dịch PVA 0,1% (pha pha loãng) Thay đ i
2.3.1.2. Quy trình bào chế:
- Chuẩn bị pha dầu: hoà tan FB và polyme Eudragit EPO vào ethyl acetat. - Chuẩn bị pha nước: dd polyvinyl alcol (PVA) nồng độ 0,5%. Trong đó:
17
Phương pháp 1: dd PVA không có EA.
Phương pháp 2: dd PVA bão hòa bằng EA.
- Giai đoạn nhũ hoá: pha dầu được nhỏ từ từ vào pha nước (dung dịch PVA 0,5%). Thiết bị đồng nhất là máy siêu âm cầm tay. Trong quá trình đồng nhất duy trì nhiệt độ 5 – 10oC bằng nước đá kết hợp khuấy từ.
- Khuếch tán dung môi: phối hợp nhanh nhũ tương thu được với pha pha loãng (dung dịch PVA 0,1%) được khuấy trộn bằng khuấy từ.
- Bốc hơi dung môi: tiếp tục khuấy từ nhẹ nhàng để bốc hơi dung môi hữu cơ. - Sản phẩm được đánh giá các chỉ tiêu và rắn hóa.
2.3.1.3. S đồ quy trình bào chế:
Hình 2.1. S đồ quy trình bào chế tiểu phân nano
2.3.2. Phương pháp rắn h a nano fenofibrat
2.3.2.1. Tạo hạt tầng sôi
Thiết bị: Máy tầng sôi Mini – Glatt. Quy trình tiến hành:
- Chuẩn bị tá dược dính: hỗn dịch nano tương ứng 0,75 g FB được bào chế như trình bày ở mục 2.3.1 (không sử dụng pha pha loãng). Phân tán 0,15 g Aerosil vào hỗn dịch nano. Lọc hỗn dịch qua rây 0,125 mm.
18
- Chuẩn bị bột kép: Rây, cân, trộn bột kép với các thành phần trong bảng 2.3. Đưa hỗn hợp vào buồng bao.
Bảng 2.3. Thành phần bột kép
Thành phần Khố lƣợng (g)
Avicel PH 102 10
NaLS Khảo sát
Natri starch glycolat 0,4
- Phun tá dược dính đã chuẩn bị vào buồng bao với các thông số như sau:
Lưu lượng khí vào: 9,0 – 20,0 m3
/giờ
Nhiệt độ khí vào: 65 – 70oC
Nhiệt độ thực buồng bao 45o
C
Áp suất khí phun: 1,3 bar
Tốc độ phun dịch: 1,0 – 1,2 ml/phút
Đường kính vòi phun: 0,5 mm
Thời gian giũ: 4 giây/lần. - Sau khi phun hết tá dược dính, sấy hạt thêm 10 phút rồi lấy ra để bảo quản
trong túi nilon kín.
2.3.2.2. Tạo hạt ớt – tạo hạt tầng sôi
Thiết bị: Máy tầng sôi Mini – Glatt được lắp đ t với súng phun từ trên xuống. Sơ đồ quy trình:
19 Mô tả cách tiến hành:
- Bước 1: Tạo hạt ướt
Chuẩn bị tá dược dính: với PP 1 là dd PVP K30 10% trong nước, PP 2 là HD nano tương ứng 0,75 g FB được bào chế như trình bày ở mục 2.3.1.
Chuẩn bị bột kép: Nghiền, rây ( = 0,355 mm), cân, trộn bột kép với thành phần như bảng 2.3.
Tạo hạt: Nhào ẩm khối bột với lượng tá dược dính vừa đủ, ủ khối bột ẩm trong 15 – 30 phút. Xát hạt ướt qua rây 1,0 mm, sấy ở 50oC/2 giờ. Sửa hạt và chọn hạt trong khoảng k ch thước từ 0,8 – 1,0 mm.
Bảo quản trong túi nilon k n có nút kéo, để nơi khô thoáng đến khi sử dụng.
- Bước 2: Tạo hạt tầng sôi
Chuẩn bị dịch phun: với PP 1 là hỗn dịch nano tương ứng với 0,75 g FB; với PP 2 là phần hỗn dịch nano còn lại sau tạo hạt ướt. Phân tán 0,15 g Aerosil vào hỗn dịch nano. Rây hỗn dịch qua rây 0,125 mm.
Chuẩn bị nhân bồi: là hạt ướt tạo thành ở bước 1.
Tạo hạt tầng sôi: phun dịch với các thông số như mục 2.3.2.1. Sau khi hết dịch, sấy hạt thêm 10 phút.
Bảo quản trong túi nilon k n có nút kéo, để nơi khô thoáng đến khi đánh giá các chỉ tiêu chất lượng của hạt.
2.3.2.3. Tạo hạt ma g d ợc chất bằng nhựa trao đổi ion
- Chuẩn bị hỗn dịch nano: Như trình bày ở mục 2.3.1 không sử dụng pha pha loãng (tương ứng 150 mg FB).
- Chuẩn bị nhựa: Cân 5 g nhựa (thay đ i). Rửa với nước cất nhiều lần để loại các chất bẩn và bụi nhiễm vào trong quá trình sản xuất và bảo quản [49].
- Hoạt hóa nhựa bằng dd NaOH 4% trong 3 giờ. Sau đó nhựa được trung tính lại bằng nước [49].
- Nạp nano vào nhựa: Nhựa được phối hợp với hỗn dịch nano: khuấy ở các tỷ lệ khối lượng và khoảng thời gian (khảo sát).
20
- Thu sản phẩm: Rửa sản phẩm 2 lần với nước RO. Sấy ở nhiệt độ 50oC đến hàm ẩm 3 – 4%. Chọn hạt có k ch thước lớn hơn 0,8 mm. Bảo quản trong túi nilon kín.
2.3.3. ác phương pháp đánh giá
2.3.3.1. h g h đị h ợ g fe ofibrat
Phương pháp đo quang: Định lượng tại bước sóng 291 nm.
- Dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 10,0 mg FB cho vào bình định mức 100,0 ml; thêm 10 ml MeOH, lắc ho c siêu âm cho tan hết; b sung đủ thể tích bằng dd NaLS 0,72%. Pha loãng 10 lần bằng NaLS 0,72%. Đo độ hấp thụ dung dịch chuẩn tại bước sóng 291 nm.
- Dung dịch thử: Cân ch nh xác lượng hạt chứa khoảng 10 mg FB vào bình định mức 100,0 ml; tiến hành tương tự như dd chuẩn thu được dd có nồng độ FB khoảng 10 g/ml. Đo độ hấp thụ của các dung dịch thử.
- Tính toán, xử lý kết quả.
Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPL )
Fenofibrat trong các mẫu thử được định lượng bằng phương pháp HPLC với các điều kiện sắc ký cụ thể tham khảo theo USP 36 như sau [60]:
- Pha động: hỗn hợp methanol: dd KH2PO4 10-3 M pH 2,9 (80:20). - Dung dịch chuẩn: dd có nồng độ 60 µg/ml FB trong pha động.
- Dung dịch thử: mẫu thử định lượng, mẫu thử để đánh giá EE và LC, mẫu thử hòa tan của hạt ở mục 2.3.2.3, mẫu thử đánh giá lượng nano sau khi phân tán lại hạt tầng sôi với nước.
Mẫu chuẩn và mẫu thử được lọc qua màng lọc 0,45 µm. - Điều kiện sắc ký:
Cột sắc ký: Cột Agilent XDB – C18 (150 mm x 4,6 mm, hạt nhồi 5 µm).
Bước sóng phát hiện: 291 nm, detector DAD.
Thể tích tiêm mẫu: 20 µl.
Tốc độ dòng: 1 ml/phút.
21
Chế độ tiêm mẫu: tiêm mẫu tự động.
Tính toán và xử lý kết quả dựa vào nồng độ và diện t ch pic tương ứng.
2.3.3.2. h g h đ h gi đặc tính hệ tiểu phân nano fenofibrat a. Đ h gi hâ bố kích th ớc tiểu phân và thế zeta
Thiết bị: máy phân t ch k ch thước tiểu phân Zetasizer Nano ZS90.
Quy trình: Tiến hành pha loãng hỗn dịch bằng nước cất để chỉ số “Cou t Rate”
nằm trong khoảng 200 – 400 kcps. Mẫu pha loãng được đưa vào buồng đo ở điều kiện nhiệt độ đo 25oC.
b. Đ h gi hiệu suất mang thuốc trong tiểu phân nano
Qua tham khảo khóa luận tốt nghiệp dược sĩ của Vũ Thị An Hòa (2016) [11], tiến hành đánh giá hiệu suất mang thuốc trong tiểu phân nano như sau:
Xác định lượng dược chất tự do: Lấy chính xác một thể tích hỗn dịch chứa tiểu phân nano FB đưa vào ống ly tâm có màng siêu lọc 10 kDa. Tiến hành ly tâm 5000 vòng/phút trong thời gian 30 phút ở nhiệt độ phòng, lấy phần dịch lọc trong phía dưới màng siêu lọc tiêm vào hệ sắc ký lỏng hiệu năng cao để định lượng FB tự do.
Xác định lượng dược chất toàn phần: Lấy chính xác một thể tích hỗn dịch nano FB pha loãng trong bình định mức thích hợp để thu được nồng độ dược chất trong khoảng 1 g/ml đến 100 g/ml, cho pha động vào siêu âm cho tan hết, b sung thể tích bằng pha động. Lọc dịch toàn phần qua màng 0,45 µm rồi tiêm vào hệ sắc ký lỏng hiệu năng cao để định lượng FB toàn phần.
Hiệu suất tạo nano của d ợc chất đ ợc tính theo công thức sau:
EE (%) = Ctp - Ctd x 100% Ctp
Trong đó:
+ Ctp: Là nồng độ toàn phần của dược chất trong hỗn dịch nano (µg/ml). + Ctd: Là nồng độ tự do của dược chất trong hỗn dịch nano (µg/ml).
Hiệu suất mang thuốc của hệ tiểu phân nano:
LC (%) = mNano x 100% mHệ
22 Trong đó:
+ mNano: Khối lượng của FB được tạo thành nano (mg).
+ mHệ: T ng khối lượng của hệ nano bao gồm dược chất và tá dược sử dụng bào chế nano (mg).
2.3.3.3. h g h đ h gi một số chỉ tiêu của hạt rắn hóa a. h g h thử hòa tan
Thử độ hòa tan được tiến hành trên thiết bị thử độ hòa tan PHARMATEST với các thông số thử độ hòa tan [60]:
Môi trường thử hòa tan: dd NaLS 0,72%.
Nhiệt độ: 37 ± 0,5oC.
Thể t ch môi trường hòa tan: 900 ml.
Tốc độ cánh khuấy: 75 ± 3 vòng/phút.
Khối lượng mẫu thử: Lượng mẫu tương ứng 48 mg fenofibrat.
Thời gian thử: 30 phút.
Lấy mẫu tại các thời diểm 5, 10, 15, 20, 30 phút và lọc qua màng 0,45 µm. Xác định lượng dược chất giải phóng ra tại các thời điểm bằng phương pháp đo quang ho c HPLC.
b. Đo hổ FT-IR
Thiết bị: Máy đông khô Martin Christ Alpha 1-2 LDplus và máy quang ph hồng ngoại FT-IR 6700.
Quy trình tiến hành: Mẫu hỗn dịch nano sau khi bào chế được tiến hành đông khô với các quá trình:
Tiền đông: hỗn dịch được đưa vào tủ âm sâu (-70oC).
Đông khô: áp suất 0,1 mbar, nhiệt độ -50oC trong thời gian 24 giờ.
Nghiên cứu đo ph hồng ngoại của nguyên liệu FB, Eudragit EPO, hỗn hợp vật lý, tiểu phân nano đông khô, hạt rắn hóa được thực hiện trên máy quang ph hồng ngoại JASCO. Mẫu được trộn với bột KBr tỷ lệ khối lượng khoảng 1:20 rồi ép thành viên. Quét ph trong khoảng 4000 – 400 cm-1. Quá trình diễn ra trong điều kiện độ ẩm dưới 60%.
23
c. Đ h gi chỉ tiêu chất ợng hạt
Tỷ trọng của hạt:
- Tỷ trọng thô (dt): Là khối lượng trên một đơn vị thể tích bột, được đo bằng cách đong một thể tích bột sau đó cân khối lượng và tính dt.
- Tỷ trọng biểu kiến (dbk): Là tỷ trọng của khối bột được đo trong điều kiện rung lắc để tiểu phân được xếp đ c khít thành thể tích tối thiểu. Đo bằng cách sau khi đong bột, gõ theo một chương trình nhất định, đọc thể t ch đã xếp đ c khít. Cân khối lượng bột và tính dbk.
- Thông qua việc xác định các loại tỷ trọng của hạt, có thể đánh giá gián tiếp khả năng trơn chảy của hạt bằng cách xác định chỉ số Carr (C) theo công thức:
C =
(dbk – dt) x 100 dbk
(Chỉ số Carr từ 21 – 22 khả ă g tr chảy tốt, từ 34 – 43 khả ă g tr chảy kém, C > 45 hạt không có khả ă g tr chảy) [3].
Đánh giá độ trơn chảy của hạt
- Đ một lượng bột (khoảng 20 gam) lên phễu máy đo độ trơn chảy ERWEKA dùng phễu có đường kính 15 mm.
- Gạt bằng khối hạt trong phễu và khởi động máy.
Kết quả: Đọc tốc độ trơn chảy (gam/giây – g/s).
d. S bộ đánh giá KTTP của tiểu phân nano sau khi phân tán lại hạt tầng sôi
- Chuẩn bị: Cân ch nh xác lượng hạt tương ứng với 2,5 mg DC cho vào ống ly tâm, phân tán với chính xác 5 ml nước cất. Dùng máy lắc votex trong 1 phút. - Ly tâm 5000 vòng/phút trong 5 phút.
- Phân tích:
+ 4ml phần dịch trên đo KTTP và định lượng bằng HPLC.
Định lượng hàm lượng dược chất trong hạt tầng sôi. T nh toán lượng dược chất có trong 4ml dịch trên so với t ng lượng hạt đưa vào (%kl/kl).