Quỏ trỡnh phõn lập được tiến hành theo phương phỏp của Shirai cú cải tiến. Cỏc vi tảo sau làm giầu được xỏc định dưới kớnh hiển vi xỏc định cỏc chủng vi tảo cần phõn lập. Nhỏ 100 àl dung dịch mẫu vi tảo trờn đĩa thạch chứa mụi trường thớch hợp. Sau 7 – 10 ngày nuụi cấy ở nhiệt độ phũng với cường độ sỏng 1000 – 2000 Lux theo quang chu kỡ 10 giờ chiếu sỏng và 14 giờ tối khuẩn lạc phỏt triển trờn đĩa thạch. Khuẩn lạc sẽ được quan sỏt trờn kớnh hiển vi với độ phúng đai 100, để xỏc định sơ bộ hỡnh dạng của chủng vi tảo. Sau đú, chuyển sang độ phúng đại 40, để tỏch khuẩn lạc của chủng vi tảo cần phõn lập bằng tăm vụ trựng. Chuyển đầu tăm cú chứa khuẩn lạc chủng vi tảo vào
Viện Khoa học và Cụng nghệ Mụi trường (INEST) - ĐHBKHN - Tel: (+84.4) 8681686 - Fax: (+84.4) 8693551. 35
trong lọ penicillin cú chứa dịch thể của mụi trường nuụi cấy. Nuụi trong thời gian 5 – 10 ngày, khi sinh khối vi tảo phỏt triển, tiến hành quan sỏt kiểm tra độ tinh sạch của mẫu vi tảo phõn lõp.
II.2.2.2. Cỏc phương phỏp phõn loại vi tảo biển: 1. Phương phỏp so sỏnh hỡnh thỏi:
Quan sỏt và mụ tả hỡnh dạng tế bào trờn kớnh hiển vi quang học độ phúng đại 400, so sỏnh với cỏc tài liệu phõn loại. Cỏc tài liệu phõn loại vi tảo:
-Tảo lục phõn loại theo dựa theo cuốn sỏch: Tảo nước ngọt Việt Nam. Phõn bộ
tảo lục của tỏc giả Dương Đức Tiến,Vừ Hạnh – NXB Nụng nghiệp (1997) [5].
-Tảo silic phõn loại dựa theo cuốn sỏch: Hệ thống học thưc vật học của cỏc tỏc giả Nguyễn Nghĩa Thỡn, Đặng Thị Sy – NXB ĐH Quốc Gia (2004) [4].
-Tảo mắt phõn loại dựa theo cuốn sỏch: Algae Base của cỏc tỏc giả Guiry M.D. , Guiry G.M.,National University of Ireland (2008) [34].
-Tảo lam (vi khuẩn lam) phõn loại dựa theo cuốn sỏch: Algae Base của cỏc tỏc giả Guiry M.D. , Guiry G.M.,National University of Ireland (2008) [34], Vi tảo của tỏc giả Nguyễn Lõn Dũng, Nguyễn Thị Hoài Hà [3].