+ Nguyên lý
Virus Newcastle có khả năng ngưng kết hồng cầu. Khi hồng cầu được rửa sạch bằng nước sinh lý 8,5% sẽ bộc lộ ra những thụ thể bề mặt và virus Newcastle sẽ kết hợp với hồng cầu qua những thụ thể này. Kết quả là hồng cầu sẽ dàn đều trong giếng của đĩa nhựa microplate chữ U khi thực hiện phản ứng. Đây là đặc điểm quan trọng để xác định một cách gián tiếp sự hiện diện của virus, và dùng định lượng và chuẩn độ kháng nguyên virus Newcastle dùng cho phản ứng HI.
+ Thành phần phản ứng
Kháng nguyên là vaccine chủng Lasota pha trong dung dịch nước sinh lý 0.85 %.
Nước sinh lý 0,85%
Hồng cầu gà pha loãng 1% trong nước sinh lý. Tiến hành phản ứng HA.
Dùng micropipet nhỏ 25 l nước sinh lý vào 12 giếng của đĩa nhựa microplate.
Cho vào giếng thứ nhất 25l kháng nguyên, như vậy kháng nguyên được pha loãng 1/2 trong nước sinh lý, trộn đều rồi hút 25l của giếng thứ nhất chuyển sang giếng thứ 2 và làm tiếp tục cho đến giếng thứ 11 rút bỏ 25l. Giếng thứ 12 làm đối chứng hồng cầu, chỉ có 25l nước sinh lý và 25l huyễn dịch hồng cầu gà 1%.
Thêm vào mỗi giếng 25l hồng cầu 1%, lắc nhẹ đĩa nhựa để trộn đều kháng nguyên và hồng cầu; để ở nhiệt độ phòng thí nghiệm, đọc kết quả sau 30 phút.
+ Đọc kết quả phản ứng HA
Dương tính: xảy ra hiện tượng ngưng kết hồng cầu.
Âm tính: hồng cầu tụ lại thành một cụm tròn nhỏ ở đáy giếng.
Hiệu giá ngưng kết của kháng nguyên là độ pha loãng cuối cùng của kháng nguyên còn khả năng ngưng kết và được gọi là một đơn vị ngưng kết hay 1 đơn vị HA.
Bảng 3.3 Trình tự tiến hành thực hiện phản ứng HA