- Đế cụm hoa để lộ rừ cỏc cỏnh hoa sau khi nở.
3.3.2. Kết quả phản ứng PCR-RAPD
Sau khi hoàn thành phản ứng PCR - RAPD, sản phẩm nhõn bản được điện di trờn gel agarose 1,0% để phõn tớch đa hỡnh ADN của cỏc mẫu nghiờn cứu. Kết quả phõn tớch PCR - RAPD của 5 mẫu hoa cỳc với tổng số 20 mồi thuộc cỏc nhúm OPA, OPC, OPM, OPN và nhúm S. Kết quả phõn tớch PCR- RAPD cho thấy 6 mồi cho đa hỡnh rừ rệt là cỏc mồi: S211, OPM6, OPM18, OPN5, OPN7, OPN18. Cỏc mồi cũn lại cho kết quả đơn hỡnh hoặc đa hỡnh khụng rừ ràng.
Dưới đõy là kết quả điện di sản phẩm PCR – RAPD với một số mồi điển hỡnh:
* Phõn tớch với mồi S211
Hỡnh 3.2: Sản phẩm PCR - RAPD của 5 mẫu hoa cỳc với mồi S211 trờn gel agarose 1,0%, (M: marker 1kb)
1 – A0 (đ/c) ; 2 – A3 ; 3 – A7 ; 4 – A8 ; 5 – A15
Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 5 mẫu hoa cỳc với mồi S211 thu được tổng số 20 băng với 4 loại băng ở cỏc kớch thước khỏc nhau và đều là băng đơn hỡnh. Kớch thước cỏc băng từ khoảng 550bp đến 1450bp. Cỏc băng tỏch biệt, rừ ràng và đậm nột (hỡnh 3.2).
* Phõn tớch với mồi OPM6
Hỡnh 3.3: Sản phẩm PCR - RAPD của 5 mẫu hoa cỳc với mồi OPM6 trờn gel agarose 1,0%, (M: marker 1kb)
1 – A0 (đ/c) ; 2 – A3 ; 3 – A7 ; 4 – A8 ; 5 – A15
Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 5 mẫu hoa cỳc với mồi OPM6 thu được tổng số 45 băng với 13 loại băng ở cỏc kớch thước khỏc nhau, trong đú 10 băng đa hỡnh và 3 băng đơn hỡnh. Mẫu 2 xuất hiện một băng cỏ biệt ở vị trớ cú kớch thước khoảng 500bp. Mẫu 1 khuyết hai băng ở vị trớ cú kớch thước khoảng 2400bp và 2000bp, mẫu 2 khuyết tỏm băng lần lượt ở cỏc vị trớ cú kớch thước 2400bp, 2000bp, 1300bp, 1100bp, 700bp, 600bp, 400bp, 350bp. Mẫu 3 khuyết hai băng ở vị trớ cú kớch thước 500bp, 250bp. Mẫu 4
khuyết hai băng ở vị trớ cú kớch thước khoảng 800bp và 500bp. Mẫu 5 khuyết ba băng lần lượt ở cỏc vị trớ 800bp, 700bp và 500bp. Kớch thước cỏc băng dao động từ khoảng 250bp đến 2400bp. Cỏc băng tỏch biệt, rừ ràng và đậm nột (hỡnh 3.3).
* Phõn tớch với mồi OPM18
Hỡnh 3.4: Sản phẩm PCR - RAPD của 5 mẫu hoa cỳc với mồi OPM18 trờn gel agarose 1,0%, (M: marker 1kb).
1 – A0 (đ/c) ; 2 – A3 ; 3 – A7 ; 4 – A8 ; 5 – A15
Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 5 mẫu hoa cỳc với mồi OPM18 thu được tổng số 52 băng với 12 loại băng ở cỏc kớch thước khỏc nhau, trong đú 2 băng đa hỡnh và 9 băng đơn hỡnh, 1 băng cỏ biệt (mẫu 2 xuất hiện
một băng cỏ biệt ở vị trớ cú kớch thước khoảng 850bp). Mẫu 1 khuyết bốn băng ở vị trớ cú kớch thước khoảng 850bp, 650bp, 450bp, 350bp. Mẫu hai khuyết bốn băng ở vị trớ lần lượt là 750bp, 650bp, 450bp, 350bp. Mẫu 3 khuyết năm băng ở vị trớ cú kớch thước lần lượt là 850bp, 750bp, 650bp, 450bp, 350bp. Mẫu 4, 5 khuyết bốn băng ở vị trớ cú kớch thước khoảng 850bp, 650bp, 450bp, 350bp. Kớch thước cỏc băng dao động từ khoảng 200bp đến 2400bp (hỡnh 3.4).
* Phõn tớch với mồi OPN5
Hỡnh 3.5: Sản phẩm PCR - RAPD của 5 mẫu hoa cỳc Saphia trắng với mồi OPN5 trờn gel agarose 1,0%, (M: marker 1kb).
1 – A0 (đ/c) ; 2 – A3 ; 3 – A7 ; 4 – A8 ; 5 – A15
Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 5 mẫu hoa cỳc với mồi OPN5 thu được tổng số 52 băng, trong đú cú 11 băng là đơn hỡnh, 1 băng đa
hỡnh. Mẫu 1, 4 và 5 đều khuyết một băng ở vị trớ 350bp. Kớch thước cỏc băng từ 350bp đến 2400bp. Cỏc băng tỏch biệt, rừ ràng và đậm nột (hỡnh 3.5).
* Phõn tớch với mồi OPN7
Hỡnh 3.6: Sản phẩm PCR - RAPD của 5 mẫu hoa cỳc với mồi OPN7 trờn gel agarose 1,0%, (M: marker 1kb)
1 – A0 (đ/c) ; 2 – A3 ; 3 – A7 ; 4 – A8 ; 5 – A15
Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 5 mẫu hoa cỳc với mồi OPN7 thu được tổng số 33 băng, trong đú cú 6 băng là đơn hỡnh, 1 băng đa hỡnh. Mẫu 2, 4 đều khuyết một băng ở vị trớ 300bp. Kớch thước cỏc băng từ 300bp đến 1300bp. Cỏc băng tỏch biệt, rừ ràng và đậm nột (hỡnh 3.6).
* Phõn tớch với mồi OPN18
Hỡnh 3.7: Sản phẩm PCR - RAPD của 5 mẫu hoa cỳc với mồi OPN18 trờn gel agarose 1,0%, (M: marker 1kb).
1 – A0 (đ/c) ; 2 – A3 ; 3 – A7 ; 4 – A8 ; 5 – A15
Kết quả điện di sản phẩm PCR - RAPD của 5 mẫu hoa cỳc với mồi OPN18 thu được tổng số 41 băng, trong đú cú 8 băng là đơn hỡnh, 1 băng đa hỡnh. Mẫu 1, 2, 3 và 4 đều khuyết một băng ở vị trớ 2000bp. Kớch thước cỏc băng từ 300bp đến 2000bp (hỡnh 3.7).
Bảng 3.2: Thống kờ số băng ADN thu được của cỏc mẫu hoa cỳc nghiờn cứu với 20 mồi PCR – RAPD
Số băng ADN thu được trờn từng mồi
Mồi Mẫu 1 2 3 4 5 Tổng OPN10 3 3 3 3 3 15 OPN11 4 4 4 4 4 20 OPN5 10 11 11 10 10 52 OPN6 8 6 6 7 7 34 OPN7 7 6 7 6 7 33 S201 11 9 9 11 11 51 S211 4 4 4 4 4 20 S239 8 8 8 8 8 40 OPM18 11 10 9 11 11 52 OPA2 5 5 5 5 5 25 OPM9 6 7 5 6 6 30 OPA18 1 1 1 1 1 5 OPM6 8 5 11 11 10 45 OPM12 2 4 4 2 3 15 S285 6 4 4 6 6 26 OPC2 9 9 9 9 9 45 S256 7 7 7 7 7 35 OPN4 5 4 4 5 5 23 OPN16 5 5 5 5 5 25 OPN18 8 8 8 8 9 41 Tổng 128 120 124 129 131 632
Qua bảng 3.2 cho thấy:
- Với 100 phản ứng PCR - RAPD nhõn lờn được tổng số 632 băng ADN thuộc 144 loại băng cú kớch cỡ khỏc nhau. Trong đú 107 băng đơn hỡnh, chiếm 74,3% và 37 băng đa hỡnh, chiếm 25,7%.
- Kớch thước băng cú chiều dài nhỏ nhất khoảng 200bp và băng cú kớch thước lớn nhất khoảng 2400bp.
- Mồi OPM18 và mồi OPN5 nhõn lờn số băng nhiều nhất (52 băng). Mồi OPM6 nhõn lờn số băng ớt nhất (5 băng), số lượng cỏc băng được nhõn lờn đối với mỗi mồi trung bỡnh là 126,4 băng/mồi.