+ Máy HPLC phải được kiểm chứng theo định kỳ để bảo đảm máy họat động tốt cho kết quả phân tích có độ đúng,độ lặp lại,tuyến tính,tỷ lệ dung môi ,tốc đô dòng,năng lượng đèn ....đúng theo yêu cầu thông số của máy do nhà sản xuất đặt ra .
+ Đặc biệt cột sắc ký phải được kiểm tra về số đĩa lý thuyết theo định kỳ hay khi có nghi ngờ về khả năng tách ,và rửa đúng qui định sau mỗi lần chạy sắc ký :
vd : Với sắc ký pha thuận NP-HPLC : rửa bằng MeOH
Không rưẳ bằng Nước
Với sắc ký pha đảo RP-HPLC : Khi chạy pha động có các loại muối thì phải rửa nước trước cho sạch muối ,sau đó rửa
-Tỷ lệ ACN hay MeOH : Nước ( 50 : 50 ) cho sạch hết các chất còn đọng lại trong cột đồng thời để bảo vệ cột không bị Mốc khi để lâu . Tuyệt đối tình trạng chỉ rửa bằng nước 100% sau đo để cột một thời gian không sử dụng chắc chắn cột sẽ bị mốc ,hỏng không thể dùng được . Xin lưu ý nếu rưẳ cột không tốt thì kết quả chạy sắc ký sẽ không thể đáp ứng được các yêu cầu phân tích .
4.2 - Chuẩn bị dung môi pha động :
Các dung môi dùng cho sắc ký là loại tinh khiết HPLC Các hóa chất dùng phải là loại PA
Pha dung môi đúng ,chính xác theo đúng tỷ lệ đã nêu ,để ổn định dung môi đúng thời gian theo chuyên luận đã yêu cầu .Lọc
dung môi qua màng lọc 0.2 - 0.45 µm ,Siêu âm đuổi bot khí
-4.3 Chuẩn bị mẫu đo HPLC :
+ Mẫu Thử : Sử lý mẫu thử theo đúng chuyên luận ,qui trình theo nguyên tắc :
- Dung môi hòa tan hoạt chất phải hòa tan trong pha động ,trong nhiều trường hợp dùng dung môi pha động để hòa tan mẫu
- Phải loại bỏ các chất không tan trong pha động hoặc không rưẳ giải được bằng cách lọc hay chiết ..
-Phải lọc và ly tâm ,lọc mẫu qua màng lọc 0.2 - 0.45 µm - Nồng độ mẫu ở mức vừa phai,không vượt qua kha năng tach cua cột.Co thê gây ra nghen cột.
-Mẫu chuẩn :
Pha dung dịch chuẩn có thành phần giống như mẫu thử trong cùng dung môi ,riêng về nồng độ các thành phần giông như mẫu thử là tốt nhất ,ngoài ra có thể dùng nồng độ khác nhưng phải nằm trong khoảng tuyến tính đã khảo sát của từng thành phần.
4.4 Cach đo HPLC :
Mỗi may co cach vận hanh khac nhau tuy thuôc vao hang san xuất ,phần mên săc ky . Tuy nhiên cach vận hanh luôn phai theo nguyên tăc sau :
+ Chạy may với dung môi pha động đê đuoi hêt bot khí co trong hê thống ống dẫn trước khi cho vao cột.
+ Đặt đầy đủ các điều kiện sắc ký như : * Cấu hình máy * Cấu hình máy
* Tỷ lệ các dung môi pha động
* Bước sóng,thành phần mẫu, các thông số của quá trình phân tích yêu cầu . số của quá trình phân tích yêu cầu .
Phần VHệ thống sắc ký Merck - Hitachi Hệ thống sắc ký Merck - Hitachi và phần mềm điều khiển D7000 – Multi HSM manager (S b sung sau)ẽ ổ Người viết
KS Phan Hiền Lương