của các loài Listeria bằng Multiplex
PCR
Sử dụng gen iap. Thiết kế 5 mồi khác nhau để xác định các loài Listeria bằng Multiplex
• Ino 2[5’-ACTAGCACTCCAGTTGTTAAAC-3’]
Khuếch đại đoạn gene của L.innocua dài 870bp • Siwi 2[5’-TAACTGAGGTAGCGAGCGAA-3’]
Khuếch đại đoạn gene của nhóm L.ivanovii, L.seeligeri và L.welshimeri dài 1,2kb.
• Mono A[5’-CAAACTGCTAACACAGCTACT-3’]
Khuếch đại đoạn gene của L.monocytogenes dài 660bp
• Primer Mugrad
Khuếch đại đoạn gene của L.gayi và L.murrayi
dài 480bp
• Lis 1B[5’-TTATACGCGACCGAAGCCAAC-3’] Đặc hiệu cho loài Listeria
Xác đinh và phân biệt các loài Listeria dựa trên
Multiplex PCR chứa 5 primers MugraI, MonoA, Ino2, and Siwi2, and Lis1B (Lis-Mix). Thực hiện phản ứng trong 30 chu kỳ (biến tính ở 95°C/15 giây, bắt cặp 58°C/30 giây, kéo dài 720C/45 giây) với lane 1 chuẩn
III: Kết luận
• Càng ngày có nhiều nguy cơ gây hại cho sức khỏe của con người và vật nuôi, Listeriosis là
một trong những nguy cơ nguy hiểm và nó càng đáng quan tâm hơn khi nguyên nhân xảy ra hiện diện ở khắp mọi nơi đặc biệt là trong thức ăn
của con người. Sử dụng phương pháp truyền thống để nhận biết sự tồn tại của Listeria đòi hỏi phải thực hiện các phản ứng sinh hóa như lên men đường, CAMP…trong phòng thí nghiệm và tiến trình này cần thời gian tối thiểu là 7 ngày
Điều này không đáp ứng được yêu cầu trong chẩn đoán bệnh nhất là khi bộc phát dịch bệnh. Với sự ra đời và được cải tiến từng bước kỹ
thuật PCR là phương pháp nhanh, nhạy, chính xác để xác định vi khuẩn Listeria nói chung và
L.monocytogenes nói riêng. Mặt khác hiệu quả
của PCR còn được tăng lên rất nhiều lần khi sử dụng kết hợp với phương pháp IMS. Thêm vào đó cải tiến PCR ta có được Multiplex PCR
phương pháp này cho phép ta phân biệt rõ ràng giữa các loài Listeria, vì cho dù chỉ có
L.monocytogenes là tác nhân gây bệnh thực sự
nguy hiểm nhưng trên thực tế sự tồn tại của loài này không nhiều thì ít cũng có liên quan đến sự