2.1. Mẫu thực vật
Cây Na rừng được thu hái năm 2008 tại Sa Pa (Lào Cai), mẫu cây đã được giám định tại Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
Mẫu tiêu bản được lưu giữ tại Viện Hóa học các Hợp chất thiên nhiên, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
2.2. Phƣơng pháp xác định cấu trúc hóa học các hợp chất
2.2.1. Điểm nóng chảy (Mp)
Điểm nóng chảy được đo trên máy Kofler micro-hotstage của Viện Hóa học các Hợp chất thiên nhiên, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
2.2.2. Độ quay cực [ỏ] D
Độ quay cực được đo trên máy JASCO DIP-1000 KUY polarimeter của Viện Hóa học các Hợp chất thiên nhiên, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
2.2.3. Phổ khối lượng (FAB-MS và ESI)
Phổ khối lượng FAB-MS được đo trên máy JEOL JMS-DX 300 spectrometer của Viện nghiên cứu Khoa học cơ bản Hàn Quốc (KBSI). Phổ khối lượng phun mù điện tử (Electron Spray Ionization Mass) được đo trên máy AGILENT 1100 LC-MSD Trap của Viện Hóa học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
Phạm Thị Thu Thủy Lớp K31B – Khoa Hóa Học 41 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR): 1
H-NMR (500 MHz) và 13C-NMR (125 MHz) được đo trên máy Bruker AM500 FT-NMR Spectrometer, Viện Hóa học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
2.3 Dụng cụ và thiết bị
2.3.1. Dụng cụ và thiết bị tách chiết
Các dụng cụ và thiết bị dùng cho tách chiết và tinh chế chất sạch được sử dụng bao gồm:
+ Bình chiết 30 lít
+ Máy cất quay chân không
+ Đèn tử ngoại hai bước sóng 254 và 368 nm + Tủ sấy chân không
+ Máy sấy + Micropipet
+ Bình sắc ký loại phân tích và điều chế + Cột sắc ký pha thường các loại đường kính + Cột sắc ký pha đảo trung áp
+ Máy phun dung dịch thuốc thử + Bếp điện
2.3.2. Dụng cụ và thiết bị xác định cấu trúc
+ Máy phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR AM500 FT-NMR Spectrometer + Máy sắc ký lỏng cao áp ghép nối khối phổ (ESI) AGILENT 1100 LC- MSD Trap Spectrometer
Phạm Thị Thu Thủy Lớp K31B – Khoa Hóa Học 42 + Thiết bị đo độ quay cực JASCODIP-1000 KUY polarimeter
2.4. Hóa chất
+ Silica gel 60 (0,04-0,63 mm) merck
+ Silica gel pha đảo ODS hoặc YMC (30-50nm, Fujisilica Chemical Ltd.).
+ Bản mỏng tráng sẵn pha thường DC-Alufolien 60 F254 (merck 1.05715) + Bản móng tráng sẵn pha ngược RP18 F254s (Merck)
+ Bản mỏng điều chế pha thường DC-Alufolien 60 F254 (Merck)
+ Các loại dung môi hữu cơ như methanol, etanol, ethyl acetate, chlorofom, hexane, aceton v.v… là loại hóa chất tinh khiết của Merck.
2.5. Phân lập các hợp chất
2.5.1. Phương pháp phân lập các hợp chất
a) Sắc ký lớp mỏng (TLC)
Sắc ký lớp mỏng được thực hiện trên bảng mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60 F254 (Merck 1,05715), RP18 F254s (Merck). Phát hiện chất bằng đèn tử ngoại ở hai bước sóng 254 nm và 368 nm hoặc dùng thuốc thử là dung dịch H2SO4 10 % được phun đều lên bản mỏng, sây khô rồi hơ nóng trên bếp điện từ từ đến khi hiện màu.
b) Sắc ký lớp mỏng điều chế
Sắc ký lớp mỏng điều chế thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn silicagel 60G F254 (Merck, ký hiệu 105875), phát hiện vệt chất bằng đèn tử ngoại hai bước sóng 254 nm và 368 nm, hoặc cắt rìa bản mỏng để phun thuốc thử là dung dịch H2SO4 10%, hơ nóng để phát hiện vệt chất, ghép lại bản mỏng như cũ để
Phạm Thị Thu Thủy Lớp K31B – Khoa Hóa Học 43 xác định vùng chất, sau đó cạo lớp silicagel có chất, giải hấp phụ và tinh chế lại bằng cách kết tinh trong dung môi thích hợp.
c) Sắc ký cột (CC)
Sắc ký cột được tiến hành với chất hấp phụ là silicagel pha thường và pha đảo. Silicagel thường có cỡ hạt là 0,040-0,063mm (240-430 mesh). Silicagel pha đảo ODS hoặc YMC (30-50 nm, Fujisilica Chemical Ltd.).
2.5.2. Quy trình phân lập các hợp chất
Quy trình chiết xuất và phân lớp các hoạt chất.
Cặn clorofooc KC1 (20 g)
Bổ sung EtOAc
Rễ Na rừng Kadsura coccinea khô (2 kg)