Khảo sát sự phụ thuộc tuyến tính của diện tích pic và nồng độ các chất cần định lượng trên các chất chuẩn paracetamol và acid meíenamic. Tiến hành pha một dãy dung dịch hỗn hợp chuẩn có nồng độ của paracetamol biến thiên trong khoảng 20 -> 200 |Lig/ml và của acid meíenamic biến thiên trong
khoảng 10 -> 100 |ig/ml . Xác định sự phụ thuộc tuyến tính giữa nồng dộ và diện tích pic của các chất bằng phương trình hồi quy và hệ số tương quan.
Tiến hành :
- Dung dịch chuẩn gốc : Cân chính xác khoảng 0,1 g chất chuẩn paracetamol chuẩn và khoảng 0,05 g chất chuẩn acid meíenamic cho vào bình định mức 50,0 ml , thêm 5 ml THF để hoà tan. Thêm dung môi pha động đến vạch. Được dung dịch chuẩn gốc có nồng độ của paracetamol khoảng 2 mg/ml và của acid mefenamic khoảng 1 mg/ml
- Từ dung dịch chuẩn gốc trên pha loãng bằng dung môi pha động để được các dung dịch hỗn hợp chuẩn có nồng độ của paracetamol biến thiên trong khoảng 20 -> 200 |0.g/ml và của acid meíenamic trong khoảng 10 -> 100 ng/ml (Bảng 4)
Bảng 4 : Nồng độ các dung dịch hỗn hợp chuẩn (jUg/ml)
Dung dịch 1 2 3 4 5
Paracetamol 20,32 40,64 81,28 162,56 203,20 Acid meíenamic 9,95 19,91 39,81 79,63 99,54
Tiến hành chạy sắc ký lần lượt các dung dịch trên trong điều kiện sắc ký đã chọn ở phần khảo sát lựa chọn điều kiện sắc ký . Kết quả khảo sát độ tuyến tính của hai chất được trình bày ở bảng 5 và mô tả ở hình 4 và 5
Bảng5: Kết quả khảo sát độ tuyến tính giữa nồng độ và diện tích pic các chất
Khối lượng cân chuẩn
Hoạt
chất Paracetamol Acid meíenamic
Paracetamol: 0,1016 Dung dịch Nồng độ (ng/ml) Diện tích pic Nồng độ (ng/ml) Diện tích pic g 1 20,32 401,6 9,95 456,1 Acid meíenamic : 0,0501 g 2 40,64 803,6 19,91 938,6 3 81,28 1568,8 39,81 1883,1 4 162,56 3098,5 79,63 3650,3 5 203,20 3901,4 99,54 4711,9
Khoảng nồng độ khảo sát 20 -> 200 |ig/ml 10 -> 100 |ng/ml Phương trình hồi quy y = 19,04 X + 20,07 y = 46,8 X - 4,12
Hệ số tương quan r = 0,9999 r = 0,9996
❖ Nhận x é t :
Trong một khoảng nồng độ khảo sát khá rộng, nồng độ của paracetamol biến thiên trong khoảng 20 -> 200 H-g/ml và của acid meíenamic trong khoảng từ 10 đến 100 ỊLig/ml, có sự phụ thuộc tuyến tính giữa diện tích pic và nồng độ các chất khảo sát với hệ số tương quan rất gần 1 (từ 0,9996 đến 0,9999), chứng tỏ sự tương quan tuyến tính rất chặt chẽ giữa nồng độ và diện tích pic của các chất. Trên cơ sở đó chúng tôi lựa chọn nồng độ để định lượng các chế phẩm nằm trong khoảng tuyến tính đã khảo sát : paracetamol có nồng độ khoảng 80 |Lig/ml và acid mefenamic có nồng độ khoảng 40 n-g/ml
Paracetamol
Diện tích pic
4500 1
0 50 100 150 200 250
Nồng độ (mcg/ml)
Hình 4 : Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc tuyến tính nồng độ và diện tích pic của paracetamol
Hình 5 : Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc tuyến tính nồng độ và diện tích pic của acid mefenamic