g. Nhận xét đối với sinh viện thực hiện đề tài:
4.3.2 Khảo sát phân đoạn PE VI
Phân đoạn PE VI có 2 vết chính có Rf khá xa nhau và khối lượng khá nhiều nên được tiếp tục sắc ký cột thường để tách chất. Tiến hành sắc ký cột thường phân đoạn PE VI với các số liệu như sau:
Đường kính cột: 1 cm.
Khối lượng pha tĩnh (silica gel 60 F254): 5 g.
Khối lượng mẫu: 0,2 g.
Chiều cao cột silica gel: 12 cm.
Dung môi ổn định cột: petroleum ether 100%.
Phương pháp nhồi cột: nhồi cột ướt.
Dung môi triển khai cột ban đầu là PE, sau đó dùng hệ dung môi PE:EA (tăng dần tỷ lệ EA).
Dung dịch ra khỏi cột được hứng vào các lọ với thể tích như nhau. Sau đó chấm TLC các lọ theo thứ tự, các lọ có vết giống nhau được gom chung lại. Các vết chấm được so sánh trong cùng một bản mỏng và cùng một hệ dung môi giải ly bản mỏng để việc so sánh giá trị Rf dễ dàng. Dung dịch hiện hình bản mỏng là vanillin trong H2SO4.
Kết quả sắc ký phân đoạn PE VI được trình bày trong bảng sau: Bảng 3 Kết quả sắc ký cột thường phân đoạn PE VI
Phân đoạn
Thứ tự lọ
Dung môi triển khai cột
Dung môi giải ly bản mỏng
Kết quả TLC
VI-1 1-5 PE 100% PE:EA = 7:3 Không có vết VI-2 6-17 PE:EA = 99:1 PE:EA = 7:3 1 vết tạp
VI-3 18-30 PE:EA = 97:3 PE:EA = 7:3 1 vết màu xanh lá, có vết mờ ở dưới VI-4 31-45 PE:EA = 95:5 PE:EA = 7:3 1 vết màu xanh lá, 2
vết mờ ở dưới VI-5 46-52 PE:EA = 90:10 PE:EA = 7:3 1 vết màu xanh đậm VI-6 53-65 PE:EA = 90:10 PE:EA = 7:3 nhiều vết tạp
Xả cột Me
Sau khi tiến hành sắc ký cột, ở phân đoạn PE VI-5 thu được một chất có dạng bột màu cam, khảo sát TLC chất này với 3 hệ dung môi khác nhau chỉ cho 1 vết cho thấy đây là chất sạch, gọi là chất T2.
38
Hình 24 Chất sạch T2
Kết quả khảo sát TLC của chất T2 với 3 hệ giải ly khác nhau được trình bày trong hình 25.
Hình 25 Kết quả TLC chất T2 trong 3 hệ dung môi khác nhau
(1) Hệ giải ly EA:Me = 10:1 (Rf = 0,77) (2) Hệ giải ly PE:EA = 1:1 (Rf = 0,59) (3) Hệ giải ly He:EA = 7:3 (Rf = 0,21)