pleuropneumoniae
Ph ng pháp chu n b môi tr ng th ch chocolate
Môi tr ng Tryptic soy agar c autoclave 1200C trong 20 phút. Sau ó b sung 5% máu c u 450C; các lo i kháng sinh bacitracin v i n ng 300 µg/ml, crystal violet và lincomycin 1 µg/ml, nystatin n ng 50 µg/ml c s d ng di t n m. H n h p môi tr ng sau cùng c nung 800C trong 10 phút (Jacobsen and Nielsen, 1995).
Ph ng pháp nuôi c y và phân l p vi khu n A. pleuropneumoniae
Tr c khi nuôi c y trên môi tr ng chuyên bi t m u h ch h nh nhân và ph i ph i c vô trùng b m t xung quanh m u, v trí m u c n l y c t cháy b
t; sau ó dùng k p và kéo vô trùng c t m t ph n mô b nh tích sâu phía trong tránh t p khu n. C t nh m u b ng kéo vô trùng r i ng nh t m u v i dung ch phosphate buffered saline (PBS) pH 7.2, dùng máy vortex l c u m u trong 30 giây nh m m b o ng u c a m u. Ti p theo, dùng pipett rút 100 µl huy n d ch này cho lên môi tr ng th ch chocolate r i chan u ra m t a n khi khô hoàn toàn (Tonpitak, 2010).
+ M u c c y trên môi tr ng th ch chocolate, sau khi c y xong em trong u ki n y m khí tùy nghi (5 – 10% CO2)/37oC, sau 24 – 48 gi khu n l c b t u m c.
+ Ti n hành ch n nh ng khu n l c n hình c y chuy n trên môi tr ng th ch chocolate làm thu n. Ti p t c trong u ki n y m khí tùy nghi (5 – 10% CO2)/37oC, sau 24 – 48 gi khu n l c b t u m c.
+ Ti n hành ph t kính nhu m Gram xem hình thái vi khu n t các khu n l c ã thu n khi t. Sau ó c y chuy n khu n l c vào môi tr ng ki m tra c tính sinh hóa. Khi có k t qu ki m tra sinh hóa, y chuy n vi khu n lên môi tr ng th ch chocolate m t l n n a t o u ki n cho vi khu n nhân lên. Sau ó ti n hành ly trích DNA và gi gi ng vi khu n.
Quy trình nuôi c y, phân l p vi khu nA. pleuropneumoniae c th hi n qua s hình 3.1
Hình 3.1: Quy trình nuôi c y phân l p vi khu nActinobacillus(Quinn, 2011) Ki m tra c tính sinh hóa
y m khí (5-10% CO2)/37oC
Ch n khu n l c n hình
Nhu m Gram u
Môi tr ng Chocolate Agar
Làm thu n trên môi tr ng Chocolate Agar
y m khí (5-10% CO2)/37oC
Ly trích DNA Gi gi ng
Ph ng pháp nh danh vi khu n A. pleuropneumoniae b ng các ph n ng sinh hóa
a vào nh ng ch tiêu sinh hóa c a Quinn (2011) nh danh vi khu n A. pleuropneumoniae.
ng 3.1: c tính sinh hóa c a các ch ngActinobacillus(Quinn, 2011)
Loài
Haemolysis CAMP MC Catalase Oxidase Hydrolysis of aesculin Uerese Arabinose Lactose Maltose Mannitol Sucrose Trehalose
A.
pleuropneumoniae + + - v v - + - - + v + -
A. lignieresii - - + + + - + v + + + + -
A. equuli v - + v + - + - + + + + +
A. suis + - + + + + + + + + - + +
V: variable reaction: ph n ng thay i: +: d ng tính; - : âm tính
3.2.3 Ph ng pháp nh danh vi khu n A. pleuropneomoniae d a vào genec t ApxIVA(Sthitmateeet al.,2003)