Trong y hoc cơ truyên, TTT thuơfng duoc dùng làm thuơc chüa liêt duong, di tinh, dau lung, dau nhüc gân xuong, tiêu hơa kém vơi liêu dùng là 6-12g/ngày, dang thuơc sac hay thuơc bot. Ngồi ra, cơn duoc dùng trong sân khoa de tri chüng thân hu, thai dơng, doa sây, thuơng phoi hop vơi câc vi thuơc nhu tue doan, tang kÿ sinh, dơ trong dë bơ thân, an thai hay dùng dë tri chüng tiêu khât, tri mât mơ, hoa mât do thân hu, can thân bât tüc (thuơfng gàp à nguci già) và tri bach diê'n phong.
PHÂN 2 - NGUYÊN LIÊU, DƠI Tl/ONG VÀ PHI/ONG p hA p n g h i ê n ctru
2.1. NGUYÊN LIÊU
Vi thuơ'c Thơ ty tir do Cơng ty Cơ phân duoc phâm Trung uong Mediplantex cung cap, dat câc tiêu chuân cûa DDVNIII.
• Phuong phâp chébién: thé hiên à hỵnh 2.1.
Hỵnh 2.1. Câc giai doan bào che thơ ty tü
• Mơ ta câc giai doan bào che: TTT sau khi lâ'y vê, duac loai bơ tap chat, rira sach bang nuơc sinh hoat, sau dơ cho TTT vào nơi, bơ sung nuơc, dun soi, ha
nhơ lûa, tiê'p tue dun trong vơng lh (sàc làn 1), nuơc sàc thu duac loc qua gac de duoc dich chiê't làn 1. Bâ duac lâ'y ra de sàc tiê'p làn 2 và làn 3 tuang tu nhu làn 1. Gơp tồn bơ dich chiê't cüa 3 làn lai, cơ câch thuÿ duac cao long 1:1,5 (lOOmg: 150ml).
2.2. DOI Tl/ONG NGHIÊN CÜU
• Chuơt cơng tràng, giơ'ng duc, do Hoc viên Quân y cung cap, gơm 2 loai: chuơt cơng non 2 thâng tuoi cơ trong lüçmg trung blnh 60-80g và chuơt cơng truơng thành 4 thâng tuơi cơ trong luçmg trung bỵnh,120-130g.
• Chuơt nhât trâng chüng Swiss, câ 2 giơng, do phơng chàn nuơi Viên vê sinh dich tê TW cung cap, cân nâng trung bỵnh 18-20g.
• Tàt câ chuơt duac nuơi trong phơng thi nghiêm vơi cùng diêu kiên nhiêt dơ, dơ âm. Chuơt duac nuơi bâng thüc ân cơng nghiêp mua cüa viên Vê sinh dich tê Trung uang sân xuât dû tiêu chuân vê dinh duơfng và nuơc uơng duac cung cap dây dû.
2.3. PHÜÛNG PHÂP NGHIÊN CÛU
2.3.1. Tâc dung cüa thơ ty tuf lên churc nâng sinh sân nam
Thü nghiêm duac tien hành trên 3 dơi tuçmg: chuơt cơng trâng duc non thién, khơng thién và chuơt truơng thành, su dung test sàng loc cüa Hershberger [22,28].
2.3.1.1. Nghiên cûu trên nhơrn dơi tuang chuơt cơng duc non khơng thién
Chuơt cơng trâng duc 60-80g, duac chia thành 3 lơ, mơi lơ 10 con: Lơ 1 (Chüng): Uơng NaCl 0,9% (3ml/100g).
Lơ2 (TES): Tiêm duơi da dùi dung dich TES trong dàu ơliu 0,4mg/kg thé trong (0,2ml/100g).
Lơ 3 (ITT): Uơng dich chiê't TTT 20g/kg (3ml/100g).
Chuơt duçfc uơng và tiêm thuơc liên tue trong 10 ngày. Sau ngày thü 5, cân lai trong luang chuơt de tmh liêu mơi nham cơ su phù hop giüa liêu thuơc vơi su tâng trong luang chuơt. Ngày thü 11 cân lai trong luang chuơt. Sau dơ giê't chuơt bâng cloroform, mơ tâch lây câc ca quan sinh duc là tinh hồn, tuyén tiên liêt, tüi tinh, tuyén cowper rơi dem cân câc ca quan này trên cân phân tich. Kê't quâ duac tmh bâng trong luçmg cüa câc ca quan trên so vơi 100g trong luçmg ca thé và duac so sânh giüa câc lơ, câc sơ liêu duac xü lÿ theo phuang phâp t-test student, su dung phàn mêm SPSS 13.0.
2.3.1.2. Nghiên cûu trên nhơm âơi tuang chuơt cơng duc non thién
Thi nghiêm duoc tien hành tuang tir nhu trên, nhung truơc khi thi nghiêm 1 ngày, tat câ câc chuơt déu duac thién.
* Kÿ thuât thién nhu sau:
Truơc hét, gây mê chuơt bàng ether mê, sau dơ cơ dinh chuơt trên bàn cơ' mé. Dùng tay vuơ't doc tù o bung xuơ'ng, dë lơ 2 tinh hồn trong tüi biu. Sât trùng vùng da biu bàng cơn ethanol 70°, dùng kéo rach mot duơng giûa da biu, bơc lơ 2 tinh hồn, mot nguơi dùng kep nâng 2 tinh hồn lên cao và ra phia truơc trong khi mot nguơi khâc dùng chỵ buơc chât mơi dơng mach tinh hồn dë trânh chây mâu. Dùng kéo càt lây 2 tinh hồn, sau dơ khâu vêt mé lai, cuơ'i cùng sât trùng vùng vêt mé. Chuơt sau khi duoc thiê'n së cho vào chuơng theo düng lơ và cho ân uơ'ng binh thuơng. Ngày hơm sau, sê bât dàu cho uong và tiêm thuơc [29].
2.3.1.3. Nghiên cûu trên nhơm âơ'i tuong chuơt cơng âuc truơng thành
Thi nghiêm duoc tien hành nhu dơ'i vơi chuơt cơ'ng non khơng thiê'n, sü dung chuơt cơ'ng tràng duc dâ truơng thành, càn nàng 120-130g.
Dén ngày thü 11, sau khi cân kiëm tra trong luong chuơt làn cuơ'i thi tien hành lâÿ mâu chuơt dë làm xét nghiêm dinh luong TES. Tinh hồn cüng duoc bơc tâch theo kÿ thuât nhu trên, sau khi cân xong là cho ngay vào dung dich Bouin dë bâo quân và dua dê'n Bơ mon Mơ phơi truơng Dai hoc Y Hà Nơi dë làm tiêu ban mơ bênh hoc (thơi gian tù khi giê't chuơt dê'n khi dua té chüc di làm tiêu bân khơng quâ 4 giơ nhàm trânh hoai tü).
2.3.1.4. Sffâơ nghiên cûu
CHUƠT D ir e
Non khơng thién
Chüng TES ITT' r Non thien Chü’ng TES TTT Trurơmg thành Chüng TES TTT
Trong litqmg co quart sinh duc
Tinh hồn Tüi tinh TTL Cowper
Mơ hoc tinh hồn
TES huyêt thanh Hỵnh 2.2. Sa dơ nghiên cûu
2.3.2. Dơc tmh cap cüa thơ ty tü
Dơc tmh cap cûa TTT duac xâc dinh theo phuong phâp Litchfield- Wilcoxon [7]: cho tùng lơ chuơt nhàt tràng uơng thuơc thu vciï lieu tâng dan. Theo dơi tỵnh trang chung cüa chuơt và tÿ le chuơt chét trong vơng 72 giơ, xâc dinh liêu gây chét 50% so chuơt (LD50). Tiép tue theo dơi diên bién chuơt trong vơng 4 ngày sau do, ghi nhân câc dàu hiêu bât thuơng.
2.3.3. Xûr lÿ so liêu
Câc so liêu nghiên crïu sè duac xir lÿ theo phuang phâp t-test student, su dung phàn mêm SPSS 13.0 dé so sânh su khâc biêt giüa câc nhom nghiên ciru.
Két quâ nghiên crïu dơc tmh cap cüa TTT duac xü lÿ theo phuang phâp cüa Litchfield- Wilcoxon [7],
2.3.4. Dia diëm nghiên cufu
Tâc dung lên chiỵc nâng sinh sân nam duac tien hành tai Bơ mon Duac lÿ Trucmg dai hoc Duac Hà Nơi và Bơ mon Duac lÿ Truơrng dai hoc Y Hà Nơi. Dinh luang TES trong huyét thanh à nhom chuơt truang thành duac tién hành tai Khoa sinh hô cüa Bênh viên Phu sân Trung uang. Hỵnh ânh mơ hoc tinh hồn duac làm tai Bơ mơn Mơ phơi truơrng Dai hoc Y Hà Nơi.
PHAN 3 - KÉT QUÂ THlfC NGHIÊM VÀ BÀN LUÂN
3.1. TÂC DUNG CÜA THƠ TY TÜLÊN CHtTC NÀNG SINH SAN NAM
De dânh giâ tâc dung cûa TTT lên chüc nàng sinh sân nam, chüng tơi sü dung thü nghiêm Hershberger. Dây duoc dânh giâ là mot phuong phâp nhay câm, co giâ tri, uâng tin cây, dê tien hành và duoc lua chon cho nhüng sàng loc invivo nhàm phât hiên câc thuơc co tinh chü vân hay doi khâng vơi androgen. Thü nghiêm này dâ duoc tien hành ơ nhiêu noi trên thé giơi, dua vào su dâp üng cüa câc co quan sinh duc phu cüa chuơt cơng duc non là tüi tinh, tuyén tiên liêt và tuyén cowper [24,28].
Thü nghiêm Hershberger thuơng sü dung dơ'i tuong chuơt cơng non thién (khồng 6-12 tuàn tuoi) nhu nghiên cüu cüa Takeshi Kunimatsu và cơng su nâm 2000 vê tâc dung androgen cüa 3 thuơc Esfenvalerate, Fenvalerate và Permethrin trên nhơm chuơt duc thién 11 tuàn tuoi [27] hay nghiên cüu cüa IL Hyun Kang và cơng su vê so sânh tâc dung anti-androgen cüa câc thuơc Flutamide, Vinclozolin, Procymidone, Linuron và P,P’-DDE thuc hiên trên chuơt non thiê'n 6 tuàn tuơi [23]. Do là do chuơt cơ'ng non dang trong thơi kÿ sinh truơng phât triën manh nhât, dâc biêt là câc co quan sinh sân, nên nghiên cüu tâc dung cüa mot thuơc huong sinh duc trên chuơt cơng non së cho két quâ rơ nhât. Chuơt duoc thiê'n truơc khi nghiên cüu nhàm loai bơ tâc dơng cüa TES nơi sinh, lue này su phât triën cüa câc co quan sinh duc dà bi giâm nhiêu, và ânh huong cüa thuơc trên chüc nâng sinh sân së duoc thë hiên rơ ràng.
Trong nghiên cüu này, chüng tơi cơn tiên hành trên 2 nhơm dơ'i tuong khâc nüa dơ là chuơt cơng duc non khơng thiê'n và chuơt duc truơng thành:
• Mue dich khi nghiên cüu trên nhơm chuơt non khơng thiê'n là chüng tơi muơn dânh giâ tâc dung cüa thuơc trong diêu kiên phât triën tu nhiên, khi chüc nàng sinh sân cüa chuơt cơn binh thuơng nhàm so sânh vơi nhơm chuơt non thiê'n. • Mue dich khi nghiên cüu trên nhơm chuơt truơng thành là do ơ dơ tuơi này, câc co quan sinh sân chuơt bàt dau ơn dinh và cüng là thơi kÿ chuơt bât dau
sinh sân. Màt khâc, trong thuc té, vi thuơc TTT duoc sü dung chu yê'u dé chùa bênh trên câc doi tuong nam giơi dâ truong thành. Do vây, viêc lua chon nhom chuơt truơng thành cüng là phù hop vơi üng dung lâm sàng cüa thuơ'c. 0 nhom này, ngồi nghiên cüu câc chï sơ' sinh sân, chüng tơi cơn tiên hành dinh luong nơng dơ TES trong huyê't thanh và dânh giâ nhüng thay doi trong hỵnh thâi mơ bênh hoc tinh hồn chuơt.
Thuc tê' trên thê' giơi dâ cơ câc nghiên cüu vê tâc dung androgen cüa aiuơ'c trên câc nhom chuơt cơ'ng duc ơ câc dơ tuoi khâc nhau và khơng thién nhu nghiên cüu cüa Ray Sahelian (2002), Truơng Dai hoc Y Shantou Trung Quơ'c tiên hành nghiên cüu tâc dung cüa flavonoid tồn phân cüa TTT lên chüc nàng sinh sân nam trên câc nhom chuơt duc khơng thiê'n tù 2-24 thâng tuoi [30]. Diéu này làm chüng tơi càng vùng tin han vào viêc lua chon dơi tuçfng nghiên cüu cüa mïnh.
Nghiên cüu vê tâc dung cüa TTT lên chüc nâng sinh sân nam cüa chuơt cơ'ng tràng duc, chüng tơi thu duac nhüng kê't quâ sau:
3.1.1. Trên chuơt cơ'ng trâng duc non khơng thién
3.1.1.1. Su thay doi trong litong chuơt truơc và sau thi nghiêm
Cân trong luong chuơt truơc và sau 10 ngày làm thi nghiêm, so sânh su thay doi trong luçmg chuơt, ta thu duoc kê't quâ à hỵnh 3.1. Su thay doi trong luong chuơt khơng nhüng phân ânh diêu kiên nghiên cüu mà cơn thé hiên tâc dung cüa thuơc.
<0.001
<0.05
Lơ 1 Lơ 2 Lơ 3
9
Hinh 3.1. Anh huâng cüa TTT lên trong luang chuơt truơc và sau thi nghiêm à lơ chuơt cơng non khơng thién
Nhân xét:
Trong luçmg cüa câc lơ chuơt truơc thi nghiêm là nhu nhau (p > 0,05). Sau 10 ngày thi nghiêm, trong luçmg chuơt à câc lơ dêu tâng lên mot câch co ÿ nghỵa thơng kê, trong do lơ uơng TTT co tÿ lê tâng cao nhât tdfi 36,72% vơi p < 0,001. Khơng co khâc biêt vê su tâng trong luçmg giùa câc nhom nghiên ciru, diêu này chüng tơ chuơt à câc lơ duac nuơi trong diêu kiên thi nghiêm nhu nhau.
3.1.1.2. Tâc dung cüa TTT lên su phât trién cüa tinh hồn a chuơt cơng non khơng thién
Két thüc dçrt nghiên cuu, giét chuơt bâng cloroform, bơc tâch tinh hồn tùng con; roi dem cân roi tmh tÿ lê trong luçmg câc ca quan này so vơi trong luçmg tồn cơ thé, so sânh giûa nhom dùng thuơc voti nhom chüng và nhom dùng TES. Su thay doi trong luçmg tinh hồn phân ânh tâc dung cüa thuơc lên câc co quan sinh sân nam. Két quâ duçfc thé hiên à bâng 3.1:
Bang 3.1. Ânh huơng cüa TTT lên trong luong tinh hồn ơ lơ chuơt cơng non khơng thién
Lơ Thuơc dùng n Trong luong tinh hồn (g/lOOg thé trong) % thay doi 1 NaCl 0,9% 10 1,09 ±0,19 2 TES 0,4mg/kg 10 1,2 2 + 0.12 p,_2 > 0,05 11,9 (t) 3 TTT 20g/kg 10 1,66 ±0,31 Pl-3 < 0,01 52,3 (t) t: % tàng so vơi lơ chûng Nhân xét:
TTT vơi liëu 20g/kg thë trong dâ làm tàng trong luong tinh hồn lên mot câch dang kë (vơi p < 0,01), trong khi do TES 0,4mg/kg/24h khơng làm tàng trong luong tinh hồn lên dén müc cơ ÿ nghïa thơng kê (p > 0,05). Chüng tơi lÿ giâi diêu này nhu sau: trên mơt co thë binh thuơng, khi dùng TES ngoai sinh, TES së tâc dung theo co ché feedback (-) lên vùng duơi doi- tuyén yên [18] gây üc ché sân xuât câc hormon huơng sinh duc nam nhu GnRH, LH. Câc hormon này lai cơ vai trơ quan trong trong viêc phât triën tinh hồn. Do vây, ơ lơ tiêm TES, tinh hồn chuơt khơng thay déi mơt câch cơ ÿ nghïa là hop lÿ. Cơn à lơ chuơt uong TTT liêu 20g/kg mơi ngày dâ làm tàng trong luong tinh hồn rơ ràng. Phâi châng, TTT cơ tâc dung truc tiép lên sü phât triën cüa tinh hồn chü khơng dơng vai trơ là mơt androgen ngoai sinh nhu TES. Nghiên cüu cüa Ray Sahelian cüng dua ra két quâ tuong tu khi cho chuơt non 2 thâng tuoi uong dich chiét chüa câc flavonoid cüa TTT vơi liêu 300mg/kg/24h [30].
3.1.1.3. Tâc dung cüa thơ ty tü lên su thay doi trong luong tui tinh, tuyén tien liêt và tuyén cowper cüa chuơt duc non khơng thién
Bâng 3.2. Anh hitàng cüa TTT lên trong luong tui tinh, tuyén tien liêt và
9
tuyén cowper â chuơt cơng duc non khơng thién
Lơ Thuơ'c dùng n Trong luong tui tinh (g/100g) Trong luong tuyén tien liêt
(g/lOOg) Trongluong tuyén cowper (g/lOOg) 1 NaCl 0,9% 10 0,033 ±0,013 0,034 + 0,013 0,0074 ± 0,0049 i 2 TES 0,4mg/kg 10 0,141 ±0,023 Pi.2 < 0,001 0,077 ±0,021 Pi-2 < 0,001 0,0240 ±0,0029 Pi-2 < 0,001 3 T1T 20g/kg 10 0,106 ±0,049 p13 < 0,01 p2.3 > 0,05 0,074 ±0,025 Pi-3 < 0,01 p2-3 > 0,05 0,0203 ±0,0065 Pl-3 < 0,01 p2-3 > 0,05 Nhân xét:
Nghiên cüu cüa IL Hyun Kang và cơng sir sü dung thü nghiêm Hershberger dâ chüng minh liêu dùng TES 0,4mg/kg/24h là liêu thé hiên tâc dung rơ ràng nhàt lên câc co quan sinh duc phu nhu tüi tinh, tuyén tiên liêt, tuyén cowper, co nâng hang...[23]. Trên doi tuçfng chuơt cơ'ng non khơng thiê'n, chüng tơi cüng thu duoc kê't quâ TES liêu 0,4mg/kg/24h làm tàng rơ rêt trong luong tüi tinh, tuyê'n tiên liêt và tuyê'n cowper lên dê'n mûc cơ y nghïa thơ'ng kê vơi p<0,001. Dơi vơi lơ uơ'ng TTT liêu 20g/kg/24h, trong luong cüa tüi tinh, tuyén tiên liêt và tuyê'n cowper cüng tâng lên dê'n müc cơ y nghïa vơi p < 0,01. Dieu này hồn tồn hop lÿ bơi vỵ khi TTT cơ tâc dung làm phât triën tinh hồn thỵ dơng thơi cüng kfch thfch sân xuàt TES nơi sinh. Mà TES lai cơ tâc dung làm phât triën câc tuyén sinh duc phu nhu tüi tinh, tuyén tiên liêt và tuyê'n cowper. Nhu vây, cơ thë thay TTT cơ tâc dung làm phât triën câc co quan sinh sân phu nhu tüi tinh, tuyê'n tiên liêt và tuyén cowper nên làm tâng luong tinh dich.
Tâc dung cüa TTT lên su phât triën cüa tüi tinh, tuyê'n tiên liêt và tuyê'n cowper tuong duong vơi TES (p > 0,05).
3.1.2. Trên chuơt cơng trâng duc non thién
3.1.2.1. Su thay dơi trong luçmg chuơt truơc và sau thi nghiêm trên chuơt cơng duc non thién
Két quâ duac thé hiên à hinh 3.2:
<0,05
Lơ 1 Lơ 2 Lơ 3
Hinh 3.2. Su thay doi trong luang truơc và sau thi nghiêm trên chuơt cong trâng duc non thién
Nhân xét:
• Truơc thi nghiêm, trong luang chuơt à câc nhom dơng dëu nhau, su khâc biêt khơng co ÿ nghỵa thơng kê.
• Sau dot thi nghiêm, tât câ câc lơ chuơt dêu tâng trong luang (ptruơc.sau < 0,05). Khơng cơ su khâc biêt cơ ÿ nghỵa vê su tâng trong luang giüa câc nhom nghiên cüu. Nhu vây, cơ thé thay diêu kiên thi nghiêm tuang dơi dơng nhât giüa câc nhom nghiên cüu. Cüng nhu dơi vơi nhom chuơt non khơng thién, à nhom chuơt non thién, TTT liêu 20g/kg cüng làm tâng trong luang chuơt tơi müc cao nhât là 19,72% vơi p < 0,05. Diêu dơ chüng tơ ràng ngồi tâc dung lên câc ca quan sinh sân nam, TTT cơn cơ tâc dung kïch thich su tâng truơng cûa chuơt.
Diêu này co thë lÿ giâi là do thành phân hô hoc cüa TTT co chüa nhiêu tinh bơt, câc acid béo... nên rat tơt cho su phât triën cüa co thë [201-
3.1.2.2. Tâc dung cüa thơ ty tü lên su phât triên cüa tui tinh, tuyén tien liêt, tuyên cowper ơ lơ chuơt cơng non thién
Két quâ duoc thë hiên ơ bâng 3.3:
Bâng 3.3. Anh huong cüa TTT lên trong luong tûi tinh, tuyên tien liêt và