1. Nấu môi trường KIA: Thành phần:
- cao thịt: 3g - cao nấm men: 3g - pepton: 15g - proteose pepton: 5g - NaCl: 5g - lactoza: 10 g
- glucoza: 1g - sắt sunfat: 0.2 g - Natrithiosunfat: 0.3 g - Metyl red: 6ml - agar: 12g - nước cất: 1000 ml
Cách pha: Đun sôi để hòa tan hoàn toàn thành phần trên trong nước cất, để nguội đến 450C trong nồi cách thủy, chỉnh pH=7.4 ở 250C. Rót vào 24 ống nghiệm để làm thạch
nghiêng một lượng sao cho khi môi trường đông lại thì thể tích phần đáy gấp đôi phần nghiêng.
Sau đó chờ cho môi trường đông lại, tiến hành cấy vi sinh vật: dùng que cấy tròn nhúng vào huyền dịch vi sinh vật cấy lên môi trường thạch nghiêng trong ống nghiệm, cấy dày, lấy que cấy thẳng cấm vào 2/3 thạch, đi ủ 18-24h thì đọc kết quả. . Ghi rõ ống mẫu cấy, họ tên, lớp, ngày thực hành.
2. Nấu môi trường TSI: Thành phần:
- Cao thịt: 4g - pepton: 4g - Dextroza: 1g - lactoza: 10g - saccharoza: 10g - NaCl: 5g
- Natrithiosunfat: 0.08g - Natrisunfit: 0.4g - sắt sunfat: 0.2g - Metyl red:2.5 ml - agar: 15g - nước cất: 1000 ml
Cách pha: Đun sôi để hòa tan hoàn toàn thành phần trên trong nước cất, để nguội đến 450C trong nồi cách thủy, chỉnh pH=7.4 ở 250C. Rót môi trường vào 24 đĩa petri, chờ cho môi trường đông lại tiến hành cấy phân lập.
Kết quả: môi trường KIA:
- Ống nghiệm có trên đỏ-dưới đỏ: vi sinh vật không dùng được đường.
- Ống nghiệm có trên đỏ-dưới vàng: vi sinh vật dùng được đường nhưng lượng axit sinh ra không chuyển hóa màu môi trường, vi sinh vật chỉ dùng đường đơn.
- Ống nghiệm có trên vàng-dưới đỏ: vi sinh vật dùng được đường đơn bằng con đường oxi hóa.
- Ống nghiệm có trên vàng-dưới vàng: vi sinh vật sử dụng được đường đơn, đường đôi.
- Ống nghiệm 1 phần nhỏ đỏ ở trên-dưới vàng: Vi sinh vật sử dụng đường bằng con đường lên men.
- Ống nghiệm có trên vàng- 1 phần nhỏ đỏ ở dưới: Vi sinh vật sử dụng đường bằng con đường oxi hóa.
- Ống có sắc tố đen: vi sinh vật có khả năng sinh H2S
→ Khảo sát vi sinh vật ta thấy trong ống nghiệm có phần trên đỏ, dưới có màu cam, chứng tỏ vi sinh vật sử dụng được đường nhưng lượng axit sinh ra không đủ để chuyển hóa màu của môi trường.
HÌNH ẢNH MỘT SỐ VI SINH VẬT
Clotridium botulinum Aeromonas sp
Vibrio cholerae Vibrio
Plesiomonas sp