4,67:t 0,15
Trong su6t, m~u dnh dan, mui nuoe miim ra't d~e tru'ng, vi
ngQtco Mu265:t 5 265:t 5
4,45 :t 0,15
Ke't qua (j bang 3.10 eho tha'y m§:u thii' nghi~m sii' d\mg protease
B.subtilis S5 d~ san xua't nuoe mAmtit ea edm co thCfigian ehe' bie'n ngAn
hdn va lu<jng nuoe mAm e6t thu du<je eao ga'p 1,18 l~n so voi phudng phap san xua't nuoe mAm truyen th6ng. Ke't qua nay co th~ giiii thich Ia do tae dQng eua protease b5 sung lam thit ea bi thuy phan nhanh va tri~t d~ hdn.
.,., A .. ~ ,.." ,.., KET LU~N VA BE XUAT Y KIEN 1. Ke't lu~n
Tit cae ke't qua nghien eUu(j teen eho phep rut ra mQt s6 ke't lu~n:
1) Bit san xua't protease tit B.subtilis S5 theo phudng phap nuoi ea'y
ban rAn voi moi truCfngnuoi ehua: bQt bAr, earn g~o, kho dh l~e va khoang eha't, nhi~t dQ nuoi ea'y ban d~u la 30 - 32°C; thCfigian nuoi ea'y 41 giCftrong dieu ki~n co thOng gio va gift im. Sau khi dii'ng qua trlnh nuoi sa'y kho (j nhi~t dQ 50°C thu du<je eanh truCfng ehua protease
B.subtilis S5 co ho~t dQenzyme la 33UI/g.
2) Bit xae diM mQt s6 dieu ki~n thieh h<jpeho qua trlnh tach ehie't, thu
nMn va biio qUaDprotease tit B.subtilis S5 nhusau:
- Nuoe ea't la dung moi thich h<jpnha't d~ ehie't rut protease. - Dung ethanol (j n6ng dQ75% d~ ke't tiia thu protease CPE.
- Protease CPE co th~ hilo qmln du'di d,,-ngdong khO ho~c boa tan trong dung dich sorbitol co n6ng dQ~ 10%.
3) Da:xac dinh du'<;1cmQt s6 d~c nnh cua protease B.subtilis S5:
- pH thich h<;1p6,0 - 6,5, nhi~t dQthich h<;1p55°C va khOng b~n d nhi~t dQtiY60°C trd leu.
- Mu6i an co th~ lam giam ho~t tlnh cua protease B.subtilis S5 va
n6ng dQmu6i an cang cao muc dQgiam ho,,-tnnh dng m,,-nh.
- Cac cha't lam giam ho,,-tdQprotease DC va CPE la: Znz+,Cdz+,Baz+, Cuz+, Hgz+, Pbz+, CN-, HzOz, EDTA, trong do HgZ+va EDTA lam giam tren 90%. Mgz+, Mnz+ thi lam tang nhy ho~t dQ protease CPE. 2- Mercaptoethanol va L-cystein thllam tang ro r~t ho,,-tdQprotease CPE.
4) Da: tach protease CPE qua cQt IQcgel sephadex G-75 thu du'<;1c4 dinh protein ky hi~u I, II, III, IV va xac dinh mQt s6 d~c tinh cua cac protease tach du'<;1cnhu' sau:
-Sau khi qua cQt thu du'<;1chai dinh chinh co ho,,-t dQ protease la dinh I
(P-I) va dinh II (P-II) trong do P-II chie-m tdi 84,3% ho,,-t dQ leu cQt va co dQ tinh s~ch ga'p 15 l~n DC ban d~u.
- P- II co pH thich h<;1p6,0 va nhi~t dQ thich h<;1p55°C. Cac cha't lam
giam boat do P-II la' Znz+ Cdz+ Baz+ Cuz+ Hgz+ CN- Fez+ H 0 va.. ., , , , , , , Z zEDTA. trong do Hgz+, HzOz va EDTA lam giam tu'dng U'ngtdi 100%, EDTA. trong do Hgz+, HzOz va EDTA lam giam tu'dng U'ngtdi 100%, 97,9% va 98,6%. P-II co d~c nnh di~n hlnh cua mQt proteinase thiolla: cac cha't khii' 2-Mercaptoethanol va L-cystein lam tang tu'dng U'ngho~t dQ P-II tdi 200% va 189,7%. Nhu' v~y dga theo cach phan lo,,-icua Hartley
co th~ sd bQ kh~ng dinh P-II thuQc nhom proteinase thiol (proteinase
cystein).
5) Dit thii'nghi~m san xua't bQtd,,-mthuy phan tiYca m6i b~ng protease CPE va tlm du'<;1cmQt s6 di~u ki~n thich h<;1pcho qua trlnh thuy phan nhu' sau:
- Nhi~t dQ thich h<;fpla 50°C va pH thich h<;fpla pH tl1nhien eua thit ca.
- Ty l~ protease CPE thich h<;fpla 0,3% va ty l~ mtoe b6 sung thich h<;fpla 20%.
- D~ lie ehe' qua trinh gay th6i eua vi sinh v~t co th~ b6 sung mu6i an voi ty l~ 3% hay ethanol 8% hay sorbitol 4%. Tuy v~y, khi sii' dl,mg sorbitol d~ lie ehe' thl bQt d~m thu du<;feco ham IU<;fngaxit amin eao hdn, mui thdm hdn va hoan toan d~t tieu ehugn vi sinh v~t.
6) Dii nghien eUu sii' dl,mg protease B.subtilis 55 trong ehe' bie'n nuoe mii:mtit ea edm eho ke't qua la:
- Co th~ sii'dl,mgprotease B.subtilis 55 d~ rut ngii:nthai gian ehe' bie'n nuoe mii:mtit ea edm va protease B.subtilis 55 co kha nang thuy phiin ea edm t6t hdn mQt s6 ehe' phgm protease dii sii'd\mg khae.
- Nuoe mii:me6t ea edm san xua't b~ng protease B.subtilis 55 co ham
ht<;fng,thanh ph~n axit amin eao hdn nuoe mii:me6t san xua't b~ng phudng phap truyen th6ng va cae phudng phap sii' d\mg cae protease dii thii' nghi~m khae.