của công ty Nam Khoa:
- Bước 1: 10µL IS+ 30 µL Silica + 900 µL Buffer vào ống eppendorf 1,5ml - Bước 2: cho 100µL bệnh phẩm vào ống có chứa hỗn hợp trên, trộn đều bằng
vortexlắc tay trong 10p
- Bước 3: vortex lần nữa trong 5s, ly tâm 13000v/15s. Hút bỏ phần nước nổi, để tránh mất Silica ta nên chừa lại khoảng 10µL trên lớp S
- Bước 4: rửa 2 lần, mỗi lần với 1ml L2 cho vào cặn Silica rồi vortex trong vài giây để hòa silica vào dung dịch, sau đó ly tâm 13000v/15s, hút bỏ phần nước nổi, chừa lại cặn silica
- Bước 5: rửa 2 lần, mỗi lần với 1ml ethanol cho vào cặn Silica rồi vortex trong vài giây để hòa silica vào dung dịch, sau đó ly tâm 13000v/15s, hút bỏ phần nước nổi, chừa lại cặn silica
- Bước 6: rửa 1 lần cuối cùng với 1ml Acetone cho vào cặn Silica rồi vortex trong vài giây để hòa silica vào dung dịch, sau đó ly tâm 13000v/15s, hút bỏ phần nước nổi, chừa lại cặn silica.
- Bước 7: làm khô Silica ở 56ºC trong 10p trong block nhiệt
- Bước 8: thêm 50µL TE 1X. Vortex cho đến khi silica tan hoàn toàn. Ủ ở 56ºC trong 10ply tâm 13000v/2p thu dịch nổi chính là sản phẩm tách chiết.
- Bước 9: 10µL dịch nổi+ 40µL TE1X Realtime PCR
2. Phản ứng khuếch đại gen (PCR)
• Kỹ thuật này được thực hiện trên hệ thống máy PCR rất hiện đại với mục đích từ 1 lượng AND rất ít ban đầu, sau khi thực hiện phản ứng PCR sẽ có 1 lượng lớn ADN để sử dụng chẩn đoán căn nguyên gây bệnh.
• Các thành phần tham gia phản ứng:
- Enzym Taq polymerased, NTPs, Primer, DNA khuôn, buffer 94ºC 94ºC
15p 15s 72ºC 72ºC 59ºC 30s 5p
30s 15ºC hot start ổn định giữ DNA
biến tính gắn mồi kéo dài 40T
PHẦN D: