2.2.2.5. Dinh lirong alcaloid toàn phân trong lâ và thân hành.
+ Dung eu chiét là bînh ngâm kiêt. + Tién hành chiét:
Cân chînh xâc khoàng 20g bôt duoc lieu (dâ duoc dinh luçmg dô âm), thâm âm bang dung dich acid H2S04 2% trong côn 70°. De yên 1 giô. Chiét ngâm kiêt bâng dung môi trên dén hét alcaloid (thir phân ûng vôi thuôc thir Dragendorff).
Dich chiét dem loc loai tap roi cât thu hôi dung môi. Dich dâm dâc lâc vôi ether dàu de loai tap. Sau dô kiêm hoa bang NH4OH dâm dâc dén pH=10-ll. Chiét nhiêu làn bâng Chloroform dén hét alcaloid (thu bâng thuôc thir Dragendoff). Tâp trung dich chiét Chloroform, rira lai bâng nuôc cât. Chuyën toàn bô vào côc dâ duoc cân trong luçmg truôc. Bôc hüi ô diêu kiên tu nhiên. Cân thu duoc sây ô nhiêt dô 60° C dén khôi luçmg không doi và cân xâc dinh hàm luçmg.
Hàm luçmg alcaloid toàn phân duoc tinh theo công thirc:
Y% = --- - --- 104
a (1 0 0 - c )
Trong dô:
Y : Hàm luçmg alcaloid toàn phân (%) c: Dô âm cüa duoc lieu (%)
a: Khôi luong duoc liêu cân de dinh luong (g) n: Khôi luong alcaloid (g)
Tién hành dinh luçmg ba mâu. Thân và lâ tién hành song song.
Bâng 4: Ket quâ dinh luong alealoid toàn phân trong thân hành và lâ cây.
STT Thân Lâ Lân 1 0,75 0,23 Làn 2 0,80 0 , 2 0 Làn 3 0,76 0,18 Trung bînh 0,77 0 , 2 0 Nhân xét:
Nhu vây, alealoid cüa loài H. equestre tâp trung chü yéu trong thân cây. Hàm luong alealoid à thân hành là 0,77% cao gân gâp 4 làn so vôi lâ. Rê cây vï thu hai duoc vôi luong nhô nên không thé tiên hành dinh luong.
2.2.2.6. Phân lâp và tinh che alealoid cüa thân.
Cân cir vào ket quâ dinh tmh bàng SKLM, trong 8 vét alealoid cüa thân, vét TA6 to và dâm nhât nên chüng tôi tién hành phân lâp TA6 nhô vào sâc kÿ côt.
+ Dung eu: Côt là ông thuÿ tinh hînh tru cô kfch thuôc 50 x 2 cm, câc ông nghiêm nhô dâ duoc dânh sô thir tu.
+ Chât hâp phu: Silicagel cüa Merck, cô hat 0,062- 0,200 mm. + Dung môi: Chloroform, Methanol.
+ Chuân bi côt:
Côt duoc lâp thang dung trên giâ, lot mot lôp bông mông à dây côt. Cân khoâng 25g bôt Silicagel vào côc cô mô, thêm chloroform dén ngâp bot. Khuây dêu cho dén hét bot khi. Do nhanh silicagen vào côt sao cho khi nhôi xong trong côt không duoc cô bot khi (Phuong phâp nhôi côt uôt). On dinh côt trong tiéng dông hô.
+ Chuân bi chat nap côt: 800mg cân alcaloid duoc hoà tan trong luong toi thiëu chloroform roi trôn vôi lg Silicagel, trôn dêu thu duoc bot toi dông dêu. Côt sau khi ngâm xong duoc rut chloroform dén vach Silicagel. Nap bot dâ chuân bi à trên vào côt, dàn thành mot lôp mông, dêu trên bê mât rôi phû thêm mot lôp mông Silicagel trên lâp hoat chat.
+ Triën khai côt vôi hê dung môi Chloroform : MeOH [5 : 1 ]. Toc dô chày khoàng 40 giot/phüt.
+ Rira giài bàng hê dung môi CHC13 : MeOH [4 : 1]. Toc dô chày nhu trên.
+ Hung dich rira giài vào câc ong nghiêm, môi ong khoàng 3 ml.
+ Kiëm tra dich rira giài bàng SKLM vôi bân mông trâng sân cüa Merk, dâ duoc hoat hoâ ô 110°C trong 1 giô. Khai triën vôi hê dung môi CHC13 : MeOH [5 :1]. Nhüng ong dich chiét cô sô vét và Rf giông nhau thî gôp lai.
+ Két quà:
Tir ong 1 dén ông 20 cô 2 vét vôi Rfl = 0,60; Rf 2 = 0,71.
Tir ông 21 dén ông 28 cô 3 vêt vôi Rfl = 0,61; Rn = 0,71; RD = 0,52 Tir ông 30 dén ông 50 cô 1 vét vôi Rf = 0,52. Dich rua giài cüa chat trên cô màu hai vàng, duoc tây màu bàng than hoat dun nông và loc nông qua giây loc. Rüa than hoat nhiêu lân bàng chloroform dë han ché mât hoat chat. Gôp toàn bô dich chloroform vào côc nhô, dë bay hai tu nhiên rôi két tinh lai nhiêu làn thu duoc câc tinh thë không màu hînh kim nhu trong hînh 8 .