Thực hiện SKC silica gel trên phân đoạn EA.3.3 (119 mg) của bảng 2 với hệ dung môi rửa giải ED:C có độ phân cực lần lượt tăng dần từ 60 – 100% C. Dịch giải ly qua cột được hứng vào các lọ.
Theo dõi quá trình giải ly bằng sắc kí lớp mỏng. Những lọ cho kết quả sắc kí lớp mỏng giống nhau được gộp chung thành 1 phân đoạn. Kết quả thu được 3 phân đoạn (EA.3.3.1 - EA.3.3.3), được trình bày trong bảng 4.
Bảng 4. Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn EA.3.3 của bảng 2 Phân đoạn Dung môi giải ly Trọng lượng (mg) Sắc ký lớp mỏng Ghi chú
EA.3.3.1 ED:C = 2:3 43 mg Nhiều vết dơ, mờ Chưa khảo sát
EA.3.3.2 ED:C = 1:4 35 mg Vết tím, tách rõ Khảo sát, thu được V1
Ghi chú: C (chlorofom), ED (ether dầu hỏa)
Nhận xét:
Từ phân đoạn EA.3.3 của bảng 2, sắc kí cột thu được 3 phân đoạn sắp xếp theo thứ tự EA.3.3.1 - EA.3.3.3.
Trong đó, phân đoạn EA.3.3.2 có sắc kí lớp mỏng cho vết rõ đẹp màu tím ẩn dưới vết dơ mờ. Thực hiện sắc kí cột silica gel pha thường nhiều lần trên phân đoạn này thu được hợp chất dạng bột, màu trắng (25.0 mg).
Kiểm tra bằng sắc kí lớp mỏng với hệ dung môi khác nhau, hiện hình bằng H2SO4 30%, đun nóng chỉ thu được một vết rõ, màu tím, Rf = 0,35 (dung môi giải ly C100%). Kết tinh lại trong MeOH thu được hợp chất ký hiệu là V1.
Sơ đồ 2. Sơ đồ cô lập các chất hữu cơ trong cao ethyl acetate của cây Phèn đen
- Sắc ký cột silica gel nhiều lần - Giải ly: ED:C
V3
(8.0 mg)
- Sắc ký cột silica gel nhiều lần - Giải ly: ED:C
V1 (25.0 mg) Phân đoạn EA.3.2.1 32.00 mg Phân đoạn EA.3.2.2 21.00 mg Phân đoạn EA.3.2.3 29.00 mg Phân đoạn EA.3.3.3 16.00 mg Phân đoạn EA.3.3.2 35.00 mg Phân đoạn EA.3.3.1 43.00 mg - Sắc ký cột silica gel
- Giải ly: ED:C
- Cô quay thu hồi dung môi Phân đoạn EA.3.1
20.00 mg
Phân đoạn EA.3.2 116.00 mg
Phân đoạn EA.3.3 119.00 mg
Phân đoạn EA.3.4 167.00 mg - Sắc ký cột silica gel
- Giải ly: ED:C
- Cô quay thu hồi dung môi
Cao ethyl acetate EA (118,00 g)
- Sắc ký cột silica gel - Giải ly: ED:EA
- Cô quay thu hồi dung môi
Phân đoạn EA.2 7,90 g Phân đoạn EA.1
86,00 g
Phân đoạn EA.3 2,53 g
Phân đoạn EA.4 2,65 g
- Sắc ký cột silica gel - Giải ly: ED:C, C100% - Cô quay thu hồi dung môi
CHƯƠNG III