Với mục đích thu được lượng lớn protein enzym dTDP-glucose reductase tham gia chuyển hóa 4-ketoreduction của phân tử đuờng dTDP- 4-keto 6-deoxyglucose tạo nên đường L –noviose trong cấu trúc của
Novobiocin, đoạn gen novS sau khi đã được nhân dòng và giải trình tự sẽ
được đưa vào vector biểu hiện pET 32 a(+). Gen NovS đuợc cắt ra từ vectơ pGEMnovS bằng NedI và EcoRI. Sau đó đựơc tinh sạch và nối vào vector biểu hiện pET 32a(+) bằng T4 ADN ligaza. Sản phẩm nối được biến nạp vào tế bào E.coli BL21. Sau khi kiểm tra các dòng plasmid trong các thể biến nạp E.col BL21. Các dòng E.coli BL21 mang plasmid pETnovS cũng được nuôi cấy qua đêm ở 370C môi trường LB có chứa ampicilin, sau đó tế bào được thu lại và đuợc tách và cắt plasmid để kiểm
tra. Kết quả điện di trên gel agarose (hình 11, 12).
Kết quả điện di thu được cho thấy gen novS có kích thước tương đương với kích thước của gen novS đã được giải trình tự. Kết quả này chúng minh rằng việc chuyển gen novS vào vector biểu hiện pET -32a(+) đã thành công.
Hình 11: Kết quả chuyển gen novS vào vector biểu hiện pET -32(a+) Trong đó:
M: Thang ADN chuẩn
Hình 12: Phân tích sản phẩm cắt các dòng pETnovS bằng NedI và EcoRI trên gel agaroza.
Trong đó: M: Thang ADN chuẩn
Đường chạy 1-5: Các dòng pETnovS cắt bằng NedI và EcoRI
3.2. Thảo luận
Như vậy, nghiên cứu này đã thành công trong việc tạo vector tách dòng pGEMnovS, vector biểu hiện pETnovS và biến nạp thành công các vector tách dòng và vector biểu hiện đó vào vi khuẩn E.coli XL1 Blue, đồng thời giải được trình tự gen novS gồm 861 bp mã hóa cho 287 axit amin.
NovS là một trong những gen đóng vai trò quan trọng trong quá
trình sinh tổng hợp protein enzym tham gia tổng hợp đường L-noviose- là khâu cuối cùng để tạo nên kháng sinh novobiocin. Vì vậy, việc nghiên cứu tạo vector tách dòng để giải trình tự gen và thiết kế vector biểu hiện gen novS có vai trò rất quan trong trong quá trình nghiên cứu nghiên cứu về kháng sinh novobiocin. Trong tuơng lai cần tiếp tục nghiên cứu về biểu hiện protein của gene novS, phân tích và tìm ra chức năng của các protein này trong con đường sinh tổng hợp kháng sinh Novobiocin, đồng thời nghiên cứu sâu hơn về các gen tham gia quá trình tổng hợp nên đường novoise, các điều kiện cần thiết và các gene tham gia vào con
đường sinh tổng hợp nên kháng sinh novobiocin.