/ .2.3 Một số ứng dụng của phương pháp phân tích đa cấu tử gần đây ở Việt Nam
2.1.2. Phương pháp thực nghiệm
2.1.2.1. Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời PA và ME bằng phương pháp quang p h ổ MCA
a. Khảo sát một sô'điều kiện áp dụng MCA đ ể định lượng đồng thời PA và ME
* Khảo sất tính chất p h ổ của dung dịch PA và ME trong môi trường đệm phosphat 5,8 và môi trường NaOH 0,1 N
- Chuẩn bị dung dịch:
+ Trong môi trường đệm phosphat 5,8 • Pha dung dịch PA
Cân chính xác khoảng 40mg PA cho vào bình định mức 200ml. Thêm khoảng 120ml ethanol 96“, lắc siêu âm đến tan hoàn toàn. Bổ sung ethanol 96‘* vừa đủ đến vạch, lắc đều được dung dịch P’„ có nồng độ khoảng 200ụg/ml. Dùng pipet hút chính xác 5ml dung dịch vừa pha cho vào bình định mức 50ml. Thêm dung dịch đệm phosphat 5,8 vừa đủ, lắc đều được dung dịch P”o nồng độ khoảng 20ụg/ml (nồng độ thực là 23,20ụg/ml).
• Pha dung dịch ME
Cân chính xác khoảng 20mg ME cho vào bình định mức 200ml. Thêm khoảng 120ml dung dịch ethanol 96°, lắc siêu âm đến tan hoàn toàn. Bổ sung dung dịch ethanol 96“ vừa đủ đến vạch, lắc đều được dung dịch M ’„ có nồng độ khoảng lOOụg/ml. Dùng pipet hút chính xác 5ml dung dịch vừa pha cho vào bình định mức 50ml. Thêm dung dịch đệm phosphat 5,8 vừa đủ, lắc đểu được dung dịch M”o nồng độ khoảng lOụg/ml (nồng độ thực là 9,65ịig/ml).
+ Trong môi trường NaOH 0,1 N • Pha dung dịch PA
Cân chính xác khoảng 40mg PA cho vào bình định mức 200ml. Thêm khoảng 120ml dung dịch NaOH 0,1N, lắc siêu âm đến tan hoàn toàn. Bổ sung dung dịch NaOH 0,1N vừa đủ đến vạch, lắc đều được dung dịch P’i có nồng độ khoảng 200ụg/ml. Dùng
micropipet hút chính xác 4ml dung dịch vừa pha cho vào bình định mức 50ml. Thêm dung dịch NaOH 0,1N vừa đủ, lắc đều được dung dịch P” i nồng độ khoảng 16ụg/ml (nồng độ thực là 15,84ụg/ml).
• Pha dung dịch ME
Cân chính xác khoảng 20mg ME cho vào bình định mức 200ml. Thêm khoảng 120ml dung dịch NaOH 0,1N, lắc siêu âm đến tan hoàn toàn. Bổ sung dung dịch NaOH 0,1N vừa đủ đến vạch, lắc đều được dung dịch M ’| có nồng độ khoảng lOOpg/ml. Dùng micropipet hút chính xác 4ml dung dịch vừa pha cho vào bình định mức 50ml. Thêm dung dịch NaOH 0,1N vừa đủ, lắc đều được dung dịch M” i nồng độ khoảng 8]ag/ml (nồng độ thực là 8,18ụg/ml).
- Quét ph ổ các dung dịch
Quét phổ các dung dịch P”o, M”() (mẫu trắng là đệm phosphat 5,8), P” i, M” | (mẫu trắng là NaOH 0,1N) ở bước sóng từ 220nm đến 400nm. Chồng phổ của hai phổ PA và ME ở cùng môi trường ta được các phổ đồ như hình 2.9 và 2.10.
* Khảo sát tương quan hồi quy và tính chất cộng ph ổ của PA và ME - Trong môi trường đệm phosphat 5,8
+ Pha dãy dung dịch chuẩn và dung dịch chuẩn hỗn hợp theo bảng 2.1 (Các dung dịch chuẩn PA là P’oi, P’„2, P’o3; các dung dịch chuẩn ME là M ’oi, M ’o2, M ’o3 và các dung dịch chuẩn hỗn hợp là H ’oi, H ’o2, H ’o3 từ các dung dịch P’o, M ’o)
Bảng 2.1. Dãy dung dịch để khảo sát tương quan hồi quy và tính chất cộng tính của PA và ME trong đệm phosphat 5,8:
Dung dịch chuẩn P ’o, P ’o2 P ’o3 M ’o, M ’o2 M ’o3 H ’o. H ’o2 H ’o3
Số ml cần lấy vào 1DÌnh định mức 50ml
P ’o(ml) 5 2 1 5 2 1
M ’o(ml) 5 2 1 5 2 1
+ Đo độ hấp thụ quang của các dung dịch thu được ở 3 bước sóng là 220nm, 246nm, 280nm. Kết quả thu được ở bảng 2.4.
- Trong môi trường NaOH 0,1 N
+ Pha dãy dung dịch chuẩn và dung dịch chuẩn hỗn hợp theo bảng 2.2 (Các dung dịch chuẩn PA là P’ji, P ’i2» P ’1 3; các dung dịch chuẩn ME là M ’ịj, M ’i2, M’ |3 và các dung dịch chuẩn hỗn hợp là H ’ii, H ’i2» H ’i3từ các dung dịch P ’i, M ’|)
Bảng 2.2. Dãy dung dịch để khảo sát tương quan hồi quy và tính chất cộng tính của PA và ME trong NaOH 0,1N:
Dung dịch
chuẩn P’i, P ’i2 P’,3 M ’h M ’,3 H ’n H’,2 H ’,3
Số ml cần lấy vào bình định mức 50ml
P ’,(ml) 5 2 1 5 2 1
5 2 1 5 2 1
TIlêm dung dịch đệm NaOH 0,1N vừa đủ đến vạch
+ Đo độ hấp thụ quang của các dung dịch thu được ở 2 bước sóng là 257nm, 285nm. Kết quả thu được ở bảng 2.5.
> Độ hấp thụ của PA và ME trong môi trưòfng NaOH 0,1N tốt hơn được chứng minh cả trong thực nghiệm lẫn lý thuyết. Đồng thòi trong cả hai môi trường hai chất này đều có tính cộng tính và tính tuyến tính khá cao. Ngoài ra trong môi trường NaOH 0,1N pha chế đơn giản hơn trong môi trường đệm phosphat 5,8. Vì vậy, tôi chọn môi trường định lượng đồng thời PA và ME là NaOH 0,1N.
a. Định lượng đồng thời PA và ME bằng phương pháp MCA trên máy GBC Cintra 40:
* ỵây dựng phương pháp định lượng đồng thời PA và ME - Chuẩn bị mẫu
+ Dãy dung dịch hỗn hợp chuẩn
Cân chính xác khoảng 25mg ME vào bình định mức 50ml (ký hiệu là M|).
Thêm khoảng 30ml dung dịch NaOH 0,1N vào mỗi bình, lắc đều đến tan hết, bổ sung đung dịch NaOH 0,1N vừa đủ, lắc đều tạo hai dung dịch tương ứng là P| và M|.
Lấy chính xác 5ml ở bình Pj vào bình định mức 50ml. Lấy chính xác 5ml ở bình Mị vào bình định mức 50ml.
Thêm dung dịch NaOH 0,1N vào hai bình định mức trên đến vạch, lắc đều, thu được các dung dịch tương ứng là Pu và M |,. Dùng micropipet phối hợp 2 dung dịch P|| và Mil vào bình định mức 50ml, sử dụng dung dịch NaOH 0,1N để pha loãng thu được dãy dung dịch như sau:
Bảng 2.3. Pha dãy dung dịch chuẩn để xây dựng đường chuẩn
Dung dịch hỗn hợp chuẩn c , C2 C 3 C 4 C 5
Số ml dung dịch chuẩn gốc cần lấy vào bình định mức 50ml
p,ị(ml) 4 5 6 7 8
Mii(ml) 8 7 6 5 4
Nồng độ của mỗi thành phần trong dung dịch chuẩn hỗn hợp tương ứng (mg/ml)
Pii(|iig/ml) 8 10 12 14 16
8 7 6 5 4
+ Dung dịch kiểm tra
Dung dịch kiểm tra 1 (ký hiệu là KT1): 7ml dung dịch Pjị + 6ml dung dịch M|1
Dung dịch kiểm tra 2 (ký hiệu là KT2): 6ml dung dịch P|J + 7ml dung dịch M || + Dung dịch thử
Cạo lớp phim bọc ngoài của viên, cân 10 viên, xác định khối lượng viên trung bình. Nghiền kỹ thành bột mịn trong cối sứ. Lấy chính xác một lượng bột viên tương ứng với một viên chứa khoảng 500mg PA và 250mg ME cho vào bình định mức lOOml, thêm khoảng 70ml dung dịch NaOH 0,1N, lắc siêu âm 10 phút, thêm dung dịch NaOH
0,1N vừa đủ, lắc đều đem lọc, bỏ 20ml dịch lọc đầu. Lấy chính xác lOml dịch lọc vào bình định mức lOOml, thêm dung dịch NaOH 0,1N vừa đủ, lắc đều được dung dịch thứ 2. Lấy chính xác Iml dung dịch thứ 2 này cho vào bình định mức 50ml, thêm NaOH 0,1N vừa đủ đến vạch được dung dịch thử.
- Phân tích mẫu
+ Lập phương pháp phân tích trên máy
Bật máy quang phổ, nháy đúp vào biểu tượng chương trình đo quang của máy quang phổ GBC Cintra 40 trên desktop của máy tính điều khiển.
> Vào Menu Application, chọn ứng dụng Multicomponent, trên màn hình hiển thị cửa sổ chương trình như hình 2.1, trong ô “Description” của cửa sổ nhập tên
phương pháp phân tích mẫu. Ví dụ như: “MCA phân tích PA và ME” A p p lic a tio n C o n tro l [M u ltic o m p o n e n tl
M e th o d D e s c r ip tio n C:>^^C;TRALXSPDATA>DEFAUL.T.MCP § ^ v e ... « t o r a g e [OEFAULT.DAT SrtteffiU. ị mm\B Setup Method.«. âLuaiity Controls« |ri9t ruiTì 0 nt»*« Ị V iew .» Bpn R e p r o c e s s OK Cttneel H elp
Hình 2.1. Cửa sổ “Application Control”
Trên cửa sổ chương trình hình 2.1 ta lần lượt khai các tham số của phưoíng pháp bằng cách nháy vào các nút trong mục “setup”.