3.1. Quy trình thực nghiệm
Theo các nghiên cứu gần đây nhất, người ta đã tổng hợp được Diosmin bằng nhiều phương pháp khác nhau, sau khi tham khảo sơ bộ một số tài liệu đã nghiên cứu kết hợp với điều kiện thực nghiệm sẵn có, chúng tôi đã chọn quy trình tổng hợp như sau:
- Tách chiết Hesperidin từ vỏ quit
- Acetate hóa 8 nhóm –OH của Hesperidin ( bảo vệ nhóm chức) - Tổng hợp Diosmin từ Hesperidin acetate bằng NBS
- Tổng hợp Diosmetin từ Diosmin
3.2. Phương tiện nghiên cứu3.2.1 . Thiết bị 3.2.1 . Thiết bị
- Cân điện tử Mettler Toledo Ab204, Sartorius GP 1503 P.
- Máy UV 2450 Shimadzu tại Viện Công nghệ Hóa học Việt Nam. - Tủ sấy thường, cân thường và cân vi lượng.
- Máy đo điểm chảy ELECTRONTHERMAL 9000 tại phòng Phòng Y sinh, Viện Khoa học Vật liệuứng dụng.
- Máy quang phổ hồng ngoại IR-Vector 22 Bruker của Viện Công nghệ Hóa học. - Hệ thống Sắc ký lỏng cao áp LC 1090 Hewlett Parkard ghép khối phổ của hãng MSD-Trap 1100 Agilent.
- Máy cộng hưởng từ hạt nhân Bruker AC 200, tần số 500 MHz tại Viện Hóa học.
3.2.2 . Dụng cụ
- Bình tam giác loại 50 mL, 100 mL, 250 mL. - Becher loại 50 mL, 100 mL, 250 mL, 500 mL.
- Bản mỏng loại 25DC-Alufolien 20x20 cm, Kiesegel 60 F254, Merk.
- Ống hút, pipet, đũa thủy tinh, cá từ, lọ thủy tinh, chai đựng mẫu, ống mao quản, mặt kính đồng hồ, ống đong 50 mL, 25 mL.
3.3 Phương pháp phân tích và xác định hoạt tính sinh học của sản phẩm của sản phẩm
3.3.1. Các phương pháp phân tích sản phẩm
Phương pháp sắc ký bản mỏng, đo điểm chảy, phổ UV, phổ IR, phổ LC-MS, phổ NMR xác định cấu trúc diosmin, diosmetin và các dẫn xuất thu được.
3.3.2. Xác định hoạt tính oxy hóa bằng phương pháp DPPH
Gốc tự do DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) là gốc tự do bền do có hiệu ứng liên hợp trong toàn phân tử, cho màu tím trong ethanol và có độ hấp thu cực đại tại 517 nm.[38] O2N NO2 NO2 N N + NO2 NO2 O2N HN N + R RH 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazine (màu tím) (màu vàng)
Nguyên tắc: các chất nghiên cứu có tác dụng chống oxy hóa theo cơ chế dập tắt gốc tự do sẽ làm giảm màu của dung dịch DPPH.Xác định khả năng này bằng cách đo độ hấp thu ở bước sóng có hấp thu cực đại tại 517 nm. [39]
Hình 6. Đồ thị biểu diễn màu của phương pháp DPPH