Xử lí các mẫu nghiên cứu theo phương pháp xử lí đã xây dựng, tiến hành sắc
kí các dung dịch thu được theo điều kiện đã khảo sát, thẩm định phương pháp dựa
trên các chỉ tiêu: độ phù hợp của hệ thống, độ đặc hiệu, độ tuyến tính, độ đúng và
độ chính xác, giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng.
Độ thích hợp của hệ thống: Đánh giá độ ổn định của hệ thống về thời gian
lưu và diện tích pic khi tiêm lặp lại 1 mẫu chuẩn 6 lần liên tiếp.
Yêu cầu: RSD% về thời gian lưu và diện tích pic < 2% [15].
Độ đặc hiệu :Trên sắc kí đồ, mẫu trắng phải không có pic có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu của mẫu chuẩn [15].
Độ tuyến tính: Kết quả phân tích thu được tỷ lệ với nồng độ (trong khoảng nhất định) của chất phân tích trong mẫu thử.
Xây dựng đường chuẩn 6 điểm (X1 đến X6) của dung dịch có chứa chất chuẩn
cefixim ở trong khoảng nồng độ phù hợp.
Tiến hành sắc kí theo điều kiện đã chọn. Tiêm 3 lần mỗi mẫu. Tính giá trị
trung bình.
Xác định phương trình hồi quy tuyến tính và hệ số tương quan r của cefixim.
Độ đúng: sự đồng nhất giữa giá trị tìm thấy với giá trị thực hoặc giá trị đối
chiếu được chấp nhận.
Độ đúng của phương pháp được tiến hành theo quy trình phân tích trên mẫu tự
tạo chứa lượng hoạt chất đã biết trước hàm lượng. Tiến hành trên 3 điểm nồng độ: 2
- 3 lần LLOQ, 40 - 60% ULOQ, 70 – 90% ULOQ. Tính tỉ lệ chuẩn thu hồi lại được
và lượng chuẩn thêm vào để có được độ đúng của phương pháp.
Yêu cầu:
- Nồng độ từ 100 – 1000 ng/ml: độ thu hồi từ 80 – 110 % [21].
- Nồng độ từ 10 – 100 ng/ml: độ thu hồi từ 60 – 115 % % [21].
Độ chính xác: sự thống nhất (mức độ phân tán) kết quả giữa một loạt phép đo từ nhiều lần lấy mẫu trên cùng một mẫu thử đồng nhất dưới những điều kiện mô tả.
Độ chính xác có thể chia làm 3 cấp độ: Độ lặp lại, độ chính xác trung gian và độ tái lặp. Chúng tôi tiến hành khảo sát độ lặp lại và độ chính xác trung gian.
- Độ lặp lại: tiến hành cùng điều kiện thí nghiệm trong khoảng thời gian ngắn.
Yêu cầu: Nồng độ từ 100 – 1000 ng/ml: RSD% từ 11 – 15% [21].
- Độ chính xác trung gian: thực hiện trong cùng một phòng thí nghiệm, thực
hiện ở hai ngày khác nhau.
Yêu cầu: Nồng độ từ 100 – 1000 ng/ml: RSD% từ 11 – 15% [21]. - Gộp kết quả 2 ngày: FTN < FLT
Với FTN = (FTN > 1) FLT (0,05,5,5)
Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ)
- Giới hạn phát hiện (LOD) của cefixim được xác định dựa vào hệ số góc của
đường chuẩn và độ lệch chuẩn của đáp ứng.
- Giới hạn định lượng (LOQ) được tính bằng 3,3 lần giới hạn phát hiện [15].