2. VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU 1 VẬT LIỆU
3.4. ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HềA TĂNG TRƯỞNG VÀ SACCHAROSE
ĐẾN QUÁ TRèNH RA RỄ CỦA CHỒI MÍA TRONG ỐNG NGHIỆM Theo Nguyễn Thị Nhẫn
Theo dõi quá trình ra rễ của cây mía in vitro trên môi trừờng có bổ sung α-NAA với các nồng độ 0ppm (không bổ sung); 0,25ppm; 0,5ppm; 0,75ppm; 1ppm và trên môi trường có bổ sung hàm lượng Saccaroza với các nồng độ 3%(đ/c); 4,5%; 6%; 7,5%; 9% trong môi trường không có chất điều tiết sinh trưởng.
Kết quả cho thấy: Giống QĐ15 có 3 trong số 5 công thức có tỷ lệ chồi ra rễ 100% sau 3 tuần nuôi cấỵ Tuy nhiên, chất lượng bộ rễ được đánh giá cao nhất ở công thức có nồng độ α-NAA là 0,5ppm, với số rễ trung bình/cây là 8,3 rễ, sau đó là nồng độ 0,75ppm (3,9 rễ/cây). Trên môi trường dinh dưỡng không có α-NAA tỷ lệ chồi ra rễ chỉ đạt 83,3% và trung bình chỉ có 2,8 rễ/câỵ
Saccaroza là thành phần quan trọng của môi trường nuôi cấỵ Nhưng khi sử dụng ở nồng độ cao đã có tác dụng xúc tiến nhanh quá trình ra rễ của chồi míạ Sau 3 tuần nuôi cấy đã có 100% số chồi ra rễ ở hàm lượng saccaroza từ 6% đến 7,5%. Tuy nhiên, số rễ trung bình/cây đạt cao hơn ở hàm lượng saccaroza 7,5%. Khi tăng nồng độ saccaroza lên 9% không chỉ làm giảm số rễ/cây mà tỷ lệ cây ra rễ cũng đã giảm chút ít.
30
Bảng 3.4. Khả năng ra rễ của giống mía F134 sau 3 tuần nuôi cấy Cụng
thức
Nồng độ (ppm)
Sau 1 tuần Sau 2 tuần Sau 3 tuần
SR % SR % SR % Bổ sung a-NAA 1(đ/c) 0,00 1,2 29,2 1,9 38,5 2,7 42,7 2 0,25 1,8 30,5 2,6 47,3 3,2 68,4 3 0,5 2,5 33,5 4,6 62,7 5,6 90,0 4 0,75 1,3 28,7 3,5 54,6 3,8 86,5 5 1,00 1,1 26,8 2,6 45,1 3,8 63,7
Bổ sung hàm lượng saccaroza
1(đ/c) 3,0 1,2 29,2 1,9 38,5 2,7 42,7
2 4,5 0,5 30,0 1,4 35,7 3,0 55,3
3 6,0 1,5 41,1 3,2 69,3 5,3 88,7
4 7,5 1,4 39,0 4,6 76,6 6,5 89,0
5 9,0 2,0 27,6 3,7 53,6 4,2 85,3
Trên giống F134 cũng có kết quả tương tự như giống QĐ15. Nồng độ α-NAA thích hợp nhất cho quá trình ra rễ của giống mía này cũng là 0,5ppm. Tuy nhiên, tỷ lệ cây ra rễ của giống này luôn thấp hơn giống QĐ15 ở tất cả các cặp công thức tương ứng. Sau 3 tuần, công thức có tỷ lệ cây ra rễ cao nhất cũng chỉ đạt 90%.
Nồng độ saccaroza có khả năng kích thích nhanh sự ra rễ vẫn là 6 -7,5%. Tuy nhiên, sau 3 tuần nuôi cấy chưa có công thức nào đạt tỷ lệ cây ra rễ 100% và nồng độ saccaroza cao (9%) chưa biểu hiện rõ ức chế sinh trưởng, phát triển của bộ rễ như giống QĐ15.
Theo Kambaska Kumar Behera và Santilata Sahoo
Mụi trường tạo rễ: cỏc thõn non dài khoảng 5-6 cm cắt ra từ ống nghiệm được cho vào mụi trường MS bỏn rắn cú bổ sung nồng độ khỏc nhau của IBA, NAA và IAA (0,5- 3.0 mg/l) riờng lẻ hoặc kết hợp.
Ra rễ in vitro và làm quen với khớ hậu: Cỏc loại auxin được sử dụng ở nồng độ khỏc nhau và kết hợp để tạo rễ bất định. Trong số đú NAA và IBA đỏp ứng tương đối tốt hơn so với IAA cho việc tạo rễ. Sự kết hợp NAA + IBA cho thấy kết quả tớch cực. Việc tạo rễ tốt nhất trờn mụi trường MS bỏn rắn cú bổ sung 2,5 mg/l NAA (Bảng 3.5) và số rễ/chồi cao nhất là 13,4 ± 1,5, mà chỉ mất 8 -10 ngày cho sự tỏi sinh mầm rễ với chiều dài rễ trung bỡnh là 4,0 ± 0,94 cm cho giống Nayana hàng tại Orissa (Bảng 3.5).
Bảng 3.3. Ảnh hưởng của cỏc loại auxin lờn sự hỡnh thành rễ in vitro trờn mụi trường MS TN Nồng độ
(mg/l)
% chồi tạo rễ
Số rễ/chồi Chiều dài trung bỡnh của rễ Ngày xuất hiện rễ IBA T1 0.5 20 3.2 ± 0.47 1.9 ± 0.45 15-20 T2 1.0 25 3.5 ± 0.61 2.1 ± 0.41 15-20 T3 1.5 60 5.3 ± 0.32 2.3± 0.32 11-14 T4 2.0 72 8.2 ± 0.84 2.5 ± 0.23 10-12 T5 2.5 82 10.5 ± 0.70 3.4 ± 0.65 10-12 T6 3.0 46 4.6 ± 0.65 1.8 ± 0.09 10-15
31 NAA NAA T7 0.5 20 3.2 ± 0.65 0.9 ± 0.45 12-15 T8 1.0 40 3.8 ± 0.47 1.0 ± 0.29 12-15 T9 1.5 65 5.2 ± 0.74 1.5 ± 0.23 10-12 T10 2.0 79 8.3 ± 0.28 3.4 ±0.47 10-12 T11 2.5 85 11.2 ± 1.5 4.0 ± 0.94 8-10 T12 3.0 55 5.1 ± 0.47 2.0 ± 0.47 10-15 IAA T13 0.5 0 0 0 0 T14 1.0 15 2.2 ± 0.33 0.75 ± 0.04 10-18 T15 1.5 20 3.2 ± 0.65 0.8 ± 0.12 10-17 T16 2.0 25 1.5 ± 0.23 1.0 ± 0.43 10-15 T17 2.5 30 2.2 ± 0.16 2.5 ± 0.47 10-15 T18 3.0 50 5.6 ± 0.57 1.5 ± 0.23 12-15 NAA+IBA T19 0.5+0.5 0 0 0 0 T20 0.5+1.0 40 5.2 ± 0.61 2.3 ± 0.37 10-17 T21 1.0+1.0 52 5.8 ± 0.61 3.2 ± 0.89 10-15 T22 1.5+0.5 60 6.4 ± 0.71 1.4 ± 0.28 15-17 T23 0.5+1.5 48 5.3 ± 0.74 1.2 ± 0.33 10-17 T24 2.0+0.5 50 6.4 ± 0.92 1.9 ± 0.14 10-12 T25 0.5+2.0 75 10.4 ± 0.67 3.5 ± 0.47 12-14 T26 2.5+0.5 60 6.7 ± 0.96 2.5 ± 0.89 10-12 T27 0.5+2.5 82 11.3 ± 1.08 3.9 ± 0.47 10-15 T28 3.0+0.5 40 5.2 ± 1.01 3.2 ± 0.61 15-17 T29 3.0+1.0 35 4.2 ± 0.37 3.0 ± 0.80 15-17 T30 1.0+3.0 30 3.3 ± 0.47 2.8 ± 0.49 15-17
Hỡnh 3.3. Chồi ra rễ trong mụi trường MS bỏn rắn cú bổ sung NAA (2.5 mg/l).
Theo Lal và Singh (1994) rễ cú thể dễ dàng tạo ra trờn cỏc chồi nuụi cấy bằng cỏch chuyển chỳng sang mụi trường cú hoặc khụng cú NAẠ Baksha và cs (2002) đó sử dụng 5,0 mg/l NAA cho phản ứng tạo rễ tốt nhất trong mụi trường MS bỏn rắn. Sabaz và cs (2008) đó sử dụng 1,0 mg / l IBA như là hormone tăng trưởng tốt nhất cho việc tạo rễ với số lượng rễ cao nhất là 41rễ/cõỵ Gosal và cs (1998) thu được rễ trờn mụi trường MS lỏng cú chứa NAA (5 mg/l) và 70 g/l sucrosẹ Ali và Afghanistan (2001) quan sỏt thấy
32
chỉ cú 6-7 rễ sau 3 tuần nuụi cấy trờn mụi trường MS cú chứa 2,0 mg/l IBA và 6% sucrosẹ Baksha và cs (2002) cũng thu được sự tạo rễ ở 0,1-0,5 mg/l IBA cựng với 0,5- 2,0 mg/l BAP nhưng đú chỉ là chất lượng kộm. Những phỏt hiện này cũng khớp với những phỏt hiện trước đú của Nadar và Heinz (1977). Alam và cs (2003) bỏo cỏo rằng phản ứng tạo rễ tốt nhất là ở 2,5 mg/l IBA với 16 rễ/chồi với chiều dài rễ 1,1 cm. Mamun và cs (2004) thu được kết quả tạo rễ tốt nhất trờn mụi trường MS cú bổ sung auxin (NAA + IBA) 0,5 mg/l đối với từng chất. Chỳng ta cũng thấy rằng 0,5 mg/l NAA và 2,5 mg/l IBA cho phản ứng tạo rễ tốt thứ hai với số rễ 11,3 ± 1,08/chồi và chiều dài rễ 3,7 ± 0,47 cm. Cỏc cõy con với chồi và rễ phỏt triển tốt sau khi cho thớch ứng với điều kiện khớ hậu sẽ được chuyển ra đất (Bảng 3.3, hỡnh 3.4).
Hỡnh 3.4. Tăng tớnh chịu đựng của cõy trờn khay nhựa