(Kỹ thuật điện di trên giấy thạch) *Nguyên lý:
Các Globulin a và p kết hợp với lipid huyết thanh tạo thành phức hợp Lipoprotein. Các chất này bị phân cực trong môi trường đệm Veronal pH=8,6 và bị tác dụng của điện trường sẽ tách thành 2 phần chủ yếu.
*Dụng cụ và thuốc thử: -Máy điện di.
-Giấy A4 cắt thành băng rộng 2,5cm dài tuỳ theo máy
-Khuôn làm rãnh để bệnh phẩm: que thuỷ tinh có đường kính 3-4mm, cắt thành từng đoạn dài 15 cm
-Dung dịch đệm Veronal pH=8,6 (f = 0,05) Veronal Natri 10,30g Veronal acid l,84g Nước cất vđ 1000ml.
-Pha thạch đệm 1% : lg thạch đã tinh chế ngâm vào 100ml dung dịch đệm pH = 8,6. Đun sôi cách thuỷ đến khi tan hết, lọc qua gạc
-Dung dịch bão hoà Soudan đen trong cồn tuyệt đối -Dung dịch phai màu: acid acetic băng 20% trong cồn 96°
*Tiến hành.
-Nhuộm bệnh phẩm: -Dung dịch Soudan bão hoà 0,04ml
.Huyết thanh 0,20ml
Lắc kỹ, để yên 30 phút trong tủ ấm
-Chuẩn bị giấy thạch: Đổ 4ml dung dịch thạch đệm lên băng giấy đã nhúng ướt đều trong dung dịch đệm và trải thẳng xuống miếng kính nhấn đã đặt thăng bằng. Ngay khi thạch đã láng đều trên mặt giấy, dùng kẹp đặt các
khuôn thuỷ tinh vào các vị trí đã đánh dấu. Trên mỗi băng giấy thạch đặt hai khuôn, sau đó đổ thêm một lớp dung dịch thạch đệm lên (4ml). Khi thạch đã nguội, dùng kẹp gắp các khuôn ra, trên mặt thạch sẽ có các rãnh để bệnh phẩm. Dùng ống mao quản lấy huyết thanh đã nhuộm màu cho vào rãnh thạch. Đặt các băng giấy thạch có bệnh phẩm lên tấm kính giữa hai máng, để hai đầu băng giấy thạch nhúng xuống hai máng chứa dung dịch đệm Veronal
pH = 8 ,6
-Chạy điện di: Đậy kín nắp chậu, bật máy,chỉnh cường độ cho mỗi băng điện di 8mA. Thời gian chạy 2 giờ 30 phút (hoặc theo dõi khi thấy thành phần p -Lipoprotein vượt qua rãnh khoảng 2-3 mm là đủ).
-Chiết màu và tính tỷ lệ thành phần: c ắ t hai phần (bỏ phần rãnh để bệnh phẩm) ngâm vào dung dịch phai màu (3ml). Nghiền nát thạch, để yên 30 phút, ly tâm lấy dịch trong.
Đo mật độ quang ở bước sóng X = 600 nm, đối chiếu với dịch phai màu Tính kết quả: Tỷ lệ Ị3/a Lipoprotein = ty'
Da (D: mật độ quang)