Trong y hoc cô truyên, TTT thuôfng duoc dùng làm thuôc chüa liêt duong, di tinh, dau lung, dau nhüc gân xuong, tiêu hôa kém vôi liêu dùng là 6-12g/ngày, dang thuôc sac hay thuôc bot. Ngoài ra, côn duoc dùng trong sân khoa de tri chüng thân hu, thai dông, doa sây, thuông phoi hop vôi câc vi thuôc nhu tue doan, tang kÿ sinh, dô trong dë bô thân, an thai hay dùng dë tri chüng tiêu khât, tri mât mô, hoa mât do thân hu, can thân bât tüc (thuôfng gàp à nguci già) và tri bach diê'n phong.
PHÂN 2 - NGUYÊN LIÊU, DÔI Tl/ONG VÀ PHI/ONG p hA p n g h i ê n ctru
2.1. NGUYÊN LIÊU
Vi thuô'c Thô ty tir do Công ty Cô phân duoc phâm Trung uong Mediplantex cung cap, dat câc tiêu chuân cûa DDVNIII.
• Phuong phâp chébién: thé hiên à hînh 2.1.
Hînh 2.1. Câc giai doan bào che thô ty tü
• Mô ta câc giai doan bào che: TTT sau khi lâ'y vê, duac loai bô tap chat, rira sach bang nuôc sinh hoat, sau dô cho TTT vào nôi, bô sung nuôc, dun soi, ha
nhô lûa, tiê'p tue dun trong vông lh (sàc làn 1), nuôc sàc thu duac loc qua gac de duoc dich chiê't làn 1. Bâ duac lâ'y ra de sàc tiê'p làn 2 và làn 3 tuang tu nhu làn 1. Gôp toàn bô dich chiê't cüa 3 làn lai, cô câch thuÿ duac cao long 1:1,5 (lOOmg: 150ml).
2.2. DOI Tl/ONG NGHIÊN CÜU
• Chuôt công tràng, giô'ng duc, do Hoc viên Quân y cung cap, gôm 2 loai: chuôt công non 2 thâng tuoi cô trong lüçmg trung blnh 60-80g và chuôt công truông thành 4 thâng tuôi cô trong luçmg trung bînh,120-130g.
• Chuôt nhât trâng chüng Swiss, câ 2 giông, do phông chàn nuôi Viên vê sinh dich tê TW cung cap, cân nâng trung bînh 18-20g.
• Tàt câ chuôt duac nuôi trong phông thi nghiêm vôi cùng diêu kiên nhiêt dô, dô âm. Chuôt duac nuôi bâng thüc ân công nghiêp mua cüa viên Vê sinh dich tê Trung uang sân xuât dû tiêu chuân vê dinh duôfng và nuôc uông duac cung cap dây dû.
2.3. PHÜÛNG PHÂP NGHIÊN CÛU
2.3.1. Tâc dung cüa thô ty tuf lên churc nâng sinh sân nam
Thü nghiêm duac tien hành trên 3 dôi tuçmg: chuôt công trâng duc non thién, không thién và chuôt truông thành, su dung test sàng loc cüa Hershberger [22,28].
2.3.1.1. Nghiên cûu trên nhôrn dôi tuang chuôt công duc non không thién
Chuôt công trâng duc 60-80g, duac chia thành 3 lô, môi lô 10 con: Lô 1 (Chüng): Uông NaCl 0,9% (3ml/100g).
Lô2 (TES): Tiêm duôi da dùi dung dich TES trong dàu ôliu 0,4mg/kg thé trong (0,2ml/100g).
Lô 3 (ITT): Uông dich chiê't TTT 20g/kg (3ml/100g).
Chuôt duçfc uông và tiêm thuôc liên tue trong 10 ngày. Sau ngày thü 5, cân lai trong luang chuôt de tmh liêu môi nham cô su phù hop giüa liêu thuôc vôi su tâng trong luang chuôt. Ngày thü 11 cân lai trong luang chuôt. Sau dô giê't chuôt bâng cloroform, mô tâch lây câc ca quan sinh duc là tinh hoàn, tuyén tiên liêt, tüi tinh, tuyén cowper rôi dem cân câc ca quan này trên cân phân tich. Kê't quâ duac tmh bâng trong luçmg cüa câc ca quan trên so vôi 100g trong luçmg ca thé và duac so sânh giüa câc lô, câc sô liêu duac xü lÿ theo phuang phâp t-test student, su dung phàn mêm SPSS 13.0.
2.3.1.2. Nghiên cûu trên nhôm âôi tuang chuôt công duc non thién
Thi nghiêm duoc tien hành tuang tir nhu trên, nhung truôc khi thi nghiêm 1 ngày, tat câ câc chuôt déu duac thién.
* Kÿ thuât thién nhu sau:
Truôc hét, gây mê chuôt bàng ether mê, sau dô cô dinh chuôt trên bàn cô' mé. Dùng tay vuô't doc tù o bung xuô'ng, dë lô 2 tinh hoàn trong tüi biu. Sât trùng vùng da biu bàng côn ethanol 70°, dùng kéo rach mot duông giûa da biu, bôc lô 2 tinh hoàn, mot nguôi dùng kep nâng 2 tinh hoàn lên cao và ra phia truôc trong khi mot nguôi khâc dùng chî buôc chât môi dông mach tinh hoàn dë trânh chây mâu. Dùng kéo càt lây 2 tinh hoàn, sau dô khâu vêt mé lai, cuô'i cùng sât trùng vùng vêt mé. Chuôt sau khi duoc thiê'n së cho vào chuông theo düng lô và cho ân uô'ng binh thuông. Ngày hôm sau, sê bât dàu cho uong và tiêm thuôc [29].
2.3.1.3. Nghiên cûu trên nhôm âô'i tuong chuôt công âuc truông thành
Thi nghiêm duoc tien hành nhu dô'i vôi chuôt cô'ng non không thiê'n, sü dung chuôt cô'ng tràng duc dâ truông thành, càn nàng 120-130g.
Dén ngày thü 11, sau khi cân kiëm tra trong luong chuôt làn cuô'i thi tien hành lâÿ mâu chuôt dë làm xét nghiêm dinh luong TES. Tinh hoàn cüng duoc bôc tâch theo kÿ thuât nhu trên, sau khi cân xong là cho ngay vào dung dich Bouin dë bâo quân và dua dê'n Bô mon Mô phôi truông Dai hoc Y Hà Nôi dë làm tiêu ban mô bênh hoc (thôi gian tù khi giê't chuôt dê'n khi dua té chüc di làm tiêu bân không quâ 4 giô nhàm trânh hoai tü).
2.3.1.4. Sffâô nghiên cûu
CHUÔT D ir e
Non không thién
Chüng TES ITT' r Non thien Chü’ng TES TTT Trurômg thành Chüng TES TTT
Trong litqmg co quart sinh duc
Tinh hoàn Tüi tinh TTL Cowper
Mô hoc tinh hoàn
TES huyêt thanh Hînh 2.2. Sa dô nghiên cûu
2.3.2. Dôc tmh cap cüa thô ty tü
Dôc tmh cap cûa TTT duac xâc dinh theo phuong phâp Litchfield- Wilcoxon [7]: cho tùng lô chuôt nhàt tràng uông thuôc thu vciï lieu tâng dan. Theo dôi tînh trang chung cüa chuôt và tÿ le chuôt chét trong vông 72 giô, xâc dinh liêu gây chét 50% so chuôt (LD50). Tiép tue theo dôi diên bién chuôt trong vông 4 ngày sau do, ghi nhân câc dàu hiêu bât thuông.
2.3.3. Xûr lÿ so liêu
Câc so liêu nghiên crïu sè duac xir lÿ theo phuang phâp t-test student, su dung phàn mêm SPSS 13.0 dé so sânh su khâc biêt giüa câc nhom nghiên ciru.
Két quâ nghiên crïu dôc tmh cap cüa TTT duac xü lÿ theo phuang phâp cüa Litchfield- Wilcoxon [7],
2.3.4. Dia diëm nghiên cufu
Tâc dung lên chiîc nâng sinh sân nam duac tien hành tai Bô mon Duac lÿ Trucmg dai hoc Duac Hà Nôi và Bô mon Duac lÿ Truôrng dai hoc Y Hà Nôi. Dinh luang TES trong huyét thanh à nhom chuôt truang thành duac tién hành tai Khoa sinh hoâ cüa Bênh viên Phu sân Trung uang. Hînh ânh mô hoc tinh hoàn duac làm tai Bô môn Mô phôi truôrng Dai hoc Y Hà Nôi.
PHAN 3 - KÉT QUÂ THlfC NGHIÊM VÀ BÀN LUÂN
3.1. TÂC DUNG CÜA THÔ TY TÜLÊN CHtTC NÀNG SINH SAN NAM
De dânh giâ tâc dung cûa TTT lên chüc nàng sinh sân nam, chüng tôi sü dung thü nghiêm Hershberger. Dây duoc dânh giâ là mot phuong phâp nhay câm, co giâ tri, uâng tin cây, dê tien hành và duoc lua chon cho nhüng sàng loc invivo nhàm phât hiên câc thuôc co tinh chü vân hay doi khâng vôi androgen. Thü nghiêm này dâ duoc tien hành ô nhiêu noi trên thé giôi, dua vào su dâp üng cüa câc co quan sinh duc phu cüa chuôt công duc non là tüi tinh, tuyén tiên liêt và tuyén cowper [24,28].
Thü nghiêm Hershberger thuông sü dung dô'i tuong chuôt công non thién (khoàng 6-12 tuàn tuoi) nhu nghiên cüu cüa Takeshi Kunimatsu và công su nâm 2000 vê tâc dung androgen cüa 3 thuôc Esfenvalerate, Fenvalerate và Permethrin trên nhôm chuôt duc thién 11 tuàn tuoi [27] hay nghiên cüu cüa IL Hyun Kang và công su vê so sânh tâc dung anti-androgen cüa câc thuôc Flutamide, Vinclozolin, Procymidone, Linuron và P,P’-DDE thuc hiên trên chuôt non thiê'n 6 tuàn tuôi [23]. Do là do chuôt cô'ng non dang trong thôi kÿ sinh truông phât triën manh nhât, dâc biêt là câc co quan sinh sân, nên nghiên cüu tâc dung cüa mot thuôc huong sinh duc trên chuôt công non së cho két quâ rô nhât. Chuôt duoc thiê'n truôc khi nghiên cüu nhàm loai bô tâc dông cüa TES nôi sinh, lue này su phât triën cüa câc co quan sinh duc dà bi giâm nhiêu, và ânh huong cüa thuôc trên chüc nâng sinh sân së duoc thë hiên rô ràng.
Trong nghiên cüu này, chüng tôi côn tiên hành trên 2 nhôm dô'i tuong khâc nüa dô là chuôt công duc non không thiê'n và chuôt duc truông thành:
• Mue dich khi nghiên cüu trên nhôm chuôt non không thiê'n là chüng tôi muôn dânh giâ tâc dung cüa thuôc trong diêu kiên phât triën tu nhiên, khi chüc nàng sinh sân cüa chuôt côn binh thuông nhàm so sânh vôi nhôm chuôt non thiê'n. • Mue dich khi nghiên cüu trên nhôm chuôt truông thành là do ô dô tuôi này, câc co quan sinh sân chuôt bàt dau ôn dinh và cüng là thôi kÿ chuôt bât dau
sinh sân. Màt khâc, trong thuc té, vi thuôc TTT duoc sü dung chu yê'u dé chùa bênh trên câc doi tuong nam giôi dâ truong thành. Do vây, viêc lua chon nhom chuôt truông thành cüng là phù hop vôi üng dung lâm sàng cüa thuô'c. 0 nhom này, ngoài nghiên cüu câc chï sô' sinh sân, chüng tôi côn tiên hành dinh luong nông dô TES trong huyê't thanh và dânh giâ nhüng thay doi trong hînh thâi mô bênh hoc tinh hoàn chuôt.
Thuc tê' trên thê' giôi dâ cô câc nghiên cüu vê tâc dung androgen cüa aiuô'c trên câc nhom chuôt cô'ng duc ô câc dô tuoi khâc nhau và không thién nhu nghiên cüu cüa Ray Sahelian (2002), Truông Dai hoc Y Shantou Trung Quô'c tiên hành nghiên cüu tâc dung cüa flavonoid toàn phân cüa TTT lên chüc nàng sinh sân nam trên câc nhom chuôt duc không thiê'n tù 2-24 thâng tuoi [30]. Diéu này làm chüng tôi càng vùng tin han vào viêc lua chon dôi tuçfng nghiên cüu cüa mïnh.
Nghiên cüu vê tâc dung cüa TTT lên chüc nâng sinh sân nam cüa chuôt cô'ng tràng duc, chüng tôi thu duac nhüng kê't quâ sau:
3.1.1. Trên chuôt cô'ng trâng duc non không thién
3.1.1.1. Su thay doi trong litong chuôt truôc và sau thi nghiêm
Cân trong luong chuôt truôc và sau 10 ngày làm thi nghiêm, so sânh su thay doi trong luçmg chuôt, ta thu duoc kê't quâ à hînh 3.1. Su thay doi trong luong chuôt không nhüng phân ânh diêu kiên nghiên cüu mà côn thé hiên tâc dung cüa thuôc.
<0.001
<0.05
Lô 1 Lô 2 Lô 3
9
Hinh 3.1. Anh huâng cüa TTT lên trong luang chuôt truôc và sau thi nghiêm à lô chuôt công non không thién
Nhân xét:
Trong luçmg cüa câc lô chuôt truôc thi nghiêm là nhu nhau (p > 0,05). Sau 10 ngày thi nghiêm, trong luçmg chuôt à câc lô dêu tâng lên mot câch co ÿ nghîa thông kê, trong do lô uông TTT co tÿ lê tâng cao nhât tdfi 36,72% vôi p < 0,001. Không co khâc biêt vê su tâng trong luçmg giùa câc nhom nghiên ciru, diêu này chüng tô chuôt à câc lô duac nuôi trong diêu kiên thi nghiêm nhu nhau.
3.1.1.2. Tâc dung cüa TTT lên su phât trién cüa tinh hoàn a chuôt công non không thién
Két thüc dçrt nghiên cuu, giét chuôt bâng cloroform, bôc tâch tinh hoàn tùng con; roi dem cân roi tmh tÿ lê trong luçmg câc ca quan này so vôi trong luçmg toàn cô thé, so sânh giûa nhom dùng thuôc voti nhom chüng và nhom dùng TES. Su thay doi trong luçmg tinh hoàn phân ânh tâc dung cüa thuôc lên câc co quan sinh sân nam. Két quâ duçfc thé hiên à bâng 3.1:
Bang 3.1. Ânh huông cüa TTT lên trong luong tinh hoàn ô lô chuôt công non không thién
Lô Thuôc dùng n Trong luong tinh hoàn (g/lOOg thé trong) % thay doi 1 NaCl 0,9% 10 1,09 ±0,19 2 TES 0,4mg/kg 10 1,2 2 + 0.12 p,_2 > 0,05 11,9 (t) 3 TTT 20g/kg 10 1,66 ±0,31 Pl-3 < 0,01 52,3 (t) t: % tàng so vôi lô chûng Nhân xét:
TTT vôi liëu 20g/kg thë trong dâ làm tàng trong luong tinh hoàn lên mot câch dang kë (vôi p < 0,01), trong khi do TES 0,4mg/kg/24h không làm tàng trong luong tinh hoàn lên dén müc cô ÿ nghïa thông kê (p > 0,05). Chüng tôi lÿ giâi diêu này nhu sau: trên môt co thë binh thuông, khi dùng TES ngoai sinh, TES së tâc dung theo co ché feedback (-) lên vùng duôi doi- tuyén yên [18] gây üc ché sân xuât câc hormon huông sinh duc nam nhu GnRH, LH. Câc hormon này lai cô vai trô quan trong trong viêc phât triën tinh hoàn. Do vây, ô lô tiêm TES, tinh hoàn chuôt không thay déi môt câch cô ÿ nghïa là hop lÿ. Côn à lô chuôt uong TTT liêu 20g/kg môi ngày dâ làm tàng trong luong tinh hoàn rô ràng. Phâi châng, TTT cô tâc dung truc tiép lên sü phât triën cüa tinh hoàn chü không dông vai trô là môt androgen ngoai sinh nhu TES. Nghiên cüu cüa Ray Sahelian cüng dua ra két quâ tuong tu khi cho chuôt non 2 thâng tuoi uong dich chiét chüa câc flavonoid cüa TTT vôi liêu 300mg/kg/24h [30].
3.1.1.3. Tâc dung cüa thô ty tü lên su thay doi trong luong tui tinh, tuyén tien liêt và tuyén cowper cüa chuôt duc non không thién
Bâng 3.2. Anh hitàng cüa TTT lên trong luong tui tinh, tuyén tien liêt và
9
tuyén cowper â chuôt công duc non không thién
Lô Thuô'c dùng n Trong luong tui tinh (g/100g) Trong luong tuyén tien liêt
(g/lOOg) Trongluong tuyén cowper (g/lOOg) 1 NaCl 0,9% 10 0,033 ±0,013 0,034 + 0,013 0,0074 ± 0,0049 i 2 TES 0,4mg/kg 10 0,141 ±0,023 Pi.2 < 0,001 0,077 ±0,021 Pi-2 < 0,001 0,0240 ±0,0029 Pi-2 < 0,001 3 T1T 20g/kg 10 0,106 ±0,049 p13 < 0,01 p2.3 > 0,05 0,074 ±0,025 Pi-3 < 0,01 p2-3 > 0,05 0,0203 ±0,0065 Pl-3 < 0,01 p2-3 > 0,05 Nhân xét:
Nghiên cüu cüa IL Hyun Kang và công sir sü dung thü nghiêm Hershberger dâ chüng minh liêu dùng TES 0,4mg/kg/24h là liêu thé hiên tâc dung rô ràng nhàt lên câc co quan sinh duc phu nhu tüi tinh, tuyén tiên liêt, tuyén cowper, co nâng hang...[23]. Trên doi tuçfng chuôt cô'ng non không thiê'n, chüng tôi cüng thu duoc kê't quâ TES liêu 0,4mg/kg/24h làm tàng rô rêt trong luong tüi tinh, tuyê'n tiên liêt và tuyê'n cowper lên dê'n mûc cô y nghïa thô'ng kê vôi p<0,001. Dôi vôi lô uô'ng TTT liêu 20g/kg/24h, trong luong cüa tüi tinh, tuyén tiên liêt và tuyê'n cowper cüng tâng lên dê'n müc cô y nghïa vôi p < 0,01. Dieu này hoàn toàn hop lÿ bôi vî khi TTT cô tâc dung làm phât triën tinh hoàn thî dông thôi cüng kfch thfch sân xuàt TES nôi sinh. Mà TES lai cô tâc dung làm phât triën câc tuyén sinh duc phu nhu tüi tinh, tuyén tiên liêt và tuyê'n cowper. Nhu vây, cô thë thay TTT cô tâc dung làm phât triën câc co quan sinh sân phu nhu tüi tinh, tuyê'n tiên liêt và tuyén cowper nên làm tâng luong tinh dich.
Tâc dung cüa TTT lên su phât triën cüa tüi tinh, tuyê'n tiên liêt và tuyê'n cowper tuong duong vôi TES (p > 0,05).
3.1.2. Trên chuôt công trâng duc non thién
3.1.2.1. Su thay dôi trong luçmg chuôt truôc và sau thi nghiêm trên chuôt công duc non thién
Két quâ duac thé hiên à hinh 3.2:
<0,05
Lô 1 Lô 2 Lô 3
Hinh 3.2. Su thay doi trong luang truôc và sau thi nghiêm trên chuôt cong trâng duc non thién
Nhân xét:
• Truôc thi nghiêm, trong luang chuôt à câc nhom dông dëu nhau, su khâc biêt không co ÿ nghîa thông kê.
• Sau dot thi nghiêm, tât câ câc lô chuôt dêu tâng trong luang (ptruôc.sau < 0,05). Không cô su khâc biêt cô ÿ nghîa vê su tâng trong luang giüa câc nhom nghiên cüu. Nhu vây, cô thé thay diêu kiên thi nghiêm tuang dôi dông nhât giüa câc nhom nghiên cüu. Cüng nhu dôi vôi nhom chuôt non không thién, à nhom chuôt non thién, TTT liêu 20g/kg cüng làm tâng trong luang chuôt tôi müc cao nhât là 19,72% vôi p < 0,05. Diêu dô chüng tô ràng ngoài tâc dung lên câc ca quan sinh sân nam, TTT côn cô tâc dung kïch thich su tâng truông cûa chuôt.
Diêu này co thë lÿ giâi là do thành phân hoâ hoc cüa TTT co chüa nhiêu tinh bôt, câc acid béo... nên rat tôt cho su phât triën cüa co thë [201-
3.1.2.2. Tâc dung cüa thô ty tü lên su phât triên cüa tui tinh, tuyén tien liêt, tuyên cowper ô lô chuôt công non thién
Két quâ duoc thë hiên ô bâng 3.3:
Bâng 3.3. Anh huong cüa TTT lên trong luong tûi tinh, tuyên tien liêt và