Hệ 3: Cloroíor m Ethylacetat [9:1].
3.3.1.Xác định hoạt độ chống oxy hoá theo phương pháp Blagodorop
* Chuẩn bị dịch chiết: Cân chính xác khoảng 5g bột dược liệu cho vào bình nón dung tích 50ml, thêm nước, đun sôi, chiết trong 3 giờ chia làm 3 lần (lần thứ nhất 1,5 giờ, lần thứ hai 1,0 giờ, lần thứ ba 0,5 giờ) mỗi lần 30ml nước. Gộp các dịch chiết, cô thành cao - nước [1:1], lấy 1,5 ml dịch cao pha thành 100 ml ta được dịch chiết cần thử nồng độ 1,5 %.
* Tiến hành: Trong những lọ màu nâu cùng loại, cho hỗn hợp phản ứng gồm:
- 2 ml Tween 80 1%.
- 0,2 ml dung dịch muối sắt II (FeS04) 10' 3 M. - 0,2 ml dung dịch acid ascorbic 10’2 M
- 0,6 ml dịch chiết thuốc (mẫu đối chứng thay bằng 0,6 ml nước cất) Đậy nút kín, lắc kỹ, ủ ở nhiệt độ 40°c trong 48 giờ. Lấy 2ml hỗn hợp sau khi ủ, thêm vào đó 1 ml dung dịch acid tricloracetic 30%, để yên trong 1 giờ, sau đó đem ly tâm 5 phút với tốc độ 4200 vòng/phút. Lấy 2ml dịch trong sau ly tâm, thêm 2ml dung dịch acid thiobarbituric 0,25%, đun cách thủy trong 15 phút, rồi để nguội đến nhiệt độ trong phòng. Đo màu của phức tạo thành ở bước sóng Ả = 532 nm. Tính lượng MDA với hệ số tắt 8 = 0,156 nm or'cm 'i
Nếu trong mẫu thử có chất chống oxy hoá thì lượng MDA tạo thành phải ít hơn mẫu đối chứng (tức mật độ quang của mẫu thử phải thấp hơn mẫu đối chứng).
B ảng 9 . Kết quả hoạt độ chống oxy hoá theo phương pháp Blagodorop
TT M ẫu M ật độ quang (E) MDA (nmol/1) H T C O (%)
1 Mẫu chứng 0,121 4,659 0 2 Mẫu thử 1 0,050 1,925 58,68 3 Mẫu thử 2 0,049 1,887 59,50 4 Mẫu thử 3 0,053 2,041 56,19 5 Mẫu thử 4 0,051 1,964 57,85 6 Mẫu thử 5 0,047 1,810 61,15 Trung bình 58,67 ± 2,29
Với lượng MDA được tính theo công thức: F 4 3
x = 3 = 3%5 . E 0,156. 2 0,156. 2
Trong đó: X: Lượng MDA (đơn vị nmol/1)
E: Mật độ quang của mẫu đo
4: Thể tích mẫu khi đo quang (ml) 3: Thể tích toàn phần của mẫu phân tích (ml) 2: Thể tích dịch trong để xác định MDA (ml) 0,156: Hệ số tắt mol (nmol ' 1. cm '];i)
Hoạt độ chống oxy hoá được tính theo công thức:
HCTO = Xc - X t X 100 Xc
Trong đó: HTCO: Hoạt độ chống oxy hoá
x c. Lượng MDA của mẫu chứng
Trong thí nghiệm này nồng độ chất thử được dùng là: (0,6ml X 0,015 g/ml) : 3 ml = 0,003 g/ml = 3 mg/ml
Nhán xét: Nấm Linh chi trồng ở Việt Nam với hàm lượng 3 mg dược liệu trong ỉ ml hỗn hợp phân tích có khả năng ức chế quá trình peroxyd hoá acid béo chưa no (Tween 80) với hoạt tính chống oxy hoá là 58,67 ± 2,29 % (so với mẫu đối chứng).