2.4.2.1. Định lượng
Phương pháp định lượng được tiến hành dựa theo Dược điển Việt Nam 4 [5]
Các điều kiện sắc kí:
Pha động: Hỗn hợp 5 thể tích methanol và 95 thể tích dung dịch kali dihydrophosphat monohydrat 0,78% (kl/tt) đã được điều chỉnh đến pH 4,4 bằng acid phosphoric. Cột: C18 (25cm x 4,6mm; 5 m). Detector: 220 nm. Tốc độ dòng: 1,5ml/phút. Thể tích tiêm: 20 L. Dung dịch chuẩn:
Cân chính xác khoảng 100mg amoxicilin vào bình định mức 100ml, thêm 80ml nước cất hai lần, siêu âm 15 phút, bổ sung nước cất hai lần đến vạch được dung dịch gốc amoxicilin 1mg/ml.
Cân chính xác khoảng 200mg acid clavulanic vào bình định mức 200ml, thêm 180ml nước cất, siêu âm 15 phút, bổ sung vừa đủ 200ml nước cất hai lần dược dung dịch gốc acid clavulanic 1mg/ml.
Từ các dung dịch gốc trên pha loãng thành dung dịch chuẩn có chứa đồng thời amoxicilin và acid clavulanic có nồng độ lần lượt là 200µg/ml và 10µg/ml.
Dung dịch thử: Cân 10 viên, tính khối lượng trung bình, nghiền thành bột mịn. Cân chính xác một lượng bột tương ứng với 400mg amoxicilin vào bình định mức 200 ml, thêm180 ml nước cất, siêu âm 15 phút, bổ sung nước cất đến vạch, lọc và
Lớp GPKD Nén sơ bộ
bỏ 20ml dich lọc đầu. Hút chính xác 10ml dịch lọc vào bình định mức 100ml, bổ sung nước vừa đủ để được dung dịch có nồng độ amoxicillin và acid clavulanic khoảng 200µg/ml và 12,5µg/ml. Lọc mẫu thử qua màng lọc 0,45µm.
Tiến hành sắc ký lần lượt đối với dung dịch chuẩn và dung dịch thử, so sánh diện tích pic của mẫu thử với mẫu chuẩn và dựa vào nồng độ mẫu chuẩn để tính nồng độ mẫu thử, từ đó suy ra hàm lượng dược chất trong viên.
Tính kết quả: Cth = Cch ×
%HL = ×
× × 100%. Trong đó:
Cth, Cch lần lượt là nồng độ dược chất trong mẫu thử và mẫu chuẩn. Sth, Sch lần lượt là diện tích pic của dược chất của mẫu thử và chuẩn. mth, mch lần lượt là khối lượng cân của mẫu thử và chuẩn.
%HL là hàm lượng % của dược chất trong viên.
Phương pháp định lượng cũng được thẩm định về độ tuyến tính, độ đúng, độ lặp lại.
2.4.2.2. Thử độ hòa tan
Thử hòa tan viên nén hai lớp được thực hiện dựa theo nguyên tắc được ghi trong Dược điển Việt Nam 4 [5] với các điều kiện:
Sử dụng cánh khuấy.
Tốc độ quay: 75 ± 1 vòng/phút.
Môi trường: 900 ml dung dịch đệm phosphat pH 6,8. Nhiệt độ: 37 ± 0,5oC.
Thời gian lấy mẫu: 15 phút, 30 phút, 45 phút, 1 giờ, 2 giờ, 3 giờ, 4 giờ, 5 giờ, 6 giờ.
Cân chính xác khối lượng từng viên (3 viên/1 CT) và thử hòa tan trong điều kiện đã nêu trên.
Mẫu chuẩn: Pha dung dịch chuẩn có nồng độ amoxicilin và acid clavulanic lần lượt là 200µg/ml và 10µg/ml như mục như mục 2.4.2.1. Lọc qua màng lọc 0,45µm.
Mẫu thử: Tại mỗi thời điểm lấy mẫu, hút 5ml dịch hòa tan lọc qua hệ thống lọc, bù lại bằng 5ml môi trường. Pha loãng dịch lọc rồi lọc qua màng lọc 0,45µm và tiến hành sắc kí với điều kiện như mục 2.4.2.1, so sánh với mẫu chuẩn.
Tính kết quả:
Nồng độ dược chất trong mẫu thứ n:
Cn = Cch× (µg/ml) Dược chất giải phóng sau mẫu thứ n:
Mn = × × ⋯ × × (mg)
% dược chất giải phóng:
H =
× × 100% Trong đó:
Cn, là nồng độ dược chất trong dịch hòa tan rút ra tại thời điểm n. Cch là nồng độ dược chất trong mẫu chuẩn.
Sn là diện tích pic sắc kí của dung dịch thử hòa tan rút tại thời điểm n. Sch là diện tích pic của mẫu chuẩn.
Mn là lượng dược chất giải phóng được tại thời điểm n. Hn là % dược chất giải phóng được tại thời điểm n. HL là hàm lượng dược chất trong viên viên nén. mv là khối lượng viên.
So sánh hai đồ thị giải phóng [22]
So sánh hai đồ thị giải phóng dược chất dựa vào hệ số tương đồng f2 và được tính theo công thức sau:
= 50 × 1 +1× ( − ) × 100
Trong đó: n là số điểm lấy mẫu thử, Ri, Ti lần lượt là phần trăm dược chất giải phóng tại thời điểm t của mẫu đối chiếu, mẫu thử.
Nếu 50 ≤ f2 ≤ 100: hai đồ thị được coi là tương đương. Nếu f2 = 100 hai đồ thị được coi là giống nhau hoàn toàn.
CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU