Để đốt cháy hoàn toàn mẫu thử trong bình vô cơ hoá, cần phải nắm vững kỹ thuật gói và đốt mẫu.
Chúng tôi tiến hành cân một lượng mẫu thử, gói trong giấy lọc không tro của Đức. Dùng dây điện trở chịu nhiệt làm giá đốt mẫu, cuốn theo kiểu lò xo vói số vòng thích hợp. Đưa mẫu vào giá đỡ và tiến hành đốt cháy trong bình vô cơ hoá.
Đối vód lượng mẫu thử, theo qui định chung trong Dược điển Mỹ XXIV là 100-200mg thì chúng tôi lấylOOmg để đốt.
Đối với que đốt mẫu thử, chúng lOii đã sử dụng (lây điện Irở chill nhiệt cao, tnộl đđii được gắn một mil cao SII (hích liựp với bìnli đối. Mô hình que (1Ố1 đưực liình bày ở hình dưới :
Mô hình que (lốt
Nliện xél: Chiều dài cíia vòng lò xo soắn (|uanh tìiÃii phải thích hợp đổ chd quá Irìnli cháy không nlianh quá và không clio nhiều muội đối với (lạng nang rnềni (nếu các vòng lò X(1 cliặl qiiá thì cháy kliỏng hết).
Tĩdiig quá Irình thực ngliiệm chiìng tôi, chọn chiền dài lò xo khoảng 4,.Sem đối V(VÌ niAn có khối lượtig kliomig l()f)mg là thích liỢp.
2.3.4. ĐỊiilì lượng Sclon Iroiig chế phẩm (liiiốc dạng nang mềiTì pre Asilß Trong các lài liệu tham khảo về tĩỊnh lượng Selen à V iệl Nam cũng như
trong Dơợc điển Mỹ XXIV, elnìng tôi chưa Ihấy có những chuyên hiận cụ thể
về cách phá niÃii dể (lỊnh lirợng Selen trong một chế phẩm (huốc. Vì vậy,
chúng lôi phải ngliicn cứu, khả(ì sál các cách lấy mẫu để vỏ cơ hoá chế phẩm khi định lượng Selen. Với ciiế pliẩm (hiiốc dạng nang rnềin,chúng lôi Ihấy có ihổ liến hành khảo sát theo hai cách sau:
- Cách thứ nhất: Lây mộl số lượng lớn nang ihviốc, làrn đổng nhất hoá phổn dđii llmốc. Sau đó cAii mAu, vỏ cơ hoá để liến hồnh xác định Iiỉírn lượiig Selen Irnng bình Irong mộl nang.
- Cách thứ hai: Vô C(í lidá hoàn loàn dổii Ihiiốc lấy ra lừ inộl luing mềm, sau (16 xác định hàm lượng Selen Irong nang.
23.4.1. Cách thứ nhất
Trong một vỉ thuốc, lấy ngẫu nhiên 20 viên. Cân 20 nang thuốc, cắt vỏ nang, lấy toàn bộ phần dầu thuốc vào một cốc thủytinh sạch, khô, vỏ nang rửa sạch bằng cyclohexan, để khô, cân tổng khối lượng vỏ nang để xác định khôi lượng dầu thuốc trung bình trong một nang. Dùng đũa thủytinh đánh đều toàn bộ phần dầu thuốc trong cốc để tạo khối đồng nhất. Cân chính xác khoảng lOOmg dầu thuốc, gói trong giấy lọc không tro, đốt cháy hoàn toàn trong bình vô cơ hoá chứa 1 lít oxy. Dùng 25ml HNO3 (1/30) để hấp thụ, lắc mạnh trong 5 phút. Chuyển toàn bộ dung dịch hấp thụ và dung dịch tráng rửa bình vô cơ hoá (30ml nước cất) vào bình phản ứng. Đun sôi cách thuỷ 10 phút. Điều
chỉnh pH bằng NH4OH (1/2) đến pH = 2+0,2. Thêm 200mg hydroxylamin hydrroclorid, lắc cho tan. Thêm 5ml dung dịch thuốc thử 2,3- diaminonaphtalen vừa pha. Để phản ứng trong tối 100 phút. Qiuyển toàn bộ dung dịch phản ứng và dung dịch tráng rửa bình (20ml nước cất) vào bình chiết. Thêm chính xác 5ml cyclohexan, lắc mạnh trong 2 phút, để tách lófp. Chiết lấy phần cyclohexan đem ly tâm 3600 vòng/phút trong 15 phút. Đo độ hấp thụ ở bước sóng 378nm.
Đối chứng vói mẫu trắng gồm 25ml HNO3 (1/30) và 25ml nước cất * Tính kết quả:
Hàm lượng Selen trung bình trong một nang được tính theo công thức sau:
A X .M
A =
p
Trong đó: A là hàm lượng Selen trong một nang (p.g/nang)
X là số ỊLig Se trong mẫu dầu thuốc đem phân tích tính được dựa
vào đường chuẩn
D - 0.0319 0.0481
M là khối lượng trung bình dầu thuốc trong một nang (mg) p là khối lượng dầu thuốc đem phân tích (mg)
23.4.2. Cách thứ hai
Lấy ngẫu nhiên 1 viên nang mềm trong vỉ thuốc, cắt bỏ vỏ, lấy toàn bộ phần dầu thuốc. Chia thành nhiều phần nhỏ mỗi phần khoảng lOOmg rồi gói bằng giấy đốt không tro. Tiến hành vô cơ hoá như cách thứ nhất.Chuyển toàn
bộ dung dịch hấp thụ và dung dịch tráng rửa bình vô cơ vào một bình định
mức 500ml, Thêm nước vừa đủ thể tích, Lấy chính xác 75ml dung dịch cho vào bình phản ứng, đun sôi cách thuỷ 10 phút, để nguội ởnhiệt độ phòng. Các
bước tiếp theo tiến hành như cách thứ nhất. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
* Tính kết quả:
Hàm lượng Selen trong một nang mềm được tính theo công thức sau:
X.500
A = -
75
Trong đó: A là hàm lượng Selen trong 1 nang (p,g)
X là hàm lượng Selen (|ag) trong 75ml dung dịch đem phản ứng,tínhđược dựa và đường chuẩn;
^ _ D - 0.0319 0.0481
2.3.43. . Định lượng Selen trong chế phẩm pre Astig • Kết quả định lượng Selen theo cách thứ nhất:
Chúng tôi đã lấy 20 viên nang mềm pre Astig và tiến hành định lượng 8
Bảng 4: Khối lượng dầu thuốc trung bình trong một nang. Số nang M .nang (mg) M. vỏ nang (mg) M. dầu thuốc (mg) M . Dầu thuốc (mg/nang) 20 17980,6 4496 13484,6 674,2
Vói M là khối lượng
Bảng 5: Hàm lượng Selen trong một nang mềm pre Astig
STT Khối lượng dầu
thuốc p (mg)
D
( ở ^ _ = 378nm)
Hàm lượng Selen
trong 1 nang A (|Lig)
1 100,1 0,317 39,92 2 99,89 0,289 36,08 3 100,5 0,337 42,55 4 100,2 0,321 40,44 5 100,1 0,327 41,32 6 100,8 0,342 43,12 7 100,5 0,312 41,85 8 100,3 0,348 44,17
Kết quả: A = 41,18 ± 2,48 ỊLig Se/nang.
So vói hàm lượng Selen ghi trên nhãn thuốc là 4O|0.g Se/nang, thì kết quả xác định theo phương pháp Dược điển Mỹ XXIV mà chúng tôi tiến hành theo cách thứ nhất đạt 102,95%.
• Kết quả xác định hàm lượng Selen theo cách thứ hai
Chúng tôi tiến hành định lượng Selen trong 3 nang mềm pre Astig theo cách thứ hai vói số mẫu đốt cho mỗi nang là 7 mẫu. Kết quả được ghi trong bảng 6.
Bảng 6: Hàm lượng Selen trong một nang mềm pre Astig
Nang số Lần đo D
(ở =378nm)
Hàm lượng Selen
trong 1 nang A (|ig)
1 1 0,320 39,93 2 0,346 43,53 3 0,309 38,41 TB 0,325 40,62 2 1 0,291 35,91 2 0,305 37,85 3 0,282 34,66 TB 0,293 36,14 3 1 0,311 38,68 2 0,285 35,08 3 0,297 36,74 TB 0,298 36,83 Kết quả : A = 37,86 ± 2,4ỈỊXg Se/nang. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
So vói hàm lượng Selen ghi trên nhãn thuốc là 40|xg Se/nang, thì kết quả
Nhận xét:
Theo cách định lượng thứ nhất: Là lấy mẫu từ một số lượng lớn nang (20nang). Số mẫu phải đốt ít (8 mẫu). Kết quả cho hàm lưọfng Selen trung bình trong một nang chế phẩm pre Astig là 41,18|ig. Cách lấy mẫu này phản ánh khách quan hàm lượng Selen trong chế phẩm.
Theo cách định lượng thứ hai thì phải đốt một số lượng mẫu rất lófn (21 mẫu), song hàm lưọfng Selen trong các nang khá chênh lệch nhau. Điều này có thể là do việc chế tạo nang chưa đồng nhất. Cũng có thể số lượng nang mà chúng tôi tiến hành định lượng chưa nhiều. Vì thòi gian có hạn mà khối lượng đốt mẫu lại quá lớn, nên để có kết luận chính xác về vấQ đề này, chúng tôi nghĩ cần phải tiếp tục định lượng vói số nang lớn hofn thì mới có kết luận cụ thể về hàm lượng Selen của một nang.
* So sánh kết quả thí nghiệm hai cách đốt mẫu:
Cách 1 Cách 2
SỐ mẫu đốt Số mẫu đo quang SỐ mẫu đốt Số mẫu đo quang
8 8 21 3
ưu nhược
điểm
- Đốt ít mẫu
- Chỉ biết hàm lượng Selen trung bình của từng nang. Kết quả tưoíng đối ổn định.
- Không biết rõ hàm lượng trong các nang riêng lẻ.
- Phản ánh được hàm lượng Selen chung của mẫu thử
- Đốt nhiều mẫu
- Biết được hàm lượng Selen trong từng nang riêng lẻ.
- Không phản ánh được hàm lượng Selen chung của mẫu thử.
PHẦN 3 - KẾT LUẬN VÀ ĐE XUẤT 3.1. Kết luận
Sau một thời gian ngắn tiến hành thực hiện mục tiêu của đề tài, khoá luận của chúng tôi đã đạt được những kết quả chính là:
• Đã thực hành được phưcíng pháp định lượng Selen theo Dược điển Mỹ XXIV/2001 với 2 kỹ thuật cơ bản:
+ Đốt cháy mẫu thử (vô cơ hoá) bằng khí oxy tinh khiết lấy từ bom đựng.
+ Tiến hành phản ứng tạo phức màu Piazoselenol giữa Se (IV) và 2,3 - Diaminonaphtalen trong những điều kiện qui định và đo quang ở Ằ,^ax=378nm.
• Đã áp dụng được các kỹ thuật trên vào xác định hàm lượng Selen trong
dạng thuốc nang mềm của biệt dược pre Astig theo 2 cách lấy mẫu dầu thuốc trong nang; lấy mẫu chung của nhiều nang và lấy mẫu riêng của từng nang.
• Kết quả thực nghiệm đã cho các số liệu sau;
+ Phương trình hồi qui của đường chuẩn định lượng là: y = 0,048x + 0,0319 với hệ số tương quan R“ = 0,9996.
+ Hàm- lượng Selen tìm thấy theo cách lấy mẫu chung của nhiều nang
là; 41,18 ± 2,48 i-ig/nang và theo cách lấy mẫu riêng của từng nang là; 37,86 ±
2,41)j.g/nang. So với hàm lượng Selen được ghi trên biệt dược pre Astig là
40|j.g/nang thì kết quả định lượng của chúng tôi theo 2 cách lấy mẫu lần lượt đạt 102,95% và 94,65%. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
3.2. Đề xuất
Hiện nay các thuốc và biệt dược chứa Selen đang xuất hiện ngày càng nhiều trên thị trưòỉng thuốc Việt Nam, trong khi đó Dược điển Việt Nam xuất bản lần gần đây nhất vẫn chưa có chuyên luận về định lượng Selen trong các chế phẩm này. Qua thực tế làm việc, chúng tôi nhận thấy: nếu có thời gian khảo cứu một cách có hệ thống thì kỹ thuật định lượng Selen theo Dược điển Mỹ XXIV có thể vận dụng rất đáng tin cậy và khả thi trong việc kiểm nghiệm thuốc chứa Selen ở nước ta.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
[1]. Bộ môn Hoá Phân Tích:
Hoá phân tích I. Trường Đại học Dược Hà Nội, 1998 (trang 27 - 43). Hoá phân tích II. Trường Đại học Dược Hà Nội, 1998 (trang 13 - 24). [2]. Đàm Trung Bảo:
Selen trong sinh học. NXB Y học, 1983 (trang 62 - 93, 108 - 195). [3]. Bùi Long Biên:
Phân tích hoá học định lượng. NXB Khoa học và kỹ thuật Hà Nội, 1955 (trang 174-186).
[4]. Nguyên Tiến Khanh:
Thống kê ứng dụng trong công tác dược.
Trưcmg Đại học Dược Hà Nội, 1995 (trang 27, 35 - 36). [5]. Lê Thành Phước, Nguyễn Quang Thường:
Phức chất và gốc tự do trong Y - Dược.
Trường Đại học Dược Hà Nội, 1998 (trang 32 - 54). [6]. Nguyễn Quang Thường:
Gốc tự do của oxy trong Y và Dược. Trường Đại học Dược Hà Nội, 1998.
[7]. Tuần tin tức qua mạng Internet, số 181, 12.2001.
[8]. The Australia Journal of Pharmarc, tập 83, Tháng 1/ 2002 (trang 4 0 -4 1 ) [9]. The USP XXIV, page 1862 - 1863.
[10]. Ourville Levander and Raymond F.Burk:
Nutrition Morden in health and disease 8, V oll, 1994, Chapter 12 (page 52 - 59).
[11]. J. H Watkinson:
Fluometric determination of Selenium in biological Material with 2,3- diaminonaphtalen, Analytical Chemistry, Vol 3, N„l, 1966, (page 92 - 96).
[12]. I.I. Nazarenko & et al:
Fluorimetrichexki apredenhie selena 2,3-diaminonaphtalenom vo
biologichexkix macherialax; Journal anal. Khimi. Tom XXX; vup. 4,1975; 733 - 736.
[13]. I.I. Nazarenco ; A.N. Ermakob: