- ’h2o ---> H+ lNHv O “ N° 2 n o 2 Tiên hành:
Trong bînh câu 3 co dung tich 250ml (cô làp sinh hàn hôi luu, nhiêt ké) cho vào 1,52g camphor (0,01 mol) và 20ml EtOH tuyêt dôi, dun hôi luu câch thuÿ cho dên tan hoàn toàn. Cho tiép 1,38g p- nitro anilin (0,01 mol) và 0,5ml acid HCl dâm dàc. Tiép tue dun hôi luu câch thuÿ cô khuây, duy tri nhiêt dô à nhiêt dô soi cüa dung môi. Théo dôi phân ûng bàng SKLM, thôi gian phân ûng là 2 giô. Hôn hop sau phân ûng do ra côc cô mô dung tich 100ml, de nguôi tù tù dên nhiêt dô phông roi làm lanh bàng dâ cho kêt tinh hoàn toàn. Loc tüa bàng phêu Buchner, rüa tûa bàng EtOH tuyêt dôi. Phân thô duoc tinh chê' lai trong EtOH tuyêt dôi roi dem sây à nhiêt dô 50-60°C trong 6-8h.
Kêt quâ:
Sân phâm thu duoc là dang tinh thé hinh kim vun màu vàng cam, tan trong EtOH, MeOH nông, aceton, ft tan trong EtOH lanh, nuôc, tan tôt trong DMF à nhiêt dô thuông, hiêu suât 31,6%, T°nc = 155-156,5°C. Kiëm tra dô
tinh khiét cüa sân phâm bàng SKLM, dung môi hoà tan DMF, dung môi khai triën CHCl3:MeOH (90:10), sân phâm cô Rf = 0,74, vét gon, sach.
2.2.4. Tong hop imin cüa m- nitro anilin và camphor (Chat IV).
n h 2 À 02N '^ c^ 'h2o ---*> H+ -N N0 2 Tien hành:
Trong bînh câu 3 co dung tich 250ml (cô làp sinh hàn hôi luu, nhiêt ké) cho vào 1,52g camphor (0,01mol) và 20ml EtOH tuyêt dôi, dun hôi luu câch thuÿ cho dén tan hoàn toàn. Cho tiêp 1,38g m- nitro anilin (0,01mol) và 0,5ml acid HC1 dâm dâc. Tiép tue dun hôi luu câch thuÿ cô khuây, duy tri nhiêt dô à nhiêt dô sôi cüa dung môi. Théo dôi phân ûng bàng SKLM, thôfi gian phân ûng là 1 giô 45 phût. Hôn hop sau phân ûng dô ra côc cô mô dung tich 100ml, dé nguôi tù tù dén nhiêt dô phông roi làm lanh bàng dâ cho két tinh hoàn toàn. Loc tüa bàng phêu Buchner, rua tüa bàng EtOH tuyêt dôi. Phân thô duçfc tinh ché lai trong EtOH tuyêt dôi rôi dem sây à nhiêt dô 50-60°C trong 6-8h.
Két quâ:
Sân phâm thu duoc là dang tinh thé hînh kim hoâc vây màu hông ngà, tan trong EtOH, MeOH nông, aceton, ft tan trong EtOH lanh, nuôc, tan tôt trong DMF à nhiêt dô thucmg, hiêu suât 42,1%, T°nc = 222,1-223,3°C. Kiëm
tra dô tinh khiét cüa sân phâm bàng SKLM, dung môi hoà tan DMF, dung môi khai triën là CHCl3:MeOH (90:10), sân phâm cô Rf = 0,72, vét gon, sach.
2.2.5. Tong hop phenylhydrazon camphor (Chât V).
n h - n h 2
h2o ---->
Tiên hành:
Trong bînh câu 3 cô dung tich 250ml (cô làp sinh hàn hôi luu, nhiêt ké) cho vào 1,52g camphor (0,01mol) và 20ml EtOH tuyêt dôi, dun hôi luu câch thuÿ cho dên tan hoàn toàn. Cho tiép lml_phenylhydrazin (0,01mol) và 0,5ml acid HCl dâm dàc. Tiép tue dun hôi luu câch thuÿ cô khuây, duy trî nhiêt dô à nhiêt dô sôi cüa dung môi. Théo dôi phân ûng bàng SKLM, thôi gian phân ûng là 2 giô. Hôn hop sau phân ûng do ra côc cô mô dung tich 100ml, de nguôi tù tù dén nhiêt dô phông roi làm lanh bàng dâ cho két tinh hoàn toàn. Loc tüa bàng phêu Buchner, rira tüa bàng EtOH tuyêt dôi. Phân thô duoc tinh ché lai trong EtOH tuyêt dôi rôi sây à nhiêt dô 50-60°C trong 6-8h.
Két quâ:
Sân phâm thu duoc là dang tinh thé hînh kim hoâc hînh vây màu tràng, tan trong EtOH, MeOH nông, aceton, ft tan trong EtOH lanh, nuôc, tan tôt trong DMF à nhiêt dô thuông, hiêu suât 68%, T°nc = 291,5-292,6 °C. Kiëm
tra dô tinh khiét cüa sân phâm bàng SKLM, dung môi hoà tan DMF, dung môi khai triën là CHCl3:MeOH (90:10), sân phâm cô Rf = 0,61, vét gon, sach.
2.2.6. Tong hop thiosemicarbazon camphor (Chât VI).
Tién hành:
+ n h 2- n h - ç - n h 2 H2° >
s H+
N-NH-C -N Hj
S
Trong bînh câu 3 co dung tfch 250ml (cô làp sinh hàn hôi luu, nhiêt ké) cho vào 1,52g camphor (0,01 mol) và 20ml EtOH tuyêt dôi, dun hôi luu câch thuÿ cho dén tan hoàn toàn. Cho tiép 0,92g thiosemicarbazid (0,01 mol) và 0,5ml acid acetic dâm dàc. Tiép tue dun hôi luu câch thuÿ cô khuây, duy trî nhiêt dô ô nhiêt dô sôi cüa dung môi. Théo dôi phân ûng bàng SKLM, thefi
gian phân ûng là 2 giô 30 phüt. Hôn hçfp sau phân ûng d6 ra côc cô mô dung tich 100ml, dé nguôi tù tù dén nhiêt dô phông rôi làm lanh bàng dâ cho két tinh hoàn toàn. Loc tüa bàng phëu Buchner, rufa tüa bàng EtOH tuyêt dôi. Phân thô duoc tinh ché lai trong EtOH tuyêt dôi rôi sây à nhiêt dô 50-60°C
trong 6-8h.
Két quâ:
Sân phâm thu duçfc là dang tinh thé hinh kim màu tràng ngà, tan trong EtOH, MeOH nông, aceton, ft tan trong EtOH lanh, nuôc, tan tôt trong DMF à nhiêt dô thuông, hiêu suât 31,9%, T°nc = 190-191,7 °C. Kiëm tra dô tinh khiét cüa sân phâm bàng SKLM, dung môi hoà tan DMF, dung môi khai triën là CHCl3:MeOH (90:10), sân phâm cô Rf = 0,54, vêt gon, sach.
2.2.7. Tong hofp camphor hydrazon thiazolidinon - 4 (Chât VII). (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
+ ClCH-,COOH -*■ -H 20 \ .N -N =c---NH | | ,C = 0 Tien hành:
Trong bînh câu 3 co dung tich 250ml (cô làp sinh hàn hoi luu, nhiêt ké) cho vào 2,25g Thiosemicarbazon camphor (0,01 mol) trong 5ml EtOH tuyêt dôi. Thêm tù tù vào bînh phân ûng 0,96g acid monocloroacetic(0,01mol) dâ hoà tan trong 30 ml nuôc cât, lâc dêu hôn hop phân ûng. Dun hoi luu cô khuây, duy trî nhiêt dô à nhiêt dô sôi cüa dung môi. Theo dôi phân ûng bàng SKLM, thôi gian phân ûng là 1 giô 30 phüt. Do hôn hop sau phân ûng ra côc cô mô dung tich 100ml, dë nguôi dén nhiêt dô phông rôi làm lanh bàng dâ cho két tinh hoàn toàn. Loc tüa bàng phëu Buchner, rüa tüa bàng EtOH tuyêt dôi. Phân thô duoc tinh ché lai trong EtOH: DMF (1:1) rôi dem sây à nhiêt dô
Két quâ:
Sân phâm là dang tinh thé hinh kim hoàc vây màu vàng gach, ft tan trong EtOH, MeOH, không tan trong aceton, nuôc, tan trong DMF, hiêu suât 29,1%, T°nc = 286,1-287,5 °C. Kiëm tra dô tinh khiêt cüa sân phâm bàng SKLM, dung môi hoà tan DMF, dung môi khai triën là CHCl3:MeOH (90:10), sân phâm cô Rf = 0,49, vêt gon, sach.
2.3. KIËM TRA DÔ TINH KHIÊT VÀ XÂC DINH CÂU TRUC.
2.3.1. Khâo sât dô tan, nhiêt dô nông chây, SKLM câc chât sân phâm.
Tien hành thur dô tan câc chât trong mot s6 dung môi, chüng tôi nhân thây câc sân phâm hâu nhu không tan trong nuôc, cloroform, ft tan trong MeOH, EtOH nhung tan tôt khi dun nông. Vôi dung môi DMF, aceton thi hàu hét câc chât dêu tan tôt ngay nhiêt dô thuông.
Bâng 4: Khâo sât dô tan cua câc chât tong hop duoc.
Stt Dung môi Chât I II III IV V VI VII 1 Nuôc _ _ - _ - - - 2 EtOH + + + + + ++ ++ 3 MeOH ++ ++ ++ ++ ++ +++ - 4 CHC1, _ _ _ - _ +++ - 5 Aceton +++ +++ +++ +++ +++ +++ - 6 DMF +++ +++ +++ +++ +++ +++ ++ 7 Diethyl ether ++ +++ ++ +++ +++ +++ - 8 Ethyl acetat +++ ++ ++ +++ ++ +++ - 9 Isobutanol +++ +++ ++ ++ ++ ++ - 10 Cyclohexan ++ ++ ++ ++ +++ ++ -
Ghi chu: (-) hàu nhu: không tan (++) tan
(+ )îttan (+ ++ )dêtan
Nhiêt dô nông chây duoc do trên mây Gallenkamp. Két quâ cho thây hàu hêt câc chât dêu cô nhiêt dô nông chây rô ràng, dut khoât (bâng 3).
Tien hành SKLM vôi bân mông sàc kÿ nhôm, chât hâp phu là Silicagel, dung môi hoà tan là EtOH : DMF (1:1), hê dung môi khai triën CHC13 :MeOH (90:10), soi dèn huÿnh quang duôi ânh sâng tü ngoai cô buôc sông X =
254nm, hiên màu bàng hai iod bâo hoà. Két quâ cho câc vêt màu gon, sach vôi tri so Rf khâc nhau.
Bâng 5: Két quâ SKLM câc chât tong hop duoc.
STT Dung môi hoà tan Rf
I DMF 0,51 II DMF 0,52 III DMF 0,74 IV DMF 0,72 V DMF 0,61 VI DMF 0,54 VII DMF 0,49
2.3.2. Pho hông ngoai, tir ngoai [6][19].
Sau khi dâ tong hop ra duac câc chât (I-VII) chüng tôi tien hành phân tich pho IR, UV cüa chüng tai Phông nghiên cüu trung tâm Truông Dai hoc Duoc Hà Nôi vôi su giüp dô cüa TS Dô Ngoc Thanh.
a. Phân tich pho tü ngoai.
Câc chât sân phâm duac ghi pho tü ngoai trên mây Cary 1E UV-Visible Spectrophotometer varian, dung môi EtOH, nông dô 10|a,g/ml. Pho tü ngoai thu duac chüng tô câc dân xuât Camphor bi hâp thu manh à vùng tü ngoai do câu truc phân tü cô chüa hê liên hop 11-11 và nhôm chùc chua no (>C=0, >C=N, >C=S...). Xem bâng 6 và phu lue.
b. Phân tich pho hông ngoai.
'500cm 1 . Câc chât chüng tôi tong hop duoc cô hàng loat câc nhôm churc và liên két >C=0, -NH-, >C=N, C=C, -N02...Xét câc dâi hâp thu trên phé dô cô thé nhân biêt câc dâi hâp thu dàc trung cüa câc nhôm chûc và liên két cüa câc chât. Xem bâng 6 và phu lue.
Bàng 6: Két quâ phân tich phé hông ngoai và tu* ngoai.
STT Công thiîc câu tao IR (cm 1) UV(A,max) nm
I ' Y N ^ Q > S° 2-N H = VNH = 3461,9 VC=N= 1636,7 Vc=c thom = 1598,6 ôCH3 = 1437,9 ^-S02-NH2 = 1145,4 206 262 II \ ^ n^ O ^ cooh VOH= 3463,7 ^c=n » ^c=o = 1668,0 Vc=c thom = 1600,0 ^ch3= 1428,9 203 218 288 III \ . " y n^ Q ^ n° 2 y VC=N = 1590,6 ^c=c thorn, VasN02 = 1474,2 ^CH3= 1301,2 202 228 374 IV y * y Q J no2 VC=N, Vc=c thom = 1539,4 a/NQ2= 1348,6 233 278 374 V d ^ n - n h - 0 VN.H V c=c = thom, 3208,7V C=N = 1598,5 ÔCH3= 1494,5 202 228 276 V I c \ /N-NH-C-NH2 Y n V N.H = 3370 "n/c=n = 1643 Vc=s= H61 239 V II v X N -N = c---NH V sx / c=o1 1 V NH = 3202,0 V C=G = 1726,7 V C=N = 1610,0 VC.N= 1331,3 ^-S-CH2 = 1200,6 205 223 282
Tôm lai, câc dâi hâp thu dâc tnmg trên pho dô mà chung tôi phân tich duoc dêu phù hop voi câc câu truc, nhôm chut du kién.
Sof bô két luân:
Trong phân hoâ hoc chüng tôi dâ tong hop duoc 7 chât voi hiêu suât tù 29,1-68%. Câc sân phâm thu duoc dêu là chât rân két tinh dang tinh thé hînh kim hoàc hînh vây hoàc dang bot min, co màu sàc tù trâng dén tràng ngà, vàng gach dén vàng cam, nhiêt dô nông chây xâc dinh.
Câc chât tong hop duoc xâc dinh dô tinh khiét bàng nhiêt dô nông chây, SKLM. Xâc dinh câu truc bàng câch do pho hông ngoai và tù ngoai. Câc két quâ thu duoc cho phép chüng tôi két luân ràng câc chât tong hop duoc dêu düng vôi công thûc du kién. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Trong 7 chât thu duoc cô 6 chât chua thây trong câc tài liêu mà chüng tôi tham khâo, dô là chât I, II, III, IV, V, VII.
2.4. THÀM DÔ TÂC DUNG SINH HOC [4][5].
Trong phân tong quan, chüng tôi dâ trînh bày tâc dung khâng khuân, khâng nam, khâng lao, chông phân bào cüa hop chât base Schiff và di vông thiocarbanilid. Chüng tôi rât hy vong qua công trînh này cô thé tim ra câc chât cô tâc dung duoc lÿ.
Do su han ché vê thcfi gian và kinh phi dê tài chüng tôi chî tiéh hành khâo sât tâc dung khâng khuân cüa 1 sô chât tong hop duoc vôi su giüp dô cüa TS Cao
Vân Thu - Bô mon Công nghiêp Duoc Truông Dai Hoc Duoc Hà Nôi.
2.4.1. Nguyên tac.
Trong khoâ luân này, chüng tôi tiéh hành thü tâc dung khâng khuân theo phuong phâp khuyéch tân trên thach vôi câc khoanh giây loc dâ tâm chât
thü. Hoat tmh khâng khuân duac dânh giâ bàng khâ nâng üc ché su phât triën cüa vi sinh vât kiëm dinh, tao thành vông vô khuân cô duông kmh tÿ le thuân vôi logarit nông dô chât thü.
2.4.2. Tien hành và két quâ.a. Chuân bi: a. Chuân bi:
+ Mâu thü: Câc mâu thü gôm 3 chât tong hop duçfc (I, II, V) và chât dôi chüng acid benzoic duçfc pha à nông dô 4mg/ml trong dung môi DMF. Tâm
dung dich thü vào câc khoanh giây cô ducmg kmh 6mm dâ tiêt trùng roi sây khô. Sau khi tâm 3 làn môi khoanh giây loc chüa khoâng 200jULg chât thü.
+ Vi sinh vât kiëm dinh: Chüng tôi tién hành thü tâc dung sinh hoc trên 4 chüng VSV kiëm dinh là câc chüng sau:
2 chüng Gr(+): - Staphylococcus aureus (Sta) - Bacillus subtilis (BS) 2 chüng Gr(-): - Escherichia coli (EC)
- Salmonella typhi (Sal)
ATCC 12228 ATCC 6633
ATCC 25922 DT 220 + Môi truông:
1) Môi truông canh thang (môi truông 1): Thành phân: Cao thit 0,3 %.
Pepton 0,5%.
NaCl 0,5%.
Pha ché à nhiêt dô thuông, phân bô vào câc ong nghiêm (5ml/ông).
2) Môi truông thach thuông (môi truông 2): Thành phân: Cao thit 0,3 %.
Pepton 0,5%.
NaCl 0,5%.
Thach 1,6-1,8%.
Pha ché trong diêu kiên dun nông, phân bô vào câc binh non.
Câc môi truông sau khi dâ pha ché dem hâp tiêt trùng à nhiêt dô 118°C/
0,8-0,9 atm trong thôfi gian 30 phüt.
b. Câc buôc tien hành:
+ Buôc 1: Môi truông 1 duoc lây ra, de nguôi dén nhiêt dô phông, cây câc chüng VSV kiëm dinh vào theo dung kÿ thuât và nuôi cây giông à nhiêt
dô 37°C/18-24 giô. Vi khuân phât triën së làm duc môi trucmg nuôi cây. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
+ Buôc 2: Môi trucmg 2 duoc lây ra, dë nguôi dén nhiêt dô 45-50°C, do môi trucmg 1 vào môi trucmg 2 tao nhü dich VSV co nông dô khoâng 107 dén
108 té bào/lml.
+ Buôc 3: Dô nhü dich VSV trên ra câc dïa pétri (lôp nhü dich dày 5mm, tucmg üng vôi 20ml nhü dich) roi dë nguôi.
+ Buôc 4: Dât câc khoanh giây dâ tâm chât thü trên vào câc dïa thach theo nguyên tàc câc khoanh giây câch nhau 2cm, câch thành dïa 1cm và tiép xüc dêu vôi lôp môi truông. Môt dïa thach cô thë chüa 6-7 khoanh giây.
+ Buôc 5: Dât câc dïa pétri trên vào tü âm, giû nhiêt dô à 37°C. Doc két quâ sau 18-24 giô.
Bâng 7: Két quâ thur tâc dung khâng khuan cûa câc chât tong hop duoc
\ VSV Khâ nàng üc ché su phât triën VSV cüa câc chât duçfc biëu thi bàng duông kmh vông vô khuân (mm)
Chât thü StaATCC 12228 EC ATCC 25922 Sal DT 220 BS ATCC 6633 I - - - - II - - - - V - - - - c. Nhân xét:
Sau quâ trînh thu tâc dung sinh hoc chüng tôi nhân thây vôi nông dô dem thu là 4mg/ml, tât câ câc chât tong hofp (I, II, V) dem thü dêu không cô tâc dung üc ché hay diêt 4 chüng VSV kiëm dinh dem thü. Xem câc hînh 2-3, lây dai diên 1 chüng Gr(+) (Staphylococcus aureus) và 1 chüng Gr(-)
PHAN 3: KET LUAN VA DE XUAT.
Tir nhûng két quâ thuc nghiêm dâ duçfc trinh bày chüng tôi rut ra môt két so két luân nhu sau:
1. Tû camphor, chüng tôi dâ tong hofp duofc 7 chât, dô là phenyl hydrazon camphor, acid p-amino benzoic camphor imin, sulfanilamid camphor imin, p-nitro anilin camphor imin, m - nitro anilin camphor imin, thiosemicarbazon camphor, camphorhydrazinthiazolidinon - 4. Trong dô cô 6 chât chua thây nêu trong tài liêu tham khâo mà chüng tôi doc duofc. Dô là chât I, II, III, IV, V, V II.
2. Trong quâ trinh téng hop dâ tién hành theo dôi phân ûng bàng SKLM dë tim thôfi gian phân ûng thich hçfp. Khâo sât dô tan và tîm ra dung môi két tinh thich hofp cho tùng chât. Tât câ câc sân phâm tao thành dêu duofc xâc dinh dô tinh khiét bàng SKLM, nhiêt dô nông chây. Xâc dinh câu truc bàng câch do pho hông ngoai, tû ngoai. Két quâ thu duçfc cho phép chüng tôi két luân ràng câc chât tong hçfp duçfc cô câu trüc dûng nhu du kién.
3. Dâ thü tâc dung sinh hoc cüa 3 chât tong hçfp duçfc (I, II, V) trên 4 chüng VSV kiëm dinh. Két quâ cho thây câ 3 chât dem thü dêu không cô tâc dung ûc ché hay diêt câc chüng vi khuân thü. Dë cô 1 két luân dây dü hon, chüng tôi cho ràng cân thiét phâi tién hành thü tât câ câc dân xuât Camphor