- Tư liệu của quỏ trỡnh sắc ký
b. Tốc độ giấy
3.2.1 Chọn hạt pha tĩnh và kớch thước hạt pha tĩnh.
Pha tĩnh là một trong hai yếu tố quan trọng quyết định hiệu quả sự tỏch cuả cỏc chất. Trong việc tỏch sắc kớ thỡ bản chất của chất phõn tớch là yếu tố quyết định đến việc chọn loại pha tĩnh nào và kớch thước của hạt chất pha tĩnh. Đối tượng phõn tớch của chỳng tụi là cỏc hợp chất clophenol cú khối lượng và phõn tử khụng lớn lắm. Thuộc loại hợp chất ít phõn cực. Do tớnh chất của chất phõn tớch và tớnh chất ổn định của hệ pha ngược nờn chỳng tụi đó chọn kiểu sắc kớ hệ pha ngược để nghiờn cứu và tỡm điều kiện tỏch .
Trờn cơ sở thiết bị cú sẵn của phũng thớ nghiệm VH2 chúng tụi đó chọn 2 loại hạt pha tĩnh ODS của 2 hóng sản xuất khỏc nhau MERCK (CH Liờn bang Đức) và hóng Shandow (USA), cú kớch thước hạt là 5 àm và 5 àm để phục vụ cho nghiờn cứu này .Bảng 3.2 và hỡnh 3.2 cho ta thấy ảnh hưởng của kớch thước hạt pha tĩnh đến kết quả tỏch
Bảng 3.2: Kớch thước hạt nhồi pha tĩnh
ST T
Hóng sản xuất Đường kớnh hạt (Trung bỡnh) Kớch thước cột
1 Shandow(USA) 5 àm 250 x 4,6 mm
2 Merck (CHLB Đức) 5 àm 250 x 4,6mm
Điều kiện được chọn để khảo sỏt:
Pha động:metanol/H :metanol/H20/ Acetolnitril (49:48:3 V/V) Tốc độ pha động:1.4ml/phỳt 1.4ml/phút
DetectorUV:225nm UV :225nm Băng hấp thụ : 0.05Aufs
Tốc độ giấy: 2mm/phỳt
Mẫu hỗn hợp: 2clophenol; 2.4Diclophenol; 2.4.6Triclophenol; 2.4.6Triclophenol;
2.3.4.6Tetraclophenol:Pentaclophenol(1ppm). Pentaclophenol(1ppm).
Hỡnh 3.2. ảnh hưởng của kớch thước hạt pha tĩnh đến kết quả tỏch.
Trong sắc kớ hấp thụ pha ngược (RP-HPLC), pha tĩnh là hạt chất nhồi cú bề mặt khụng phõn cực hay ít phõn cực. Đú là cỏc hạt silica trần đó được alkyl hoỏ bề mặt phõn cực. Trong HPLC pha tĩnh phải thoả món điều kiện như: Phải trơ và bền vững với cỏc điều kiện của mụi trường sắc kớ, cú khả
năng tỏch chọn lọc một hỗn hợp chất trong điều kiện sắc ký nhất định, độ xốp phải ổn định khụng bị biến dạng hay thay đổi trong quỏ trỡnh sắc kớ, cõn bằng động học của sự tỏch phải xảy ra nhanh và lặp lại, cỡ hạt phải đồng đều... thỡ mới cú kết quả tốt.
Qua thực nghiệm, chỳng tụi thấy rằng ở mức độ phõn tớch thỡ đường kớnh 5àm là tốt nhất. Bởi vỡ đường kớnh này cỡ hạt nhỏ và đều làm tăng độ phõn giải, cú nghĩa là làm giảm chiều cao của 1 đĩa sắc kớ, do vậy tăng hiệu suất tỏch sắc kớ. Hơn nữa 1 trong những yờu cầu của pha tĩnh là độ xốp. Độ xốp của pha tĩnh ảnh hưởng nhiều đến khả tỏch sắc kớ. Pha tĩnh Hypersil ODS 5àm cú kớch thước trũn, cú cấu trỳc xốp là loại xốp toàn phần do vậy hiệu suất tỏch khỏ tốt. Hơn nữa hạt chất này cú sự đồng đều về kớch thước vỡ vậy sự tỏch sắc kớ sẽ tốt hơn (hỡnh 3.2 nhúm pic số 1) . Theo tỏc giả John W. Dolan chúng ta cú thể ước tớnh được khả năng tỏch của hỗn hợp mẫu phõn tớch khi chúng ta biết được đường kớnh pha tĩnh và chiều dài cột tỏch qua cụng thức gần đỳng.
N ≈ 3000 . L/dp
Nh vậy, với cột tỏch L = 250mm, pha tĩnh Hypersyl ODS: -Loại 5 Loại 5àm cú số đĩa lý thuyết N5 ≈ 16.000 đĩa.
-Điều này phự hợp và lý giải cho kết quả sắc kớ của chỳng tụi. Điều này phù hợp và lý giải cho kết quả sắc kí của chúng tôi.
Chỳng tụi chọn loại hạt pha tĩnh cú đường kớnh 5àm cho cỏc nghiờn cứu tiếp theo.