Tổng quan
Kim ngân là vị thuốc kinh nghiệm được sử dụng rất nhiều trong nhân
dân, 1 số nơi còn dùng để pha nước uống thay nước chè. Người ta có thể sử
dụng hoa sắp nở (Kim ngân hoa), cành và lá (Kim ngân cuộng) đã được phơi hay sấy khô.
Chi Lonicera L. có khoảng 10 loài ở Việt Nam, tất cả đều dùng làm
thuốc. Trong đó có hai loài được dùng phổ biến: Lonicera japónica Thunb. và
Lonicera confusa DC.
Cây Kim ngân có tên khoa học là Lonicera japónica Thunb. thuộc họ
Cơm cháy {Caprifoiiaceae), còn có tên khác: Dây nhẫn đông, Boóc kim ngần
(Tày), Chừa giang khằm (Thái).
Cây leo bằng thân quấn dài 9m, cành non có màu xanh, có lông mịn bao phủ, cành già nhẵn hơi đỏ. Lá nguyên mọc đối, hơi dày hình trái xoan đài 4-7 cm, rộng 2-4 cm gốc tròn, đầu nhọn nhẵn, cuống lá dài 0,5-0,6 cm, có lông.
Cụm hoa mọc ở nách lá gần ngọn thành xim 2 hoa. Lá bắc giống lá con hình mũi mác, tròn có iông thưa ở mép. Đài có 5 răng, có lông. Hoa khi mới nở cánh hoa màu trắng sau chuyển sang vàng nhạt, mùi thơm nhẹ, 5 cánh hoa
dính liền nhau thành ống ờ phía dưới, chia thành 2 môi. Nhị 5, thò ra ngoài
cánh hoa đính ở họng tràng. Bầu nhẵn, quả hình cầu màu đen. Kim ngân ra hoa tháng 3-5, quả 6-8. [7] [8] [9] [13] [20]
Kim ngân có nguồn gốc ở vùng Đông Á, Trung Quốc, Nhật Bản, Triều Tiên, ở Việt Nam, Kim ngân chu yếu ở vùng núi và trung du phía bắc: Quảng Ninh, Cao Bằng, Lạng Scfn, Bắc Giang...
Lonicera confusa DC. - Kim ngân lẫn, Kim ngân núi.
Cây ỉeo 2-4m, cành có lông, hơi xám. Lá có phiến hình trái xoan, tròn hay gần tim ở gốc, nhọn hay gần nhọn ở đầu, mặt trên nhẩn, mặt dưới có lông.
Hoa cũng mọc thành xỉm 2 hoa ở nách lá gần ngọn. Tràng dài 1,6-3,5 cm, đường kính ống tràng 0,5-2 mm, có nhiều lông, lúc đầu có màu tráng sau chuyển sang vàng. Bầu có lông, lá bắc hình dùi hẹp và dài [9J L14J [17] [18] . Cây ra hoa vào tháng 6-9, ra quả vào 10-11.
Phân bố ở Nam Trung Quốc và vùng Ấn Độ-M alaysia. ở nước ta Kim ngân
lẫn mọc ở các tỉnh Vĩnh Phúc, Phú Thọ, Hà Tây.
Ngoài 2 loài phổ biến ở trên ta còn gặp một số loài khác: [9] [14]
L. canibodiana Pierr ex Danguy. - Kim ngân lông.
L. dasystyỉa Dehd. - Kim ngân dại, Kim ngân quả nhám.
L. hiỉdebrandiana Coll. et Hemsl. - Kim ngân quả to.
L.hypogỉauca Miq. - Kim ngân lá mốc.
L. macrantha (D.Don) spreng. - Kim ngân hoa to.
Thành phần hoá học: Hoa và lá có chứa ílạvonoid, chất chính là luteolin-7- rutinosid (lonicerin), ngoài ra còn có các luteolin glucosid khác và
loniceraflavon; acid clorogenic 6% (hoa), 0,9-2,6% (thân và lá) và các đồng
phân cùa nó; tinh dầu (a-pinen, geraniol, eugenol, linalol) , saponin, carotenoid và 1 số thành phần khác. Lá còn có loganin, secologanin.
Theo kinh nghiệm nhân dân và trên thực tế Kim ngân thường được dùng riêng hay phối hợp với các vị khác chữa mụn nhọt, mày đay, lở ngứa, ban, sởi, tả, lỵ, ho do phế nhiệt, điều trị thấp khớp, viêm mũi do dị ứng và bệnh dị ứng khác, ở Trung Quốc, Kim ngân được dùng như 1 thuốc hạ sốt, dễ tiêu, trị lỵ. Hoa phơi khô dùng để lợi tiểu. Nhiều nghiên cứu cho thấy tác dụng chống viêm của Kim ngân [15] .
Ycu cầu kiểm nghiệm với Kim ngân hoa theo DĐVN III, DĐTQ có một số tiêu chuẩn sau: mô tả dược liệu, đặc điểm bột, định tính bằng phucfng pháp hoá học...
Kết quá thưc nghiêm
Kim ngân cớ rất nhiều loài khác nhau trong khoá luận chúng tôi chỉ tiên
hành nghiên cứu hai loài thông dụng nhất: Lonicera japónica Thunb. và
Lonicera confusa DC.
3.3.1. L. ja p ó n ica Thunb., Lam iaceae
Trong quá trình nghiên cứu chúng tôi tiến hành trên cả hai dược liệu là Kim ngân hoa và Kim ngân cuông.
❖ Đặc điểm hình thái bên ngoài. • Mò tả cây.
Cây leo, cành lúc non màu lục nhạt, có phủ lông mịn, nhẩn sau ngả màu đỏ. Lá màu xanh thẫm, mọc đối, hình trứng dài, cuống ngắn, cả hai mặt có lông mịn. Hoa mọc từng đôi ở kẽ lá, lức mới nở màu trắng, sau chuyển sang vàng. Cùng m ột lúc trên căy có cả hoa trắng (mới nở) và hoa vàng. (Ảnh 3a)
• M ô tả dược liệu.
Kim ngân hoa: Nụ hoa hình ống hơi cong queo, dài 1-5 cm. M ặt ngoài màu vàng đến nâu, phủ đầy lông ngắn. Phía dưới ống tràng có 5 lá đài nhỏ, màu lục, trong nụ có 5 nhị và một vòi nhụy. Dược liệu có mùi thơm nhẹ, vị hơi đắng. (Ảnh 3c)
Kim ngân cuộng: Cành và lá được cắt thành từng đoạn nhỏ dài 4-6 cm, cành có màu nâu đỏ, lá mọc đối có màu lục xám khô quăn, phiến lá dày mặt trên có ít lông, mặt dưới nhiều lông mịn, cuống lá dài. (Ảnh 3b)
❖ Đạc điểm vi học. • Đạc điém bột
Bột màu vàng nhạt, vị hơi đắng.
Soi kính hiển vỉ ihấy: Những mảnh biểu bì mang lông che chở. M ảnh cánh hoa mang tinh thể và mang các bó mạch xếp song song. Lông chc chở đơn bào, thành dày nhẩn, lông tiết. Nhiều hạt phấn tròn, kích thước khoảng 0,07-
0,08 min riêng lẻ hay tập trung thành đám. Tinh ihể calci oxalat hình cầu gai. Manh biểu bì mcing lỗ khí.
• Vi phẫu lá
Phần gân lá: Gân trên lá hơi lồi, gân dưới lồi nhiều. Biểu bì trên và dưới cấu tạo bởi một hàng tế bào xếp đều đặn, thành ngoài hoá cutin, mang các lồng che chở. Mô dày trên và dưới cấu tạo bởi những tế bào tròn, thành dày.
• Vi phẫu thân
M ặt cắt thân tròn, từ ngoài vào trong có: Biểu bì là một hàng tế bào nhỏ xếp đều đặn mang nhiều lông che chở đơn bào. Mô dày gồm 2-3 hàng tế bào thành dàv, xếp sát dưới lớp biểu bì. Mô mềm cấu tạo từ những tế bào thành
mỏng, phía trong mô mềm là các tế bào có thành hoá gỗ đặc biệt tạo thành 1
vòng. Li be tạo thành vòng liên tục. Tầng phát sinh libe-gỗ không nhìn rõ. Gỗ gồm các mạch gỗ xếp thành, các hàng tập hợp lại thành bó. Mô mềm ruột gồm các tế bào tròn, đa giác có thành hoá gỗ, càng vào phía trong kích thước tế bào càng lớn dần. Khuyết trung tâm, ở cành non cấu tạo từ các tế bào thành cellulose mỏng, rỗng ở cành già.
Các đặc điểm bột của Kim ngân hoa L.japonica không có gì khác so với
các hình ảnh minh họa trong tài liệu. [2 2;
❖ Định tính.
Định tính bằng phản ứng hoá học
♦ Lấy 5g bột dược liệu cho vào bình nón dung tích lOOml, thêm 20ml ethanol 90%(TT). Lắc kĩ, đun cách thuỷ 15 phút, lọc. Cô dịch lọc trên cách thuỷ đến khi còn khoảng 5mL Lấy Im l dung dịch vào ống nghiệm, thêm 2-3 giọt HCl đặc và một ít bột M g (TT) dung dịch chuyển từ màu (TT) vàng sang da cam đến đỏ.
♦ Lấy Ig bột dược ỉiệu cho vào ống nghiêm, thêm lOml nước cất, lắc nhẹ trong 5 phút, lọc. Cho vào 2 ống nshiệm mỗi ống 2ml dịch lọc. Tliêm 2- 3 giọt NaOH 10% (TT) vào ống nghiệm thứ nhất, dung dịch có màu
vàng đậm hơn ống nghiệm thứ hai.
Định tính bằng HPTLC.
Tiến hành sắc ký như đã nêu ở phần phương pháp nghiên cứii mục 2.2, với hệ dung môi Toluen: Ethylacetat: Acid formic (5:9:1,5), thu được kết quả
• Sắc ký đồ, đường cong biểu diễn và bảng số liệu các thông sô của sắc ký đồ của dịch chiết Kim ngân cuộng, Kim ngân hoa trong methanol quan
sát ở u v 254 nm (Hình 3.1.1; Hình 3.1.2).
• Sắc ký đồ, đường cong biểu diễn và báng số liệu các thông số của sắc ký đồ của dịch chiết Kim ngân cuộng, Kim ngân hoa trong methanol quan sát ở u v 366 nm (Hình 3.2.1; Hình 3.2.2).
• Sắc ký đồ, đường cong biểu diễn và bảng số liệu các thông số của sắc ký đồ của dịch chiết Kim ngân cuộng, Kim ngân hoa trong methanol quan sát ở ánh sáng trắng sau khi đã phun thuốc thử hiện màu (Hình 3.3.1; Hình 3.3.2).
3.3.2. L. co n fu sa DC., Lam iaceae
Trong quá trình nghiên cứu chúng tôi tiến hành trên cả hai dược liệu là Kim ngân hoa và Kim ngân cuông.
Đặc điểm hình thái bên ngoài • M ô tả cây
Cây leo 2-4m, cành non màu xanh nhạt hơi tím, có lông, cành già màu nâu xám, thân có những rãnh dọc. Lá xanh nhạt, phiến lá hình trái xoan dài 3-5 cm, rộng 2,5-3,5 cm, tròn hay gần hình tim ở gốc, nhọn ở đầu, mặt trên nhẩn, m ặt dưới có lông. Cuống ngắn 0,5-1 cm.
Cụm hoa là xim, 2 hoa ở nách lá và ở ngọn. Hoa màu trắng sau chuyển sang vàng. Cánh hoa chia 2 môi, môi trên 4 thuỳ dính liền nhau, môi dưới nguyên. Đài 5 rãng màu xanh; 5 nhị dài hơn tràng; vòi nhuỵ dài hcfn nhị. (Ảnh 4a)
• M ô tả dược liệu
Kim ngân cuồng: Cành và lá được cắt thành những đoạn ngắn 4-6 cin, cành màu vàng nâu có khía dọc, lá khô quăn lại màu lục xám. Phiến lá mặt trên không có lông, mặt dưới có lông ngắn, gân lấ hình lông chim lồi lên. (Ảnh 4b) Kim ngân hoa: Nụ hoa hình ống hơi cong queo, dài 1,5-5 cm. Mặt ngoài màu vàng đến nâu. Phía dưới ông tràng có đài nhỏ màu lục có 5 răng. Trong nụ có 5 nhị, 1 vòi nhụy. Dược liệu có mùi thơm nhẹ, vị hơi đắng. (Ảnh 4c)
<♦ Đặc điểm vi học • Vi phẫu lá
Phẩn gân chính: Gân trên lá hơi lồi, gân chính dưới lồi nhiều. Biểu bì trên
và dưới là một hàng tế bào xếp đều đặn, hình hơi tròn mang lông che chở. Mô dày sát biểu bì gồm 3-5 hàng tế bào có hình tương đối tròn, thành dày. Mô mềm là nhiều tế bào thành dày mỏng không đều nhau, rải rác trong mô mềm là các tinh thể calci oxalat hình cầu gai. Bó libe gỗ xếp hình vòng cung, libe ở ngoài gỗ ở trong. Trong libe có rất nhiểu tinh thể calci oxalat xếp thành hàng hình vòng cung hoặc nằm rải rác. Các mạch gỗ xếp thành hàng đều đặn.
Phần phiến lá: Biểu bì trên và dưới là m ột hàng tế bào hình chữ nhật. Mô
giậu cấu tạo bơi một hàng tế bào hình chữ nhật xếp sít nhau và thẳng góc với biểu bì. Mô khuyết là nhiều tế bào to nhỏ không đều nhau có thành mỏng. (Ảnh 4d)
• Vi phẫu thân
Mật cất thân tròn, từ ngoài vào trong có: biểu bì ỉà một hàng tế bào nhỏ xếp đều đặn mang lông che chở đcfn bào. Mô dày gồm 3-4 hàng tế bào thành dàỵ, kích thước khác nhau xếp sát dưới lớp biểu bì. Mô mềm cấu tạo từ những tế bào thành mỏng, phía trong mô mềm là các tế bào có thành hoá gỗ đặc biệt tạo thành 1 vòng. Libe tạo thành 1 vòng liên tục. Tầng phát sinh libe gỗ không nhìn rõ. Gỗ gồm các mạch gỗ xếp thành các hàng tập hợp lại thành bó. Mô
mềm ruột gồm các tế bào tròn có thành hoá gồ càng vào phía trong kích ihước tế bào càng lớn dần. (Ảnh 4e)
• Đặc điểm bột
Bột màu vàng sậm vị hơi đắng.
Soi kính hiển vi thấy: Những mảnh biểu bì mang lông che chở (4). Mảnh
cánh hoa mang tinh thể và mang các bó mạch xếp song song (8). Lỏng che
chở đơn bào, thành dàv nhẵn (3). Nhiều tinh thể calci oxalat hình cầu gai (6).
M ảnh biểu bì mang lỗ khí (1). N hiều hạt phấn tròn kích thước 32-48 /im riêng rẽ hay thành đám (2), các mảnh m ô mềm cánh hoa nàm rải rác. Các mảnh mạch xoắn, mạch vạch, mạch điểm (7). (Ảnh 4f)
❖ Định tính.
Định tính bằng phản ứng hoá học
♦ Lấy 5g bột được liệu cho vào bình nón dung tích lOOml, thêm 20ml ethanol 90%(TT). Lắc kĩ, đun cách thuỷ 15 phút, lọc. Cô dịch lọc trên cách thuỷ đến khi còn khoảng 5ml. Lấy Im l dung dịch vào ống nghiệm, thém 2- 3 giọt HCl đặc (TT) và m ột ít bột Mg (TT) dung dịch chuyển từ màu (TT) vàng sang da cam đến đỏ.
♦ Lấy Ig bột dược liệu cho vào ống nghiệm, thêm lOml nước cất, lắc nhẹ trong 5 phút, lọc, Cho vào 2 ống nghiệm mỗi ống 2ml dịch lọc. Thêm 2-3 giọt NaOH 10%(TT) vào ống nghiệm thứ nhất, dung dịch có màu vàng đậm hơn ống nghiệm thứ hai.
Định tính bằng HPTLC.
Tiến hành sắc ký như đã nêu ở phần phưcrtig pháp nghiên cứu mục 2.2, với hệ dung môi Toluen: Ethylacetat: Acid formic (5:9:1,5), thu được kết quả
• Sắc ký đồ, đường cong biểu diễn và bảng số liệu các thông số của sắc ký đồ cua dịch chiết Kim ngân cuông, Kim ngân hoa trong methanol quan sát ở u v 254 nm (Hình 4.1.1; Hình 4.1.2).
Củ
A: B:
Sắc ký đồ của dịch chiết 2 loài sắc ký đồ của dịch chiết 2 loài sắc ký đồ của - Kim ngân ở bước sóng 254nm Kim ngân ở bước sóng 366nm ở ánh sáng t
Ảnh 4a: Cây Kim ngân L.confusa
Mịíiíí, ( í'iM Í SIÍ ipn ị ' "5
Ảnh 4b; Vị thuốc Kim ngân cuộng loài L.confusa
i'- i i) t ! - ',< ( r íịif Ị Ị ^ ,) l ^ ,lj Ị Ị Ị i|^ |t Ị Ị Ị t ỊlllH (Ịim [ỊM ÌỊlM |)!rT Ị1 P ( [ I f l î f f l f f m n T n F f f l f ,
Ảnh 4c: VỊ thuốc Kim ngân hoa loài L.confusa
Ảnh 3a: Cây Kim ngân L japónica
Ảnh 3b: VỊ thuốc Kim ngân cuộng loài L.japonica
aPE ^
5 * • 10
Ảnh 3c: Vị thuốc Kim ngâĩi hoa loài L.japonica
• « n Ỉ B « a M 4 B i t t Ì D
Ảnh 4đ: Vi phẫu lá Kim ngân L.coníusa
Ảnh 4e; Vi phẫu thân Kim ngân L.coníusa
Ảnh 4f: Một số đặc điểm bột hoa Kim ngân Lxoníusa: 1-mảnh biểu bì mang Ịỗ khí; 2-hạt phấh; 3-lông che chở;
4-mảnh biểu bì mang lông che chở; 5-mảnh biểu bì; 6-tinh thể calci oxalat; 7-mảnh mạch; 8-mảnh cánh hoa
» I*x * ' T r a c k 2 ' I V. 1 ' 1 0.2 ‘ 1 ' 7- 1 ' 0 ị 1 ' 1 ‘ 1 O.T ' 1 ' r, J=: P e a k S't a r t M a x . Ẽr t d 3 S u tts t # Rf H Rf H PM.] Rf H A [^ 1 N a m e t D Ũ2S D.D Ữ.D57 Ũ3D.4 8 8 4 Ũ.Ũ71 3 4 0 .2 5741 1 e . i 5 2 Ủ.D71 3 4 0 .2 Ữ.ÚS2 414.e 6 -6 6 0 ,1 2 2 196.9 s a is .e 8 ,3 4 3 D 1 2 2 196.9 Ũ .139 2 5 2 .9 4 Ũ 6 ũ. 159 4 ,9 215D .0 2.3D 4 Ữ.273 4 8 .3 Ũ.337 8 0 8 ,0 1 2 ,9 8 Ũ.422 3 9 4 2 0 1 1 3 6 2 1 .5 5 s 0 .5 2 4 114.6 Ũ.5 5 5 2 5 5 .0 4.1D 2 2 8 ,8 28D5 7 3.Ũ1 B 0 587 2 2 8 ,8 Ù.636 2Ü54.? 3 3 Ü2 0.eS 7 1362 6 3 4 4 7 3 1 36 93 7 D.657 1 3 8 2.6 D .666 141S.7 2 2 81 0 .7 4 6 7 .9 173Ũ9 9 18 5 4 8 D 833 4 7 .5 D.S78 23Ũ 4 3 7D 0 .8 8 7 2 1 1 .3 3 0 3 1 .5 3 2 5 9 a Q1S 2 2 3 .0 0.921 2 3 7 ,1 3 81 Ũ .946 6 4 1 13D4.4 1 9 3 Tcrtar Height « 2 2 2 .8 2 Hình 3.1 Total A « a : 9 3 3 4 » .s
. 1: Kết quả sắc ký dịch chiết Kim ngân cuồng loài L.japónica quan sát ở bước sóng 254nm T r a c k 1 (X1 ŨO) T r a c k 1 P e ^ k S t a r t M a x . E n d a r e a S u b s t # R f H R f H 1%I R f H A ị %\ N a m e 1 0 0 0 3 51 3 0 0 6 9 1 0 3 0 0 1 1 1 0 ũ 0 7 4 1 D2 0 3 1 3 S 1 3 6 1 1 2 2 2 Q 0 7 A 1 0 2 0 . 3 0 0 7 7 1 0 2 0 3 11 0 5 Ũ 1 0 4 0 9 5 . 7 9 7 6 0 3 7 . 2 3 3 0.1 2 9 8 7 2 0 0 1 3 7 _ 9 33 2 1 1.Ì 11 0.1 7 0 5 4 7 2 S 3 2 5 9 2 A □ 231 Ũ 0 0 1132 s 1 11 0 2G1 9 5 4 5S 7 8 0 4 6 5 d 261 9 5 4 ủ 5 1 3 G 48 9 7 0 3 0 3 3Ü 5 8 9 2 1 0 3 1 6 1 8 7 9 6 Ũ 3 3 0 5 8 9 . 2 0 3 3 ¿ 5 3 1 0 e 4 0 Ữ.3Ạ0 6 s 6 3 1 3 4 5 .5 4 7 0 5 4 ỹ J 5 L 2 _ 1 04 2 3 1 1 2S 0 64Ổ 7 ỹ ỹ c 2 1 Ủ9 9 2 1 7 14 8 0 C 4 8 7 g s 0 0 6 7 9 1 3 7 S . 2 1 4 9 3 Ữ.731 1 4 6 Ũ 2 3 5 1 6 1 1 9 1 Ũ 3 0 731 )4 G 0 0 7 5 0 2ŨS 3 3 2 3 Ũ 751 171 s 1 9 7 4 ü 1 ,&ũ 1 Ũ 0 8 4 ! Ỉ 6 3 6 0 8 9 Ũ 8 9 9 Ũ 9 74 Ữ.901 8 2 7 s 1 5 1 Ữ 2 ; 1 2 2? 11 Ü 913! 8 2 7 9 0 9 0 7 8 4 6 6 í( 17 Ũ 9 3 7 SS7 e 8 9 7 9 3 7 29 1 i 0 3 5 9 5 3 3 9 0 9 6 2 5 3 4 1 5 7B Ũ 9Õ3 1 8 3 3 7 5 3 2 7 4 T c t a l H e i g h t 9 2 3 2 8 8 Hình 4.1.1: T ũ t a l A i e a 1 2 3 1 1 3
T r a c k 1 P e a k Sj a r t M a x. Er td a r s a S u b S t ■V Rf H R I H — RíM___ . . f * f H A PM.1 N « m « 1 0 ,0 2 2 0 -0 0 ,0 7 9 1 5 1 7 s S .9 S 0 .1 3 6 1 2 .2 3 3 9 2 0 .0 1 4 41 2 0 .1 7 0 0 .0 D.22D 3 8 « .7 2 . 2 ứ 0 .2 2 0 3S1 -4 3 S 4 4 .2 1-4 2 3 0 .2 5 8 4 6 9 .0 0 .2 9 0 9 7 9 .S S . 6 0 0 .3 D 4 8 6 5 Ù 1 2 5 2 9 ,4 S -0 3