Theo quy định chủa Châu Âu (2002/657/EC) về phân tích dư lượng các phương pháp phải đạt yêu cầu có ít nhất 4 điểm IP (Identification Point).Phương pháp chúng tôi có 1 ion mẹ (Precursor Ion = 1,5 IP) và 2 ion con (Product ion=1,5 IP) với mỗi chất.Như vậy phương pháp đã xây dựng đạt yêu cầu về độ đặc hiệu của Châu Âu. Tính đặc hiệu được đánh giá qua phân tích các dung dịch chuẩn, dung dịch mẫu trắng, dung dịch mẫu thử chứa 2 kháng sinh Ciprofloxacin,Ofloxacin.
Chuẩn bị các dung dịch chuẩn, dung dịch mẫu trắng (placebo) và dung dịch mẫu thử như sau:
Tiến hành phân tích mẫu trắng, dung dịch chuẩn nội và dung dịch trắng thêm chuẩn trên hệ thống LC-MS/MS:
- Mẫu trắng: Nước thải đã xử lý như mục 3.2
- Mẫu dung dịch chuẩn hỗn hợp: Phaloãng dung dịch chuẩn gốc hỗn hợp CIPRO, OFLO và chuẩn nội gốc CIPRO 13C3 trong hỗn hợp dung môi MeOH: H2O (4:1) tạo nồng độ CIPRO, OFLO là 100ppb và chuẩn nội CIPRO 13C3 là 10ppb.
- Mẫu trắng thêm chuẩn (Mẫu tự tạo): Từ dung dịch chuẩn gốc hỗn hợp 2 kháng sinh và chuẩn nội gốc ở mục 3.1.4 pha loãng trong nước thải đã xử lý sơ bộtạo CIPRO 13C3 10 ppb, CIPRO và OFLO có nồng độ 100 ppb. Lọc qua màng lọc 0,45 µl
Tiến hành phân tích theo điều kiện sắc ký đã xác định. Kết quả được trình bày hình dưới đây:
(a)Mẫu trắng
(b) Mẫu trắng thêm chuẩn OFLO
IS
(c) Mẫu dung dịch chuẩn
Hình 3.4: Các sắc ký đồ xác định tính đặc hiệu
Nhận xét :
- Trên sắc ký đồ mẫu trắng không xuất hiện pic lạ có cùng thời gian lưu với CIPRO, OFLO, IS.
- Trên sắc ký đồ của mẫu thêm chuẩn chứa hỗn hợp dung dịch CIPRO, OFLO và IS xuất hiện pic đẹp, cân xứng, tách riêng biệt và có cùng thời gian lưu với mẫu dung dịch chuẩn hỗn hợp.Như vậy phương pháp có độ đặc hiệu tốt, đáp ứng được yêu cầu.