3.2.2.1. Kiểm tra độ tinh khiết bằng HPLC
- Xây dựng quy trình định lượng oxostephanin bằng phương pháp HPLC:
+ Cột Apollo C18 (250mm X 4,6mm, 5^m) (Alltech); + Detector PDA, bước sóng phát hiện 254nm;
+ Thể tích tiêm mẫu: 20 ^l; + Tốc độ dòng: 1,3 ml/phút;
+ Pha động: hỗn hợp dung môi A (acetonitril) và dung môi B (dung dịch đệm KH2PO4 20mM : triethylamin (100 : 0,3), điều chỉnh đến pH = 3 bằng acid phosphoric đặc); Chương trình gradient dung môi.
+ Tính kết quả bằng phương pháp phần trăm diện tích pic.
- Kết quả xác định độ tinh khiết của oxostephanin đã tinh chế đạt 99,94 %.
3.2.2.2. Xác định độ tinh khiết bằng phương pháp quét nhiệt vi sai
- Tốc độ gia nhiệt 50C/phút đến 2900C; - Khí: Nitrogen.
DSC Do tinh khiet Oxostephanine
mW
5.00
(Temp Program]
Temp Rate Hold Temp Hold Time [C/min ] [ C ] [ min ] 5.00 350 0 0
0.00
File Name: Oxostephanine l.tad Detector DSC-60
Acquisition Date 14/03/21 Acquisition Time12:11:58(-0800) Sample Name: Oxostephanine Sample Weight: 3 000[mg] Annotation:
0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 Time [min]
Hình 3.7. Phổ DSC oxostephanin
- Kết quả độ tinh khiết đạt trung bình 99,58 %. Tuy nhiên, do oxostephanin bị phân hủy ngay sau nóng chảy nên giá trị trên chỉ để tham khảo. (Phụ lục 4)
3.2.2.3. Xác định tạp bay hơi bằng phương pháp phân tích nhiệt TGA
- Tốc độ gia nhiệt 10K/phút; - Khoảng nhiệt độ: 25 - 125°C; - Khí: Nitrogen;
- Tốc độ dòng: 100ml/phút.;
A«I0
I-TTTT1 I I ■ ■ 1 ■ » ' ' 1 I » » ' I I ' > I t I I I > 1 ... I—r r r r r r r m ...r n — I— m— n ......I , , ! 0 » ì 3 * Ỉ 6 7 8 9 10 u 12 ü H iS 16 17 IS 19 mn Nat on « II n i t t u t « o f D ru g Q u a ly C o n t r o l M E T T IE R S T A R ' s w 11 0 0
Hình 3.8. Phổ TGA của oxostephanin
Kết quả: Cho kết quả tạp bay hơi 0,04 %. (Phụ lục 4)