2.3.4. Phương pháp pha loãng liên tục để xác định số lượng vi sinh vật
Chuẩn bị
Cân chính xác các thành phần môi trường nuôi cấy nấm men đặc theo công thức ở mục 2.1.2. H a tan các thành phần tan trong nước, phân tán thạch vào dung dịch trong bình nón thích hợp. Đậy kín b ng nút bông. Tiệt khuẩn ở 115˚C/20 phút trong nồi hấp tiệt khuẩn. Lấy bình đ ng môi trường ra khỏi nồi hấp, phân phối môi trường lên các đĩa petri đã được rửa sạch, hấp tiệt khuẩn và sấy khô sao cho tạo được bề mặt nhẵn, phẳng. Chờ cho thạch nguội và đông rắn lại, đậy kín.
Chuẩn bị các ống nghiệm sạch mỗi ống chứa 9ml nước muối sinh lý (NaCl 0,9%), đậy kín, tiệt khuẩn ở 121˚C/20 phút trong nồi hấp tiệt khuẩn, để nguội xuống nhiệt độ t 37˚C tới 40˚C.
Xác định số lượng VSV trong 1ml dịch nuôi cấy
Hút chính xác 1ml dịch chứa VSV cần đếm pha loãng trong ống nghiệm thứ nhất, lắc đều. Hút chính xác 1ml dịch đã được đồng nhất trong ống nghiệm thứ nhất pha loãng sang ống nghiệm thứ 2, lắc đều. Cứ tiếp tục pha loãng như vậy tới nồng độ cần pha loãng. Cấy 0,5ml dịch trong ống nghiệm cần khảo sát vào đĩa petri (làm trên 3 nồng độ cuối, mỗi nồng độ cấy trên 2 đĩa). Ủ các đĩa này trong tủ ấm 30˚C. Sau 48 giờ đọc kết quả.
Công thức tính:
2× (1)
Với:
: số lượng tế bào trong 1ml dịch ban đầu.
: số khuẩn lạc mọc trên đĩa petri có cấy nồng độ pha loãng n.
: số lần pha loãng.
Xác định số lượng VSV trong mẫu sau đông khô
Sau đông khô thu được m gam sản phẩm. Lấy lượng x gam sản phẩm pha loãng trong bình nón 250ml chứa 100ml nước muối sinh lý đã hấp tiệt trùng ở 121˚C/20 phút. Hút chính xác 1ml dịch trong bình nón pha loãng trong ống nghiệm chứa 9ml nước muối sinh lý, rồi tiếp tục pha loãng, cấy và ủ như trên. Công thức tính:
- Số lượng S. boulardii có trong lượng mẫu sau đông khô tương ứng 1ml dịch trước đông khô được tính theo công thức:
2× (2)
- Số lượng S. boulardii trong 1 gam mẫu sau đông khô được tính theo công thức:
2× (3)
Với:
: Số lượng S. boulardii có trong lượng mẫu sau đông khô tương ứng
: Số lượng S. boulardii trong 1 gam mẫu sau đông khô.
: số lượng khuẩn lạc mọc trên đĩa petri tại nồng độ pha loãng .
: số lần pha loãng.
: khối lượng mẫu sau đông khô thu được.
: khối lượng mẫu sau đông khô lấy tiến hành đếm số lượng VSV.