* Đánh giá một số chỉ tiêu về chất lượng tinh dịch của hai giống lợn Landrace và DU75 qua các chỉ tiêu:
- Chỉ tiêu thường xuyên:+ Thể tích tinh dịch (V) + Màu sắc + Mùi + Độ vẩn + Hoạt lực tinh trùng (A) - Chỉ tiêu định kỳ: + Nồng độ tinh trùng (C) + Tỷ lệ kỳ hình (K%) + Sức kháng của tinh trùng (R) + Độ pH của tinh trùng * Những bệnh thường xảy ra ở lợn đực giống và biện pháp phòng trị 2.3.4. Phương pháp nghiên cứu
2.3.4.1. Phương pháp theo dõi tinh dịch
Xác định bằng phương pháp định lượng. Thể tích tinh dịch (V/ml) là lượng tinh dịch của lợn trong 1 lần xuất tinh sau khi đã lọc bỏ keo phèn.
Phương pháp: Dùng cốc đong có định mức (ml), trên miệng cốc đặt 3 - 4 lớp vải gạc đã được khử trùng để lọc bỏ keo phèn. Sau khi lấy được tinh dịch đặt cốc đựng tinh trên một mặt phẳng ngang tầm mắt, đọc kết quả theo mặt cong dưới của bề mặt tinh dịch.
* Nồng độ tinh trùng (C)
Nồng độ tinh trùng là tổng số tinh trùng có trong 1ml tinh nguyên. Phương pháp dùng buồng đếm hồng - bạch cầu
- Bước 1: Đưa buồng đếm đã đậy lamen lên kính hiển vi quan sát ở độ phóng đại 100 lần để tìm thấy buồng đếm.
- Bước 2: Dùng ống pha loãng bạch cầu hút tinh nguyên đến vạch 0,5; sau đó hút tiếp dung dịch NaCl 3% đến vạch 11. Như vậy, hỗn hợp trong bầu thuỷ tinh được pha loãng 20 lần.
- Bước 3: Dùng 2 ngón tay (ngón cái và ngón trỏ) bịt 2 đầu ống hút. Lắc nhẹđể trộn đều tinh dịch với dung dịch NaCl trong bầu ống hút.
- Bước 4: Bỏ 3 - 4 giọt đầu tiên, đưa ống hút lên buồng đếm, rồi để tinh dịch chảy từ từ tràn vào 2 bên buồng đếm theo rãnh buồng đếm đã chuẩn bị sẵn.
- Bước 5: Đếm tinh trùng nằm trong khu vực dùng đếm hồng cầu. Đếm 4 ô nhỡ ở góc và 1 ô nhỡ ở giữa (mỗi ô nhỡ có 16 ô con, mỗi ô con có diện tích 1/400 mm2 và chiều sâu của 1 buồng đếm 0,1 mm.
Nguyên tắc đếm:
+ Trong mỗi ô, chỉ đếm đầu tinh trùng nằm trên 2 cạnh, còn những tinh trùng nằm trên 2 cạnh kia nhường cho ô khác (đối với các tinh trùng nằm trên cạnh).
+ Đếm cả 2 bên buồng đếm rồi lấy số trung bình, nếu kết quả ở 2 bên chênh nhau đến 30 % thì phải làm lại.
+ Nếu tinh trùng tụ thành từng đám, không đếm được ở trong buồng đếm thì cũng phải làm lại.
- Bước 6: Xác định nồng độ tinh trùng. Công thức tính: C = n. V. 50000
Trong đó:
+ C là nồng độ tinh trùng trong 1ml tinh nguyên, triệu/ml. + V là số lần pha loãng tinh dịch trong ống hút bạch cầu.
+ 50000 là chỉ số qui nồng độ tinh trùng trở về 1ml tinh nguyên chưa pha loãng với điều kiện 1 ô con có diện tích 1/400mm2 và chiều sâu 0,1mm. n là số lượng tinh trùng đếm được.
Chú ý: Nếu dùng ống pha loãng bạch cầu và pha loãng tinh dịch trong đoạn phình 20 lần. Cách tính toán sẽ đơn giản hơn nhiều. Sau khi đếm được bao nhiêu tinh trùng trong 80 ô con chỉ cần nhân với 1.000.000 sẽ có số lượng tinh trùng trong 1ml tinh dịch.
* Hoạt lực tinh trùng (A)
Để kiểm tra hoạt lực tinh trùng, ta cần phải chuẩn bị kính hiển vi, lamen kính, đũa thuỷ tinh và đánh giá dựa theo quy trình kỹ thuật của Bộ Nông Nghiệp và Nông Thôn năm 1983.
Cách làm: Dùng đũa thuỷ tinh nhúng vào cốc đựng tinh dịch sau đó lấy một giọt tinh nguyên nhỏ lên phiến kính, dùng lamen đậy lên sao cho tinh dịch dàn đều. Đưa phiến kính lên kính hiển vi có độ phóng đại 200 lần. Tinh dịch kiểm tra phải để ở nhiệt độ 37 - 39°C để đảm bảo cho tinh trùng hoạt động bình thường.
Hoạt lực tinh trùng được xác định theo thang điểm của MilôvalốpV.K. Bảng thang điểm đánh giá sức hoạt động của tinh trùng như sau:
Bảng 2.1. Thang điểm đánh giá hoạt lực của tinh trùng Hoạt lực (A) 1,0 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 Tỷ lệ tinh trùng tiến thẳng (%) 95- 100 85- 95 75- 85 65- 75 55- 65 45- 55 35- 45 25- 35 15- 25 5-15 * pH tinh dịch Cách kiểm tra: Có thể dùng giấy đo pH để xác định độ pH của tinh dịch + Bước 1: Dùng đũa thuỷ tinh lấy 1 giọt tinh dịch nhỏ lên giấy đo pH và đợi trong thời gian khoảng 3 giây.
+ Bước 2: So sánh màu của mặt bên kia của giấy với bảng màu chuẩn. + Bước 3: Xác định độ pH của tinh dịch theo bảng so màu chuẩn sau khi so sánh.
+ Bước 4: Thực hiện lại thao tác kiểm tra pH từ bước 1 đến bước 3 hai lần nữa sau đó lấy kết quả trung bình.
* Độ vẩn, màu sắc, mùi
- Là độ vẩn đục của tinh dịch, nó thể hiện sức sống và nồng độ tinh trùng.
Bảng 2.2. Thang điểm đánh giá nồng độ tinh trùng dựa vào độ vẩn tinh dịch Mức độ biểu thị Mức độ vẩn Nồng độ tinh trùng + + + + + Rất nhiều Cao + + + + Nhiều Cao + + + Trung bình Trung bình + + Ít Thấp + Loãng Thấp
- Màu sắc: Theo Nguyễn Thiện và cs (1993) [19] tinh dịch lợn thường có màu trắng sữa hoặc nước vo gạo. Nếu màu sắc khác màu trên thì có thể lợn bị viêm nhiễm đường sinh dục hoặc do kỹ thuật khai thác.
- Mùi: Bình thường tinh dịch có mùi hăng tanh đặc biệt. Nếu có mùi khai, thường do bị lẫn nước tiểu.
Nếu có mùi hôi thối, thường do đường sinh dục viêm nhiễm.
* Sức kháng của tinh trùng (R)
Đây là chỉ tiêu đánh giá sức đề kháng của tinh trùng trong điều kiện bất lợi. Cụ thể là thử nghiệm trong dung dịch NaCl 1%.
Để xác định sức kháng của tinh trùng ta dùng phương pháp 2 lọ.
- Chuẩn bị: Hai lọ thuỷ tinh dung tích 10ml được đánh số 1 và 2, đũa thuỷ tinh, kính hiển vi, ống hút có chia độ, phiến kính + lamen kính, dung dịch NaCl 1%.
- Tiến hành: Dùng ống hút hút 0,01ml tinh nguyên cho vào lọ 1 đã chứa sẵn 5ml dung dịch NaCl 1%, dùng đũa thuỷ tinh khuấy nhẹ, lắc đều.
Hút 0,5ml dung dịch ở lọ 1 cho vào lọ 2 đã đựng sẵn 0,5ml NaCl 1%, cũng dùng đũa thuỷ tinh khuấy nhẹ, lắc đều.
Qua 2 lần pha loãng thì lúc này ở trong lọ thứ 2 tinh dịch đã được pha loãng 1000 lần.
Lấy 1 giọt dung dịch ở lọ 2 đưa lên kính hiển vi quan sát. Nếu thấy tinh trùng vẫn còn hoạt động thì tiếp tục cho 0,1ml NaCl 1% vào lọ 2. Sau đó lại lấy ra soi trên kính hiển vi. Làm như vậy cho đến khi tất cả tinh trùng ngừng hoạt động thì dừng lại.
Lúc đó sức kháng của tinh trùng được tính theo công thức: R= r0+n.r
Trong đó:
R là sức kháng của tinh trùng.
r0 là mức độ pha loãng của tinh trùng tại thời điểm kiểm tra đầu tiên. n là số lần cho thêm 0,1ml dung dịch NaCl 1%.
r là mức độ pha loãng sau mỗi lần cho thêm 0,1ml dung dịch NaCl 1%. (Trong trường hợp trên r0 = 1000; r = 100; R = 1000 + n.100 = 100(10+n))
* Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (K)
Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình là tỷ lệ % tinh trùng có hình thái không bình thường trong tinh dịch.
Cách kiểm tra:
+ Bước 1: Lấy 1 phiến kính rửa sạch sấy khô.
+ Bước 2: Nhỏ 1 giọt tinh nguyên lên 1 đầu của phiến kính Lấy cạnh của 1 phiến kính khác dàn đều giọt tinh lên mặt phiến kính. Chú ý khi phết kính phải nhẹ nhàng, tiêu bản càng mỏng càng tốt. Chỉ phết 1 lần, phết đều không tạo thành làn sóng.
+ Bước 3: Để tiêu bản tự khô; có thể cốđịnh bằng cách hơ qua ngọn đèn cồn.
+ Bước 4: Nhỏ thuốc nhuộm lên tiêu bản, có thể dùng nhiều loại thuốc nhuộm (eosin, xanh methylen, thuốc đỏ… kể cả mực viết nhưng phải không có cặn).
+ Bước 5: Để cho tiêu bản ngấm thuốc nhuộm (mùa Hè để 5 - 7 phút, mùa Đông 10 phút) rồi rửa tiêu bản. Cách rửa như sau: Dùng ống hút ống nhỏ giọt, giỏ nhẹ nước cất xuống một đầu tiêu bản để cho nước loang nhẹ, làm trôi thuốc nhuộm, không dội mạnh làm trôi tiêu bản.
+ Bước 6: Vẩy khô tiêu bản rồi đưa lên kính hiển vi quan sát ở độ phóng đại 400 - 600 lần đọc kết quả; lần lượt quan sát đều khắp tiêu bản đếm khoảng 300 - 500 tinh trùng bất kỳ (đếm ngẫu nhiên) cả con bình thường và kỳ hình, không đếm lặp lại. Ghi kết quả riêng những con kỳ hình và tính theo công thức:
K = m/n x 100
K: Là tỷ lệ tinh trùng kỳ hình.
m: Số tinh trùng kỳ hình đếm được.
n: Tổng số tinh trùng được đếm (bao gồm cả tinh trùng kỳ hình và tinh trùng không kỳ hình).
2.3.4.2. Phương pháp theo dõi bệnh trên lợn đực giống
- Theo dõi và phát hiện lợn đực giống nuôi tại Trạm có biểu hiện bất thường.
- Chẩn đoán và điều trị một số bệnh xảy ra trên đực giống.
2.3.5. Phương pháp xử lý số liệu
Các số liệu thu được xử lý bằng phương pháp thống kê sinh vật học của Nguyễn Văn Thiện và cs (2002) [21] tính các tham số thống kê trên phần Excel.
- Số trung bình cộng (X ): n n x x x n i i n ∑ = Χ = + + + = Χ 1 2 K 1 - Độ lệch tiêu chuẩn (S x ): ( ) 1 2 2 − − ± = ∑ ∑ n n x x S x - Sai số trung bình (m x ): 1 − ± = n S m x x - Hệ số biến dị: ( )% = ×100 X S Cv x Trong đó: X : Là số trung bình x: Là lượng biến n: Là dung lượng mẫu mX : Là sai số trung bình SX : Là độ lệch tiêu chuẩn Cv : Hệ số biến dị
2.4. Kết quả nghiên cứu và thảo luận
2.4.1. Kết quả đánh giá các chỉ tiêu về độ vẩn, màu sắc, mùi tinh dịch của hai giống lợn Landrace, DU75 (theo cảm quan)
Trong quá trình khai thác tinh dịch lợn, chúng tôi đã đánh giá cảm quan chất lượng tinh thông qua các chỉ tiêu về màu sắc, mùi và độ vẩn của tinh dịch. Kết quả thu được trình bày ở bảng 2.3
Bảng 2.3. Độ vẩn, màu sắc, mùi của tinh dịch
Chỉ tiêu theo dõi Giống lợn
Landrace DU75
Màu sắc Trắng sữa Trắng sữa
Mùi Hăng tanh Hăng tanh
Độ vẩn +++ +++
Qua bảng 2.3 cho thấy kết quả kiểm tra màu sắc, mùi và độ vẩn tinh dịch của 2 giống lợn Landrace và DU75 không có sự biến đổi rõ. Màu sắc đặc trưng là màu trắng sữa, mùi hăng tanh và độ vẩn +++ ( Độ vẩn được đánh giá theo Nguyễn Thiện và Nguyễn Tấn Anh (1993) [19]). Điều này cho thấy, Trạm đã có chế độ chăm sóc, nuôi dưỡng, quản lý và khai thác đực giống hợp lý.
2.4.2. Đánh giá các chỉ tiêu chất lượng tinh dịch
Các chỉ tiêu tổng hợp về chất lượng tinh dịch được chúng tôi tổng hợp thông qua bảng 2.4.
Bảng 2.4. Các chỉ tiêu chất lượng tinh dịch qua các tháng theo dõi
STT Giống lợn Các chỉ tiêu Landrace DU75 x m X ± Cv% X ±mx Cv% 1 Số lần thu mẫu (n) 140 140 2 Thể tích tinh dịch (V/ml) 266.65a ± 0.802 1.39 231b.04 ± 0.87 1.99 3 Hoạt lực tinh trùng (A) 0.76 ± 0.004 2.47 0.78 ± 0.005 3.1 4 Nồng độ tinh trùng (C triệu/ml) 203 b.78 ± 0.54 2.21 219a.26 ± 0.8 1.9 5 Sức kháng của tinh trùng (lần) 3532 b.14 ± 0.81 0.21 3959a.3 ± 3.0 0.4 6 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (%) 3.72 b ± 0.09 3.3 3.75a ± 0.03 4.4 7 Tổng số tinh trùng tiến thẳng V.A.C (tỷ/lần) 41.34 a ± 0.3 3.8 39.74b ± 0.3 4.3 8 pH của tinh dịch 7.08 ± 0.004 0.3 7.1 ± 0.004 0.3
+ Thể tích tinh dịch (V ml)
Chúng tôi theo dõi lượng tinh bình quân đã lọc bỏ keo phèn của một lần khai thác ở lợn đực của mỗi giống như kết quả ở bảng 2.4.
Qua bảng 2.4 cho thấy, thể tích tinh dịch thể tích giống lợn Landrace đạt 266,65 ± 0,802 ml, còn ở lợn DU75 đạt 231,04 ± 0,87 với hệ số biến dị tương ứng là 1,39 và 1,99. Sự sai khác về thể tích tinh dịch giữa 2 giống lợn là rất rõ rệt với (P < 0,001).
Theo Nguyễn Văn Thuận và cs (1984) [23] cho biết thể tích tinh dịch của giống lợn Landrace là 244,87ml thì kết quả của chúng tôi là 266,65ml cao hơn không nhiều. Còn theo Nguyễn Thiện và cs (1993) [19] thể tích tinh dịch lợn ngoại một lần xuất tinh biến động từ 250 đến 400 ml.
+ Hoạt lực tinh trùng (0≤ A ≤1)
Có ý nghĩa quan trọng đối với sự thụ thai của lợn nái, nó nói lên sức sống và khả năng vận động của tinh trùng sau khi ra khỏi cơ thể.
Hoạt lực tinh trùng của 2 giống lợn Landrace và DU75 lần lượt là 0,76±0,004 và 0,78±0,005 (bảng 2.4). Mức độ biến dị tương ứng của 2 chỉ tiêu này tương ứng là 2,47 và 3,1. Sự sai khác hoạt lực tinh trùng giữa 2 giống là rõ rệt với P < 0,01.
Theo Nguyễn Tấn Anh (1984) [1] thì lợn Landrace có A = 0,658±0,005 còn kết quả của chúng tôi cao hơn. Lương Tất Nhợ (1980) [18] cho biết một số giống lợn ngoại nuôi ở nước ta có hoạt lực tinh trùng trung bình 70% thì kết quả của chúng tôi đều cao hơn. Như vậy, kết quả của chúng tôi chứng tỏ rằng chất lượng của 2 giống lợn trên đã được nâng lên thông qua quá trình chọn lọc và cải tiến giống.
Số liệu trên thể hiện hoạt lực tinh trùng lợn nghiên cứu của chúng tôi đạt yêu cầu sử dụng ở mức trung bình.
Thể hiện phẩm chất tinh dịch, nồng độ tinh trùng cao thì chất lượng tinh càng tốt.
Nồng độ tinh trùng của 2 giống lợn Landrace và DU75 tại trạm đạt 203,78±0,54 và 219,26±0,8 triệu/ml. Hệ số biến dị tương ứng là 2,21 và 1,9 (bảng 2.4). So sánh nồng độ của 2 giống lợn thì lợn Landrace thấp hơn rõ rệt so với DU75 với P < 0,001.Theo kết quả nghiên cứu của Đinh Hồng Luận và cs (1988) [15] thì nồng độ tinh trùng của lợn đực Landrace đạt 224,6 triệu/ml tinh nguyên.
So với các kết quả nghiên cứu trên thì kết quả nghiên cứu của chúng tôi thu được còn thấp. Điều đó phản ánh được thực trạng của đàn lợn giống nuôi tại cơ sở này. Kết quả có thể do ảnh hưởng của khí hậu không thuận lợi, có thể do chế độ dinh dưỡng kém hoặc thừa năng lượng, hoặc do chế độ khai thác không hợp lý làm cho tinh dịch loãng, không có tinh trùng.
+ Tổng số tinh trùng tiến thẳng V.A.C (Tỷ/lần)
Chỉ tiêu này phản ánh tổng số tinh trùng có khả năng thụ thai trung bình của một đực giống trong một lần xuất tinh, nó quyết định số liều tinh dịch có thể sản xuất được trong một lần khai thác.
V.A.C = Thể tích tinh dịch x Hoạt lực tinh trùng x Nồng độ tinh trùng. Kết quả ở bảng 2.4 cho thấy V.A.C của 2 giống Landrace va DU75 lần lượt là 41,34±0,3 và 39,74±0,3, hệ số biến dị là 3,8 (Landrace) và 4,3 (DU75). Sự sai khác giữa 2 số trung bình là không lớn. Theo Nguyễn Tấn Anh và cs (1983) [3] thì V.A.C của lợn ngoại ở các tỉnh phía Bắc đạt 26 - 41,6 tỷ/ lần xuất tinh.
Như vậy, kết quả nghiên cứu của chúng tôi đạt tiêu chuẩn trên và cũng đạt tiêu chuẩn theo quyết định về quy định tạm thời các chỉ tiêu kinh tế kỹ thuật đối với giống vật nuôi của Bộ Nông Nghiệp & Phát Triển Nông Thôn số 67/2002/QĐ-BNN. Chất lượng tinh dịch của hai giống lợn được chúng tôi nghiên cứu đạt tiêu chuẩn giống (TCVN, 1982) [24].
+ pH tinh dịch
pH của tinh dịch ảnh hưởng rất rõ đến đời sống và hoạt lực của tinh trùng. Kết quả nghiên cứu chúng tôi thu được thể hiện ở bảng 2.4.
Theo bảng 2.4 độ pH của giống lợn Landrace là 7,08±0,004 và DU75 là 7,1±0,004. Kết quả trên phù hợp với kết quả nghiên cứu của Nguyễn Văn Thuận và cs (1984) [23] pH dao động trong khoảng 7 - 7,42. Nếu so sánh pH của hai