2. Nguyễn Thị Lệ Thu 1106
3.2. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.2.1 Sơ đồ nghiên cứu tổng quát
3.2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu
3.2.2.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát sự ảnh hƣởng của thành phần dinh dƣỡng đến sinh trƣởng và phát triển của hệ sợi nấm Linh Chi Đen trên môi trƣờng thạch
Mục đích thí nghiệm
Xác định thành phần môi trƣờng thạch thích hợp cho sự sinh trƣởng và phát triển của hệ sợi nấm Linh Chi Đen.
Cách tiến hành
Hệ sợi nấm Linh Chi Đen sau quá trình phân lập đƣợc cấy sang môi trƣờng thạch. Môi trƣờng thạch xây dựng trên nền tảng môi trƣờng PSA bổ sung thêm các nguồn dinh dƣỡng khác nhau nhƣ bảng 3.2. Môi trƣờng sau khi pha chế đƣợc hấp khử trùng ở 1210
C trong vòng 25 phút. Môi trƣờng tiếp tục đƣợc chuyển sang đĩa petri vô trùng, để nguội, cấy giống và ủ ở điều kiện phòng thí nghiệm.
Bảng 3.2 Khảo sát sự ảnh hƣởng của thành phần dinh dƣỡng đến sinh trƣởng và phát triển của hệ sợi nấm
Linh Chi Đen trên môi trƣờng thạch
Nghiệm thức Thành phần
NT 1 PSA
NT 2 PSA + 10% nƣớc chiết giá NT 3 PSA + 10% nƣớc dừa
NT 4 PSA + Na2HPO4 2g + Mg.SO4.7H2O 0.5g + Pepton 2g NT 5 PSA + 10% nƣớc chiết cà rốt
Thí nghiệm đƣợc bố trí ngẫu nhiên với 5 nghiệm thức trong đó có 1 nghiệm thức đối chứng, mỗi nghiệm thức 10 ống nghiệm với 3 lần lặp lại.
Chỉ tiêu theo dõi
Chiều dài tơ lan của nấm (cm) định kỳ hai ngày một lần. Màu sắc và độ dày của tơ.
3.2.2.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát sự ảnh hƣởng của thành phần dinh dƣỡng đến sinh trƣởng và phát triển của hệ sợi nấm Linh Chi Đen trên môi trƣờng hạt
Mục đích thí nghiệm
Xác định thành phần môi trƣờng môi trƣờng thích hợp cho sự sinh trƣởng và phát triển của hệ sợi nấm Linh Chi Đen.
Cách tiến hành
Phối trộn môi trƣờng theo các nghiệm thức thí nghiệm (bảng 3.3) sao đó điều chỉnh độ ẩm đạt khoảng 60%, cho môi trƣờng vào khoảng 2/3 chiều dài ống nghiệm đƣờng kính 1.5cm, dài 18cm, hấp khử trùng 121oC trong 60 phút, để nguội và cấy giống. Tiến hành theo dõi và đo độ lan sâu của sợi nấm theo định kỳ 3 ngày một lần.
Bảng 3.3 Khảo sát sự ảnh hƣởng của thành phần dinh dƣỡng đến sinh trƣởng và phát triển của hệ sợi nấm Linh Chi Đen trên môi trƣờng hạt
Nghiệm thức Thành phần
NT 1 Lúa 100%
NT 2 Lúa 95% Cám ngô 5%
NT 3 Lúa 98% Cám ngô 2%
Thí nghiệm đƣợc bố trí ngẫu nhiên với 5 nghiệm thức trong đó có 1 nghiệm thức đối chứng, mỗi nghiệm thức 10 ống nghiệm với 3 lần lặp lại.
Chỉ tiêu theo dõi
Chiều dài tơ lan của nấm (cm). Màu sắc và độ dày sợi tơ.
3.2.2.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát sự ảnh hƣởng của thành phần môi trƣờng giá môi đến sự sinh trƣởng và phát triển của nấm Linh Chi Đen
Mục đích thí nghiệm
Xác định đƣợc môi trƣờng tối ƣu trong quá trình sinh trƣởng và phát triễn của quả thể nấm Linh Chi Đen.
Cách tiến hành
Mạc cƣa cao su đƣợc ủ với vôi 1% trong 3 ngày, cùi bắp đƣợc đập vụn thành hạt có kích thƣớc khoảng 1cm3, ngâm nƣớc vôi 1% trong 8 giờ sau đó vớt ra và ủ trong 7 ngày. Sau đó phối trộn theo từng nghiệm thức nhƣ bảng 3.4 cùng với các thành phần (cám gạo 5%, cám ngô 5%, NPK (16 - 16 – 8) 0.5%, vôi 1%), điều chỉnh độ ẩm đến 65% và đóng vào các bịch PE, hấp thanh trùng bằng hơi nƣớc nóng 1000 C trong 12 giờ.
Bảng 3.4: Khảo sát sự ảnh hƣởng của nguồn dinh dƣỡng đến sự sinh trƣởng và phát triển của nấm Linh Chi Đen trên môi trƣờng giá môi
Nghiệm thức Lõi bắp đập vụn Mùn cƣa
NT 1 0 % 100%
NT 2 25 % 75 %
NT 3 50% 50 %
NT 4 75 % 25 %
NT 5 100 % 0 %
Tốc độ lan tơ của hệ sợi tơ nấm trên cơ chất trồng nấm (cm) Màu sắc và độ dày của hệ sợi nấm.
3.2.3 Phƣơng pháp phân tích kết quả thí nghiệm
Tất cả thí nghiệm đƣợc thực hiện 03 lần lặp lại và đƣợc xử lý bằng phần mềm IBM SPSS statistics 2.0.
CHƢƠNG 4. KẾT QUẢ - THẢO LUẬN
4.1 Sự ảnh hƣởng của thành phần dinh dƣỡng đến sinh trƣởng và phát triển của hệ sợi nấm Linh Chi Đen trên môi trƣờng thạch của hệ sợi nấm Linh Chi Đen trên môi trƣờng thạch
Trên môi trƣờng thạch, hệ sợi nấm Linh Chi Đen phát triển dƣới dạng hình rễ khá sớm với tốc độ nhanh dần. Trong quá trình theo dõi sự sinh trƣởng của hệ sợi nấm Linh Chi Đen, chúng tôi nhận thấy trong 2 ngày đầu hệ sợi tăng trƣởng chậm, nhƣng sau đó hệ sợi tăng trƣởng nhanh dần. Trên các môi trƣờng dinh dƣỡng khác nhau, tốc độ tăng trƣởng của sợi nấm Linh Chi Đen khác nhau, kết quả đƣợc thể hiện qua bảng 4.1.
Bảng 4.1 Chiều dài trung bình tơ lan trên các môi trƣờng thạch thí nghiệm
Nghiệm thức
Chiều dài tơ lan (cm)
2 ngày 4 ngày 5 ngày
NT 1 0.307 e 1.453 e 2.29 e
NT 2 0.45 c 2.062 c 3.05 c
NT 3 0.44 d 1.989 d 2.78 d
NT 4 0.59 a 2.542 a 3.5 a
NT 5 0.4 b 1.822 b 2.643 b
Ghi chú: các ký tự a,b,c,… trong bảng thể hiện sự khác biệt rất có ý nghĩa với độ tin cậy 95%.
NT 1: PSA
NT2: PSA + 10% nước chiết giá
NT 4: PSA + Na2HPO4 2g + Mg.SO4.7H2O 0.5g + Pepton 2g NT 5: PSA + 10% nước chiết cà rốt.
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4
2 ngày 4 ngày 5 ngày
cm
Thời gian
NT 1 NT 2 NT 3 NT 4 NT 5
Đồ thị 4.1 Chiều dài trung bình tơ lan của tơ nấm Linh Chi Đen
C h iề u dài tơ lan
Hình 4.1 Tơ nấm Linh Chi Đen lan trên các môi trƣờng thạch
Kết quả thí nghiệm ở bảng 4.1 và đồ thị 4.1 cho thấy sự sinh trƣởng và phát triển của hệ sợi nấm khác nhau ở từng nghiệm thức. Trong đó, NT4 (PSA + Na2HPO4 2g + Mg.SO4.7H2O 0.5g + Pepton 2g) có hệ sợi nấm sinh trƣởng và phát triển nhanh nhất (hình 4.1), tơ nấm trung bình đạt đƣợc sau 5 ngày là 3.5cm, tơ nấm dày, có màu trắng, dày. Ở NT1 (PSA) hệ sợi tơ nấm sinh trƣởng và phát triển chậm nhất, chỉ lan đƣợc 2.29cm.
Nguyên nhân của vấn đề này là do NT4 trong thành phần môi trƣờng có bổ sung thêm các chất Na2HPO4 2g + Mg.SO4.7H2O 0.5g. Những ion khoáng này đƣợc hệ sợi tơ nấm hấp thu, kích thích tế bào sinh tổng hợp các enzyme và các chất cần thiết, các hợp chất hữu cơ quan trọng cho sự sinh trƣởng và phát triển của hệ sợi nấm. Ngoài ra, tốc độ lan tơ ở NT2 (PSA + 10% nƣớc dừa), NT3 (PSA + 10% nƣớc chiết giá), NT5 (PSA + 10% nƣớc chiết cà rốt) chậm hơn NT4 vì hệ sợi nấm Linh Chi Đen hấp thu nhiều ion khoáng hơn các thành phần khác. Tuy nhiên, tốc độ lan tơ ở những nghiệm thức trên nhanh hơn NT1 vì ở NT2 có bổ sung nƣớc dừa, NT3 bổ sung thêm nƣớc chiết giá, NT5
bổ sung thêm nƣớc chiết cà rốt, nhờ đó, cung cấp thêm nhiều acid amin hay các vitamine, các chất khoáng khác giúp sợi nấm phát triển tốt hơn.
Nhƣ vậy, môi trƣờng có công thức: PSA + Na2HPO4 2g + MgSO4.7H2O 0.5g + Pepton 2g là môi trƣờng thạch thích hợp cho sự sinh trƣởng và phát triển của hệ sợi tơ nấm Linh Chi Đen.
4.2 Sự ảnh hƣởng của thành phần dinh dƣỡng đến sinh trƣởng và phát triển của hệ sợi nấm Linh Chi Đen trên môi trƣờng hạt của hệ sợi nấm Linh Chi Đen trên môi trƣờng hạt
Trên môi trƣờng nhân giống cấp 2, sau khi cấy giống, hệ sợi nấm Linh Chi Đen lan sâu vào khối cơ chất trong ống nghiệm với tốc độ tƣơng đối chậm nhƣng đồng đều mọi phía. Ban đầu hệ sợi mảnh, thƣa, màu trắng, sau đó hệ sợi lan đều, mật độ tăng dần theo thời gian, hệ sợi bện kết dày hơn. Sau 11 ngày hệ sợi lan hết khối cơ chất trong ống nghiệm. Chiều dài tơ lan của hệ sợi đo đƣợc trong các ống nghiệm chứa khối cơ chất có sự khác nhau và đƣợc thể hiện cụ thể trong bảng 4.2.
Bảng 4.2 Chiều dài lan sâu của hệ sợi nấm Amauroderma Subresinosum
trên môi trƣờng hạt thí nghiệm Nghiệm
thức
Chiều dài tơ lan (cm)
Ngày 5 Ngày 7 Ngày 9 Ngày 11
NT1 2.4 e 4.08 e 6.7 e 9.65e
NT2 2.6 c 4.5 c 7.43 c 10.84c
NT3 2.5 d 4.25 d 6.96 d 10.05 d
NT4 2.8 a 5.1 a 8.6 a 12.7 a
NT5 2.6 b 4.74 b 8.01 b 11.81 b
Ghi chú:các ký tự a,b,c,… trong bảng thể hiện sự khác biệt rất có ý nghĩa với độ tin cậy 95%.
NT2: lúa 95% + cám ngô 5% NT3: lúa 98% + cám ngô 2% NT4: lúa 95% + cám gạo 5% NT5: lúa 98% + cám gạo 2% 0 2 4 6 8 10 12 14
Ngày 5 Ngày 7 Ngày 9 Ngày 11
cm
Thời gian
NT1 NT2 NT3 NT4 NT5
Đồ thị 4.2 Tốc độ lan tơ của tơ nấm Linh Chi Đen trên môi trƣờng hạt
Kết quả thí nghiệm ở bảng 4.2 và đồ thị 4.2 cho thấy tốc độ lan tơ hệ sợi nấm ở các nghiệm thức khác nhau. Tốc độ lan tơ ở NT4 (lúa 95% + cám gạo 5%) nhanh nhất, chiều dài đạt đƣợc là 12.7 cm sau 11 ngày. Ngƣợc lại, NT1 (lúa 100%) có tốc độ lan chậm nhất, chiều dài lan tơ trung bình chỉ đạt 9.65 cm. Vì trong môi trƣờng NT4 có bổ sung thêm 5% cám gạo, cung cấp thêm vitamin và các nguồn dƣỡng chất thiết yếu giúp tơ nấm phát triển hơn.
Bên cạnh đó, ở NT5 (lúa 98% + cám gạo 2%), NT2 (lúa 95% + cám ngô 5%) và NT3 (lúa 98% + cám ngô 2%) có bổ sung thêm cám gạo, cám ngô nhƣng với nồng độ chƣa thích hợp bằng NT4 nên có tốc độ lan tơ vẫn nhanh hơn NT1 nhƣng chậm hơn NT4
C h iề u dài tơ lan
(bảng 4.2 và hình 4.2).
Hình 4.2 Tơ nấm Linh Chi Đen trên các môi trƣờng hạt
Nhƣ vậy nguồn dinh dƣỡng bổ sung từ bên ngoài rất quan trọng cho sự sinh trƣởng và phát triển của tơ nấm Linh Chi Đen. Trong đó, môi trƣờng meo hạt với các thành phần 95% lúa + 5% cám gạo là thích hợp cho sự sinh trƣởng và phát triển của nấm Linh Chi Đen.
4.3 Kết quả thí nghiệm khảo sát sự ảnh hƣởng của nguồn dinh dƣỡng đến sự sinh trƣởng và phát triển của nấm Linh Chi Đen trên môi trƣờng giá môi sinh trƣởng và phát triển của nấm Linh Chi Đen trên môi trƣờng giá môi
Đối với nấm Linh Chi Đen, thời gian nuôi tơ kéo dài khoảng 28 ngày. Trên môi trƣờng cơ chất, hệ sợi nấm Linh Chi lan sâu trong khối cơ chất trong túi với tốc độ tƣơng đối chậm ở giai đoạn đầu nhƣng có chiều hƣớng nhanh hơn và lan đều về mọi phía ở giai đoạn sau. Hệ sợi nấm lúc ban đầu có màu trắng hơi nhạt về sau phát triển trắng đậm dày hơn. Mật độ hệ sợi tăng dần tỷ lệ thuận với thời gian cho đến khi
nấm bắt đầu ra quả thể. Sự khác nhau về tốc độ lan tơ hệ sợi nấm thể hiện ở bảng 4.3.
Bảng 4.3 Ảnh hƣởng của nguồn dinh dƣỡng đến sự sinh trƣởng và phát triển của nấm Linh Chi Đen trên các
môi trƣờng giá môi
Nghiệm thức Chiều dài tơ lan (cm)
7 ngày 14 ngày 21 ngày 28 ngày
NT1 1.06e 5.6c 9.5c 13c
NT 2 1.1 d 5.8b 10b 15b
NT 3 1.3a 6.62a 12a 19a
NT 4 1.23c 5.4 d 8.9 d 11.9 d
NT 5 1.25b 5.35e 8.5e 11e
Ghi chú: các ký tự a,b,c,… trong bảng thể hiện sự khác biệt rất có ý nghĩa với độ tin cậy 95%. NT1: 100% mùn cưa NT2: 25% lõi bắp đập vụn + 75% mùn cưa NT3: 50% lõi bắp đập vụn + 50% mùn cưa NT4: 75% lõi bắp đập vụn + 25% mùn cưa NT5: 100% lõi bắp đập vụn
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
7 ngày 14 ngày 21 ngày 28 ngày
cm
Thời gian
NT 1 NT 2 NT 3 NT 4 NT 5
Đồ thị 4.3 Chiều dài tơ lan của tơ nấm Linh Chi Đen trên các môi trƣờng giá môi
Kết quả thí nghiệm cho thấy tốc độ lan tơ hệ sợi nấm Linh Chi Đen ở các nghiệm thức có sự khác nhau. Tốc độ lan tơ hệ sợi nấm Linh Chi Đen ở NT3 (50% lõi bắp đập vụn + 50% mùn cƣa) là nhanh nhất chiều dài lan tơ đạt đến 19 cm sau 28 ngày và ở NT5 (100% lõi bắp đập vụn) là chậm nhất chiều dài lan tơ trung bình chỉ đạt 11cm. Nguyên nhân của vấn đề này là vì ở NT3 có tỉ lệ phối trộn giữa mùn cƣa và lõi bắp phù hợp hơn các nghiệm thức thí nghiệm khác, qua đó, cung cấp nguồn dinh dƣỡng thích hợp, đồng thời, độ thoáng khí, độ ẩm trong nguồn cơ chất môi trƣờng cũng phù hợp cho sự sinh trƣởng phát triển của hệ sợi tơ nấm, giúp hệ sợi phát triển tốt hơn.
Ngoài ra, NT2 (25% lõi bắp đập vụn + 75% mùn cƣa), NT1 (100% mùn cƣa) và NT4 (75% lõi bắp đập vụn + 25% mùn cƣa) có tỉ lệ phối trộn giữa mùn cƣa và lõi bắp phù hợp NT5 nhƣng kém hơn NT3 nên chiều dài tơ lan nhanh hơn NT5 và chậm hơn NT3.
C h iề u dài tơ lan
Nhƣ vậy, nguồn dinh dƣỡng, độ ẩm, sự thoáng khí rất quan trọng để kích thích cho sự trƣởng và phát triển của hệ sợi nấm, tuy nhiên giữa chúng cần phải có sự kết hợp về tỷ lệ, nồng độ một cách phù hợp (tùy theo đặc điểm từng loài nấm) thì nấm mới sinh trƣởng tốt. Kết quả thí nghiệm cho thấy NT3 (50% lõi bắp đập vụn + 50% mùn cƣa) là tốt nhất cho sự sinh trƣởng và phát triển của hệ sợi nấm Linh Chi Đen.
Hình 4.3 Hệ sợi nấm Linh Chi Đen trên các môi trƣờng giá môi
Sau khi tơ nấm đã lan kín bịch cơ chất, nhóm nghiên cứu bắt đầu nới lỏng nút bông, chuyển bịch nấm vào khu vực chăm sóc tạo quả thể, duy trì điều kiện ánh sáng yếu, nhiệt độ thích hợp là 25-300C, độ ẩm 80-90%. Tiến hành phun sƣơng vào bịch nấm (trời hanh khô, phun 5-6 lần/ngày, trời dâm mát phun 2-3 lần/ngày), sau 17 ngày (NT3) hay 19 - 21 ngày (các NT còn lại) sau khi tháo nút bông mầm quả thể bắt đầu hình thành và đùn ra khỏi cổ bịch. Lúc đầu mầm quả thể nhỏ, tròn, trắng 15-20 ngày sau khi mầm quả thể hình thành thì bắt đầu có sự phát triển tạo quả thể.
Hình 4.4 Quá trình phát triển quả thể của nấm Linh Chi Đen
Nhƣ vậy, sau thời gian 60 – 65 ngày trồng và chăm sóc, nhóm thực hiện thu đƣợc quả thể nấm Linh Chi Đen có đặc điểm nhƣ trong bảng 4.4. Trong đó, quả thể nấm thu đƣợc ở NT3 vẫn tiếp tục cho kết quả tốt hơn so với các nghiệm thức còn lại (trọng lƣợng đạt 12.476 gam nấm khô, đƣờng kính đạt 6.5 cm và độ dày đạt 1.4cm). Nguyên nhân có
hơn, qua đó, hấp thu chuyển hóa dinh dƣỡng tốt hơn và phát triển quả thể lớn hơn các nghiệm thức khác.
Bảng 4.4 Trọng lƣợng và kích thƣớc trung bình của quả thể nấm Linh Chi Đen trên các môi trƣờng giá môi
Nghiệm thức Trọng lƣợng nấm khô (g) Đƣờng kính (cm) Độ dày(cm) NT1 6.7 6.2 1.0 NT2 9.3 5.5 1.2 NT3 12.5 6.5 1.4 NT4 4.5 5.0 1.0 NT5 3.1 4.5 0.9
Đồ thị 4.4 Trọng lƣợng trung bình của quả thể nấm Linh Chi Đen trên các nghiệm thức thí nghiệm
Đồ thị 4.5 Đƣờng kính trung bình của quả thể nấm Linh Chi Đen trên các nghiệm thức thí nghiệm
Đồ thị 4.6 Độ dày trung bình của quả thể nấm Linh Chi Đen trên các nghiệm thức thí nghiệm
Hình 4.5 Cân trọng lƣợng khô nấm Linh Chi Đen
Hình 4.6. Quả thể nấm Linh Chi Đen
Tóm lại, môi trƣờng có tỉ lệ phối trộn cơ chất (50% lõi bắp đập vụn + 50% mùn cƣa) là môi trƣờng thích hợp cho nấm Linh Chi Đen sinh trƣởng và phát triển.
NT3 NT2 NT1
CHƢƠNG 5. KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ
5.1 KẾT LUẬN
Sau thời gian thực hiện đề tài, Nhóm nghiên cứu xin rút ra các kết luận nhƣ sau: - Môi trƣờng nhân giống cấp 1 với các thành phần Potato Sugar Agar bổ sung thêm 2g Na2HPO4, 0.5g MgSO4.7H2O, 2g peptone là thích hợp cho sự sinh trƣởng và phát triển của hệ sợi nấm Linh Chi Đen.
- Môi trƣờng hạt với thành phần 95% lúa bổ sung 5% cám gạo là môi trƣờng nhân giống cấp 2 thích hợp cho sự sinh trƣởng và phát triển của hệ sợi tơ nấm Linh Chi Đen.