Tiến hành khảo sát sự phụ thuộc tuyến tính giữa nồng độ với diện tích pic của dẫn chất tobramycin (tính theo lợng tobramycin đa vào) trên chất chuẩn tobramycin.
Cách pha: Cân chính xác khoảng 375 mg tobramycin chuẩn cho vào bình định mức 50,0 ml. Hoà tan và pha loãng bằng nớc vừa đủ đến vạch. Dung dịch
thu đợc có nồng độ 7,5 mg/ml. Tiến hành pha loãng theo bảng 4 để thu đợc các dung dịch có nồng độ lần lợt là 2,4; 2,7; 3,0; 3,3; 3,6 mg/ml. Lọc qua màng lọc 0,45àm.
Bảng 4 : Cách pha các dung dịch để khảo sát khoảng tuyến tính
Tiêm lần lợt 30 àl các dung dịch đã chuẩn bị vào hệ thống sắc ký. Tiến hành sắc ký theo điều kiện đã chọn. Ghi các gía trị diện tích pic đo đợc ứng với các nồng độ của các dung dịch trên. Kết quả khảo sát khoảng tuyến tính đợc trình bày ở bảng 5.
Bảng 5 : Kết quả khảo sát khoảng tuyến tính
Từ các kết quả thu đợc ở bảng trên chúng tôi thiết lập mối tơng quan giữa diện tích pic thu đợc trên sắc ký đồ và nồng độ của dung dịch (tính theo lợng tobramycin đa vào).
Phơng trình hồi quy biểu thị mối tơng quan này là: y= 3,9878 x + 0,039 với hệ số tơng quan r= 0,9999
Độ lệch chuẩn y_intercept: Sb= 0,064
Khoảng tin cậy 95% của y_intercept: 0,039 0,204± hay -0,165 ≤ y_intercept ≤ 0,243 chứa gốc toạ độ.
Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc tuyến tính giữa nồng độ dung dịch và diện tích pic của tobramycin đợc ghi ở hình 2.
Bình 1 2 3 4 5
Tobramycin (mg) 8,0 9,0 10,0 11,0 12,0 Nớc cất vừa đủ (ml) 25 25 25 25 25 Nồng độ (mg/ml) 2,4 2,7 3,0 3,3 3,6
Nồng độ (mg/ml) 2,4 2,7 3,0 3,3 3,6 Diện tích pic (mAU.min) 9,6023 10.7959 12,0322 13,1989 14,3825
Hình 2 : Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc tuyến tính giữa nồng độ dung dịch và diện tích pic của tobramycin
Từ kết quả thu đợc ở hình 2 cho thấy:
• Tất cả các giá trị thu đợc nằm trên đờng hồi quy hoặc phân bố đồng đều cả 2 phía của đờng hồi quy.
• Hệ số tơng quan r= 0,9999.
• Khoảng tin cậy của y_intercept chứa gốc toạ độ. Nhận xét:
Phơng pháp tuyến tính trong khoảng nồng độ khảo sát từ 2,4 đến 3,6 mg/ml (tính theo lợng tobramycin đa vào) hay tuyến tính trong khoảng nồng độ từ 80 % đến 120% nồng độ làm việc.