Phân lập và xác định yếu tố độc lực của vi khuẩn Escherichia coli gây tiêu chảy ở lợn con trước, sau cai sữa tại Hà Nam

Mục tiêu nghiên cứu

- Kết quả nghiờn cứu của ủề tài sẽ là cơ sở khoa học phục vụ cho cỏc nghiờn cứu tiếp theo, ủồng thời ủúng gúp thờm tư liệu tham khảo cho nghiờn cứu và giảng dạy, cho cán bộ thú y cơ sở và người chăn nuôi. - Kết quả nghiờn cứu phỏc ủồ ủiều trị bệnh tiờu chảy ở lợn con cú hiệu quả cao sẽ giúp cho thú y cơ sở, người chăn nuôi trong phòng trị bệnh, góp phần giảm thiệt hại và tăng thu nhập trong chăn nuôi lợn.

Một số hiểu biết chung về hội chứng tiêu chảy .1 Khái niệm về hội chứng tiêu chảy

Như vậy có thể thấy, có rất nhiều nguyên nhân gây tiêu chảy, nhưng theo một số nhà khoa học Việt Nam nghiên cứu về bệnh tiêu chảy ở lợn như Nguyễn Thị Nội (1985), Lê Văn Tạo (1993), Hồ Văn Nam và cs (1997) thì dù do nguyên nhân nào hậu quả cuối cùng cũng là quá trình nhiễm vi khuẩn kế phỏt làm viờm ruột, tiờu chảy nặng thờm, cú thể dẫn ủến chết hoặc viờm ruột tiêu chảy mãn tính. Nguyễn Ngọc Hải (2010) nghiên cứu, chế tạo auto vacxin từ 7 chủng E.coli phõn lập từ cỏc mẫu phõn lợn con tiờu chảy cú triệu chứng ủiển hỡnh rừ nhất, ủể phũng tiờu chảy cho heo con theo mẹ; ủó kết luận vacxin chuồng thực nghiệm tạo ủược ủỏp ứng miễn dịch tốt, hiệu quả phũng ngừa tiờu chảy do E.coli tương ủương với vacxin phũng bệnh E.coli của Mỹ.

Một số nghiên cứu về vi khuẩn E.coli gây bệnh tiêu chảy

* Yếu tố xõm nhập của vi khuẩn E.coli: Là một khỏi niệm dựng ủể chỉ quỏ trỡnh chưa ủược xỏc ủịnh một cỏch rừ ràng mà nhờ ủú vi khuẩn E.coli qua ủược hàng rào bảo vệ của lớp màng nhầy (mucosa) trờn bề mặt niờm mạc ủể xõm nhập vào tế bào biểu mụ (Epithel), ủồng thời sinh sản và phỏt triển trong lớp tế bào này. 23 Theo ý kiến của nhiều tác giả, mặc dù các vi khuẩn E.coli có nhiều loại khỏng nguyờn, trong ủú, cú loại tạo miễn dịch phũng vệ cho vật chủ, cú loại khụng tạo miễn dịch phũng vệ cho vật chủ nhưng ủều tham gia vào quỏ trỡnh gõy bệnh bằng cỏch tạo ủiều kiện cho vi khuẩn xõm nhập vào tế bào vật chủ và tham gia vào quá trình kháng lại các yếu tố phòng vệ tự nhiên của vật chủ.

Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước về vai trò của vi khuẩn E.coli trong hội chứng tiêu chảy

Nghiờn cứu ủặc tớnh sinh học của vi khuẩn E.coli trong bệnh phõn trắng lợn con ở một số tỉnh phía Bắc, ðặng Xuân Bình và cs (2008a) thông báo vi khuẩn E.coli phõn lập ủược ở hầu hết cỏc mẫu bệnh phẩm lợn con mắc bệnh phân trắng (chiếm 84,7%). Theo Smith H.W và cs (1967) cho biết nhiều chủng vi khuẩn E.coli có khả năng sản sinh ra chất kháng khuẩn có tác dụng ức chế hoặc tiêu diệt các loại vi khuẩn khỏc, gọi là ColicinV. Vỡ vậy, yếu tố này cũng ủược coi là một trong cỏc yếu tố ủộc lực của vi khuẩn E.coli gõy bệnh; ủồng thời tỏc giả cũng thụng bỏo cú hai loại ủộc tố là thành phần chớnh của Enterotoxin ủược tỡm thấy ở cỏc vi khuẩn E.coli gõy bệnh.

Theo Fairbrother.J.M (1992) cỏc yếu tố gõy bệnh người ta ủó phõn loại vi khuẩn E.coli thành các loại sau: Enterotoxigenic E.coli (ETEC), Enteropathgenic E.coli (EPEC), Adherence Enteropathogenic E.coli (AEEC) và Verotoxingenic E.coli (VTEC). Vi khuẩn này gây bệnh trên người với các triệu chứng cấp tính như: Tiêu chảy cấp, xuất huyết ủường tiờu húa, phõn cú lẫn mỏu, gõy hội chứng ure huyết (HUS), trường hợp nghiêm trọng có thể gây tử vong (Riley và cs, 1983).

Nội dung nghiên cứu

Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……….

Phương pháp nghiên cứu

- Cỏc loại mụi trường dựng cho phõn lập, nuụi cấy vi khuẩn ủường ruột bao gồm: Thạch máu, thạch MacConkey, thạch ISI, thạch DHL, thạch Brilliant Green, nước thịt BHI, nước thịt thường, nước thịt pepton, thạch Simmons citrate. Theo Nguyễn Như Thanh (2001) nguy cơ tương ủối, biểu thị bằng cỏc nguy cơ so sỏnh và ủược ủịnh nghĩa là nguy cơ phỏt triển một bệnh trong số cỏc cỏ thể cú cảm nhiễm (cú tiếp xỳc) với yếu tố nguy cơ nghi ngờ, ủược so sỏnh với nguy cơ phỏt triển bệnh ủú, trong số cỏc cỏ thể khụng cảm nhiễm. Nhỏ lờn phiến kớnh sạch, mỗi ủầu một giọt nước muối sinh lý, dựng que cấy vụ trựng, lấy khuẩn lạc E.coli cần xỏc ủịnh ủó ủược nuụi trờn mụi trường thạch mỏu, trộn ủều với 2 giọt nước muối sinh lý ủể tạo thành huyễn dịch vi khuẩn.

2mM MgCl2; 200àM dNTP mỗi loại (dATP, dCTP,dGTP and dCTP) (Life Technologies), 1àl primer (3,2 àM/àl); 0,25 U Taq DNA polymerase (Advanced Biotechnologies), DNA của chủng vi khuẩn cần kiểm tra (lấy trực tiếp từ khuẩn lạc trên môi trường thạch máu) và nước cất (Gibco, BRL) vừa ủủ 25àl. - Khả năng mẫn cảm với kháng sinh của các chủng vi khuẩn E.coli phõn lập ủược kiểm tra bằng phương phỏp khuếch tỏn trờn ủĩa thạch và ủỏnh giỏ kết quả theo Hội ủồng quốc gia Hoa Kỳ về cỏc tiờu chuẩn lõm sàng phũng thí nghiệm (NCCLS)(1999).

Kết quả nghiờn cứu một số ủặc ủiểm dịch tễ hội chứng tiờu chảy ở lợn con trước và sau cai sữa tại tỉnh Hà Nam

Tuy nhiờn, ủể cú thể ủỏnh giỏ chớnh xỏc cỏc nguyờn nhõn của sự khỏc nhau này, chỳng tụi cần cú những ủỏnh giỏ toàn diện hơn về ảnh hưởng của một số yếu tố khác nữa như mùa vụ, chuồng trại, phương thức chăn nuôi và lứa tuổi lợn ủến bệnh tiờu chảy, từ ủú mới ủưa ra ủược cỏc biện phỏp phũng chống cú hiệu quả. Qua ủiều tra cho thấy tại một số huyện của Hà Nam cỏc hộ chăn nuụi thường cai sữa cho lợn con từ 28 - 30 ngày tuổi, ở giai ủoạn này lợn con cú sự thay ủổi thức ăn, từ dễ tiờu húa sang dạng khú tiờu húa hơn, cựng với việc bị tỏch mẹ, chuyển ủàn, ghộp ủàn nờn lợn con chưa kịp thớch nghi, dễ bị stress từ những thay ủổi về mụi trường sống này, do ủú số lượng lợn sau cai sữa cú tỷ lệ mắc tiêu chảy cao hơn lợn trước cai sữa. - 51,2% cỏc chủng E.coli phõn lập ủược cú khả năng gõy dung huyết trờn mụi trường thạch mỏu.Trước ủõy, khả năng dung huyết của của vi khuẩn E.coli ủược coi là một yếu tố gõy bệnh quan trọng của vi khuẩn này, nhưng nhiều nghiờn cứu gần ủõy ủều ủó thống nhất rằng dung huyết chỉ ủược xem như một ủặc tớnh sinh hoỏ học của vi khuẩn E.coli.

So sỏnh kết quả giỏm ủịnh ủặc tớnh sinh hoỏ của 125 chủng vi khuẩn E.coli phõn lập ủược với bảng sinh hoỏ chuẩn của loại vi khuẩn này thỡ thấy cỏc chủng vi khuẩn E.coli phõn lập ủược từ lợn con tiờu chảy tại tỉnh Hà Nam ủều cú cỏc ủặc ủiểm chung, rất ủiển hỡnh của vi khuẩn E.coli như ủó ủược cỏc tài liệu trong và ngoài nước mô tả. Trong cỏc chủng vi khuẩn E.coli ủó ủược xỏc ủịnh serotype khỏng nguyờn O, chỳng tụi chọn ra 22 chủng với cỏc ủặc ủiểm ủiển hỡnh ủại diện cho cỏc serotype, cỏc ủịa ủiểm lấy mẫu ủể xỏc ủịnh cỏc yếu tố gõy bệnh bao gồm: Cỏc yếu tố bỏm dớnh F4, F5, F6, F18 và ủộc tố chịu nhiệt STa, STb, ủộc tố khụng chịu nhiệt LT và ủộc tố verotoxin VT2e ủó ủược xỏc ủịnh bằng phản ứng PCR. Từ kết quả nghiờn cứu về ủặc tớnh, hỡnh thỏi, nuụi cấy, tớnh chất sinh vật húa học của cỏc chủng vi khuẩn E.coli phõn lập ủược từ các mẫu bệnh phẩm lợn con dưới 2 tháng tuổi mắc bệnh tiêu chảy, chúng tụi chọn 10 chủng vi khuẩn E.coli cú cỏc ủặc tớnh sinh vật, húa học ủiển hỡnh cho cỏc serotype và cỏc yếu tố gõy bệnh ủể kiểm tra ủộc lực qua chuột bạch.

Vì vậy, một số loại kháng sinh có tác dụng mạnh như Ceftiofur, Amikacin và Apramycin là những khỏng sinh mới, chưa ủược phổ biến ở thị trường Việt Nam, nờn vẫn cú tỷ lệ mẫn cảm rất cao với cỏc chủng vi khuẩn ủược thử; cũn một số loại khỏng sinh khỏc hiện ủang sử dụng trong phũng và trị bệnh cho lợn thỡ cú tớnh mẫn cảm trung bỡnh hoặc thấp hoặc khỏng theo từng ủịa phương khỏc nhau.

Kết quả thử nghiệm phỏc ủồ ủiều trị bệnh tiờu chảy ở lợn con

Nguyờn nhõn của hiện tượng khỏng thuốc là do sử dụng khụng ủỳng kỹ thuật của con người và vì gen sản sinh yếu tố kháng kháng sinh nằm trong plasmind R (Resistance). Vỡ vậy cần phải có một chiến lược sử dụng thuốc kháng sinh trong chăn nuôi và thú y hợp lý ủể ngăn chặn kịp thời hiện tượng này vỡ nú ảnh hưởng trực tiếp tới con người và môi sinh. Enrofloxacin là kháng sinh thế hệ mới có tác dụng ngăn cản và tiêu diệt vi khuẩn Gram (+) và Gram (-), nhất là vi khuẩn ủường tiờu húa, nờn thuốc hiện nay vẫ ủang ủược sử dụng ủể ủiều trị bệnh tiờu chảy ủặc hiệu.

+ Loại trừ những sai sót trong môi trường nuôi dưỡng như loại bỏ các thức ăn kém phẩm chất (ôi, mốc,…), giảm thức ăn xanh chứa nhiều nước, chăm súc nuụi dưỡng tốt, loại bỏ cỏc thức ăn khụng tiờu húa ủược ủang lờn men trong ủường ruột. Như vậy, ủể ủiều trị bệnh tiờu chảy ở lợn con dưới 2 thỏng tuổi ủạt hiệu quả chúng ta dùng một số loại kháng sinh thế hệ mới như Enrofloxacin, theo phỏc ủồ III ủể ủiều trị bệnh tiờu chảy ở lợn con do vi khuẩn E.coli gõy ra.