Nghiên cứu mối quan hệ di truyền giữa các giống đậu xanh địa phương (Vigna radiata (L.) Wilczek) bằng kỹ thuật RAPD

Tỡnh hỡnh nghiờn cứu quan hệ di truyền ở cõy ủậu xanh sử dụng kỹ thuật RAPD

Kỹ thuật RAPD ủược sử dụng khỏ phổ biến trong phõn tớch và xỏc ủịnh mối quan hệ di truyền giữa các loài hay giữa các cá thể nhằm phục vụ công tác lai tạo, chọn giống hoặc phân loại thực vật. Chu Hoàng Mậu (2001) sử dụng cỏc mồi ngẫu nhiờn ủể nghiờn cứu sự ủa hỡnh DNA của cỏc dũng ủậu xanh ủột biến so với giống gốc [16]. Nguyễn Vũ Thanh Thanh ủó sử dụng kỹ thuật RAPD với 20 mồi ngẫu nhiờn, trong ủú cú 18 mồi thể hiện tớnh ủa hỡnh và kỹ thuật SSR với 10 mồi ngẫu nhiờn ủể nghiờn cứu sự ủa dạng di truyền của cỏc giống ủậu xanh cú khả năng chịu hạn khỏc nhau.

Betal và ủtg (2004) ủó sử dụng 14 giống ủậu xanh cựng 14 mồi ngẫu nhiờn ủể phõn tớch mối quan hệ di truyền nhờ kỹ thuật RAPD. Kết quả nghiên cứu của tác giả cũng chỉ ra rằng tính trạng năng suất cú mối liờn quan với ủặc ủiểm hỡnh thỏi như chiều cao cõy, kớch cỡ và màu sắc hạt [27]. Trong nghiờn cứu này, tỏc giả sử dụng 21 giống ủậu xanh với 34 mồi ngẫu nhiờn kết quả thu ủược tổng số 204 phõn ủoạn DNA ủược nhõn bản, trong ủú cú 75% phõn ủoạn thể hiện tớnh ủa hỡnh.

Sự tương ủồng di truyền nhận ủược trong nghiờn cứu này cú thể ủược sử dụng ủể chọn dũng bố mẹ phục vụ mục ủớch chọn giống [25]. * Ngoài ra, việc ứng dụng kỹ thuật RAPD ủể nghiờn cứu quan hệ di truyền cũng ủó ủược nhiều nhà khoa học khai thỏc cú hiệu quả trờn nhiều ủối tượng thực vật khỏc như: cà phờ, ngụ, chố, lạc, lỳa, cỏc cõy họ ủậu…. Kết quả ủó phõn nhúm ủược một số giống cú hàm lượng protein cao, sử dụng cho chương trỡnh nghiờn cứu nhằm mục ủớch nõng cao hàm lượng ủạm cỏc giống ủậu tương thớch nghi với ủiều kiện Chõu Âu [30].

Kết quả phõn tớch sản phẩm RAPD chỉ ra ủược một số băng ủặc hiệu tương ứng với cỏc mồi ngẫu nhiờn ủể phõn biệt một số giống trong nhóm nghiên cứu [44]. Năm 2008, Trương Quang Vinh và ủtg ủỏnh giỏ sự ủa hỡnh DNA của một số giống khoai tây nhập nội và của Việt Nam bằng kỹ thuật RAPD. Phổ biến nhất là dòng vi khuẩn có kiểu mẫu RAPD giống với hai chủng chuẩn typ huyết thanh Inaba và Ogawa ủó từng gây bệnh ở Việt Nam trước năm 2002.

Kết quả chỉ ra rằng, chủng Vibrio cholerae gây bệnh ở Việt Nam có quan hệ di truyền rất gần với các chủng gây ủại dịch tả 6 và 7 dựa trờn phõn tớch trỡnh tự nucleotide của hai gen housekeeping mã hoá cho hemolysin (hlyA) và malat dehydrogenaza (mdh) [18]. Nguyễn Thị Thanh Bỡnh và ủtg (2004) ủó phõn tớch tớnh ủa dạng di truyền của 8 giống tằm dâu nuôi ở Việt Nam bằng kỹ thuật RAPD với 5 mồi ngẫu nhiờn. Kết quả phõn tớch NTSYS-SIMQUAL cho thấy cỏc giống tằm nghiờn cứu cú mối tương ủồng di truyền trong khoảng 0,547 ủến 0,984 [3].

VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1.. Tách chiết DNA tổng số

Chỳng tụi tiến hành ủịnh lượng và kiểm tra ủộ tinh sạch của DNA tỏch chiết ủược bằng 2 phương phỏp. Sản phẩm ủiện di ủược nhuộm bằng dung dịch ethydium bromide, soi và chụp ảnh dưới ánh sáng cực tớm. Dựa vào hỡnh ảnh ủiện di cú thể ủỏnh giỏ nồng ủộ và ủộ tinh sạch của DNA trong mẫu thớ nghiệm ủó tỏch chiết.

Nguyên tắc: Dựa vào sự hấp thụ mạnh ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 260 nm của cỏc base purin và pyrimidin. Giỏ trị mật ủộ quang ở bước súng 260 nm (A260) của cỏc mẫu cho phộp xỏc ủịnh hàm lượng acid nucleic trong mẫu dựa vào mối tương quan: một ủơn vị A260 tương ứng với nồng ủộ 50 ng/àl cho dung dịch chứa DNA sợi ủụi. Trình tự nucleotide của 5 mồi sử dụng trong phân tích RAPD STT Tên mồi Trình tự nucleotide.

Nhuộm bản gel bằng ethydium bromide, rửa bằng nước, soi và chụp ảnh dưới ỏnh sỏng ủốn tia cực tớm. Dựa vào hỡnh ảnh ủiện di sản phẩm RAPD, sự xuất hiện cỏc băng ủiện di ủược ước lượng kớch thước và thống kờ cỏc băng ủiện di với từng mồi ở từng mẫu nghiờn cứu. Sự xuất hiện hay khụng xuất hiện cỏc băng ủiện di ủược tập hợp ủể phõn tớch số liệu theo nguyờn tắc: số 1- xuất hiện phõn ủoạn DNA và số 0- khụng xuất hiện phõn ủoạn DNA.

Cỏc số liệu này ủược xử lý trờn mỏy tớnh theo phần mềm NTSYS pc version 2.0 (USA, 1998) ủể xỏc ủịnh quan hệ di truyền của cỏc giống ủậu xanh.