MỤC LỤC
Nghiên cứu này tập trung chủ yếu vào protein NS1 bởi lẽ ngày càng nhiều bằng chứng chỉ ra vai trò của protein này trong rối loạn sinh lí bệnh của sốt suất huyết Dengue từ đó có thể làm cơ sở cho việc sử dụng NS1 tái tổ hợp gộp 4 týp làm kháng nguyên chẩn đoán bệnh Sốt xuất huyết Dengue. Trong quá trình nhiễm vi rút Dengue, protein NS1 được tiết mạnh vào huyết thanh của người bệnh, nồng độ NS1 tương quan với mức độ nghiêm trọng của bệnh và góp phần vào cơ chế bệnh sinh của SXHD ở vật chủ. Bằng các công cụ tin sinh giúp tính toán và dự đoán cấu trúc 3D, nghiên cứu này xây dựng một mô hình chung có các điểm nhận biết epitope có khả năng liên kết với kháng thể IgM/IgG kháng lại vi rút DENV cho cả 4 týp (DENV 1 -4).
Kết quả giả định cho thấy, vùng biến đổi của 2 kháng thể trên được trích xuất từ phức hợp kháng nguyên-kháng thể sử dụng PDB-tool và ProABC-2 đều có khả năng liên kết với vùng epiotope của kháng nguyên thiết kế. Kết quả này cho thấy đã lựa chọn được vùng peptide khá tốt có khả năng làm kháng nguyên cao và có kháng thể đối ứng để làm cơ sở cho tổng hợp đoạn DNA cho protein NS1 tái tổ hợp gộp 4 týp được thành công. Ngoài ra nghiên cứu này sử dụng các thang điểm khác bao gồm Dự đoán cấu trúc beta turn của Chou và Fasman, Dự đoán khả năng tiếp cận bề mặt của Emini, Dự đoán tính linh động của Karplis và Schulz, dự đoán tính kháng nguyên của Kolaskar và Tongaonkar, và Dự đoán tính ưa nước của Parker.
Trong nghiên cứu của Das và CS năm 2019, nhóm nghiên cứu đã mô tả một phương pháp đơn giản và hiệu quả để biểu hiện NS1 ở E.coli, phương pháp này có khả năng được sử dụng để phát triển các kháng thể đơn dòng và đặc hiệu kép cho chẩn đoán điểm chăm sóc. Cho đến nay, realtime RT-PCR đã được công nhận là tiêu chuẩn vàng trong chẩn đoán và định týp huyết thanh DENV, tuy nhiên vẫn có một số nhược điểm, bao gồm cả kết quả âm tính giả và dương tính giả [117, 158- 161] và đặc biệt là cần trang bị máy móc dắt tiền cũng như phòng thí nghiệm. Các test nhanh thân thiện với người dùng, nên vẫn là lựa chọn đầu tiên và là công cụ thuận tiện nhất ở các vùng lưu hành sốt xuất huyết, nơi thiếu các cơ sở xét nghiệm và cơ sở hạ tầng tương ứng [162].
& IgM/IgG (Wells Bio, Inc.), Standard QTM Dengue Duo (SD Biosensor) và MULTISURE Dengue Ab/Ag Rapid Test (MP Biomedicals) ở 138 mẫu máu thấy kết hợp xét nghiệm NS1/IgM đã cải thiện đáng kể giá trị chẩn đoán của các test nhanh: Standard Q có độ nhạy cao nhất là 99,1%; còn Multisure có độ nhạy thấp nhất là 92,6%. Kết quả nghiên cứu này cho thấy thông qua kĩ thuật ELISA sử dụng kháng nguyên tái tổ hợp NS1-DENV1-4 có độ nhạy, độ đặc hiệu, dự đoán dương và dự đoán âm từ 95,21 – 99,43, thấp hơn so với giá trị xác định khi sử dụng phương pháp RT-PCR. Người bệnh nhiễm DENV thường tạo ra kháng thể đặc hiệu cho kiểu huyết thanh chính, nhưng kháng thể này không kháng lại được các kiểu huyết thanh khác, đồng thời có thể gây ra biểu hiện lâm sàng nặng hơn khi tái nhiễm.
Các nghiên cứu này chỉ ra luôn tồn tại nhiều type vi rút Dengue khác nhau trong 1 vụ dịch sốt xuất huyết Dengue, do đó càng cần có những công cụ test nhanh có thể khảo sát đồng thời cả 4 týp huyết thanh vi rút Dengue. Một đánh giá gần đây do WHO tài trợ về xét nghiệm nhanh IgM chống vi rút sốt xuất huyết đã đề cập đến độ đặc hiệu khiêm tốn của một số xét nghiệm nhanh IgM hiện có trên thị trường, đặc biệt là trong các mẫu từ người bệnh mắc các bệnh nhiễm trùng khác, trong đó sốt rét là nguyên nhân chính gây nhiễu loạn [16]. - Kháng nguyên tái tổ hợp gộp 4 týp vi rút Dengue biểu hiện trên tế bào vi khuẩn E.coli ở quy mô phòng thí nghiệm nên chưa đánh giá đầy đủ về độ tinh sạch, hoạt tính và tính ổn định của kháng nguyên.
NGƯỜI BỆNH SỐT XUẤT HUYẾT DENGUE VÀ ỨNG DỤNG KHÁNG NGUYÊN NS1 TÁI TỔ HỢP GỘP 4 TÝP PHÁT HIỆN KHÁNG THỂ.
- Các xét nghiệm huyết học, sinh hóa, vi sinh, XQ tim phổi, siêu âm được tiến hành trong nghiên cứu này là các xét nghiệm thường quy khi nhập viện và không ảnh hưởng đến tình trạng chung của Ông/Bà. Các xét nghiệm sinh học phân tử (như: Tạo kháng nguyên NS1 tái tổ hợp và sử dụng để xác định kháng thể DENV-NS1 trong mẫu huyết thanh của người bệnh SXHD bằng phương pháp ELISA; Xác định RNA của virus Dengue trong mẫu huyết thanh của người bệnh SXHD bằng phương pháp RT-PCR) là hoàn toàn miễn phí, Ông/Bà không phải trả tiền.
+ Lấy máu làm các xét nghiệm huyết học, sinh hoá, vi sinh, siêu âm, điện tim, XQ tim phổi. + Lấy máu làm xét nghiệm sinh học phân tử (ELISA, tách chiết RNA, tổng hợp cDNA, khuếch đại gen NS1 bằng phản ứng RT-PCR).
Tên của Ông/Bà cũng không xuất hiện trên những bài báo được công bố của nghiên cứu.
Tôi đã được các cán bộ nghiên cứu giải thích về nghiên cứu này và các thủ tục tuyển chọn vào nghiên cứu. Tôi đã có cơ hội được hỏi các câu hỏi về nghiên cứu này và tôi hài lòng với các câu trả lời và giải thích đưa ra. Tôi hiểu rằng tôi có quyền rút khỏi nghiên cứu vào bất cứ thời điểm nào vì bất cứ lý do gì.
Tôi đã nhận thức được rằng những thông tin về nghiên cứu này có thể được xuất bản trong các tạp chí y học và trang web công cộng để phục vụ cho mục đích khoa học, nhưng những thông tin nhận dạng về tôi đều được dấu kín. Tôi đã cung cấp các thông tin cho người tình nguyện tham gia nghiên cứu về bản chất và mục đích của nghiên cứu và những rủi ro cũng như lợi ích liên quan đến việc tham gia vào nghiên cứu. Tôi đã được các cán bộ nghiên cứu giải thích về nghiên cứu này và các thủ tục tuyển chọn vào nghiên cứu đối với.
Tôi đã có cơ hội được hỏi các câu hỏi về nghiên cứu này và tôi hài lòng với các câu trả lời và giải thích đưa ra. Tôi đã nhận thức được rằng những thông tin về nghiên cứu này có thể được xuất bản trong các tạp chí y học và trang web công cộng để phục vụ cho mục đích khoa học, nhưng những thông tin nhận dạng của. Tôi đã cung cấp các thông tin cho người tình nguyện tham gia nghiên cứu về bản chất và mục đích của nghiên cứu và những rủi ro cũng như lợi ích liên quan đến việc tham gia vào nghiên cứu.
BẢN CAM KẾT THỰC HIỆN THEO ĐÚNG CÁC NGUYÊN TẮC VỀ ĐẠO ĐỨC TRONG NGHIÊN CỨU Y HỌC. Tên đề tài: “Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng người bệnh sốt xuất huyết Dengue và ứng dụng kháng nguyên NS1 tái tổ hợp gộp 4 týp phát hiện kháng thể kháng vi rút Dengue (2021-2022)”. Cơ quan chủ trì: Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung Ương Cơ quan phối hợp chính: Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung Ương.
Bảo đảm giữ bí mật các thông tin cá nhân của người tham gia nghiên cứu và các thông tin trong hồ sơ nghiên cứu. Cung cấp đầy đủ, trung thực các thông tin liên quan tới nguy cơ có thể xảy ra đối với người tham gia trong nghiên cứu. Tôn trọng các ý nguyện của người tham gia nghiên cứu khi muốn dừng tham gia nghiên cứu./.