Nghiên cứu đặc điểm sinh học và ứng dụng của vi khuẩn phân lập từ Việt Nam trong sản xuất phân hữu cơ đa chức năng

MỤC LỤC

HỢP CHẤT TRONG TỰ NHIÊN

Ảnh hưởng của photphat đối với cây trồng

Vi sinh vật đất tham gia tích cực vào các hoạt động liên quan đến các phan ứng tao nên vòng tuần hoàn photphat trong tự nhiên [3]. Axit humic và axit fulvic tạo thành nhờ vi sinh vật phân huỷ xác thực vat sẽ kết hợp với Ca, Fe, Al trong phức hệ của photphat để giải phóng orthophotphat.

Vi sinh vat chuyển hoá photphat ở vùng ré

Trong khi đó ở điều kiện bình thường (pH trung tính và nhiệt độ thường) một số vi sinh vật có thể thuỷ phân xenluloza thành đường. Bước thứ hai sử dụng các enzym thủy phân (Cx) và beta glucosidaza (xenlobiaza). Gilbert [57] đã nghiên cứu rộng về phức enzym của. Phức này chuyển hoá xenluloza tinh thể. vô định hình thành glucoza. Những đặc tính chủ yếu của phức xenlulaza là:. 1) Hệ thống có tính đa xúc tác (multienzymatic).

Ít nhất có ba thành phan enzym đều khác nhau về mat vật lý và hoá học

    Hệ thống vi sinh vật trong tự nhiên rất phong phú và có khả năng rất lớn trong việc phân giải các chất hữu cơ, trong đó vai trò hàng đầu thuộc về các vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp các enzym thuỷ phân ngoại bào [75, 96]. Cơ chất xúc tác của amylaza là tinh bột va glycogen, theo tính chat va cách tác dung lên tinh bột, ta phân biệt amylaza thành các loại a- amylaza, B-amylaza, glucoamylaza.

    Phổ kháng khuẩn hẹp, tác dụng chủ yếu đối với các loài có

    Bacterioxin, lần đầu tiên được Andre phát hiện vào năm 1925 khi quan sát sinh trưởng của một vai chủng Escherichia coli bi ức chế do sự có mat của một hợp. Sau đấy, colixin được mô tả đặc điểm dưới dạng một peptit bền nhiệt và có thể thẩm tích, là những protein có trọng lượng.

    Được tổng hợp khi có tác động qua lại với vi khuẩn đối kháng

      Mặt khác những bacterioxin sinh ra từ vi khuẩn Gram (+) phần lớn đều là peptít nhỏ kích thước từ 3 - 6kDa, hoạt động ở mang, nó làm tăng độ thẩm thấu của bào chất tại màng. Sinh trưởng và phát triển của thực vật giống như tất cả mọi sinh vat, đều được điều tiết bởi các yếu tố di truyền và chụi ảnh hưởng của môi trường.

      Glyxeron photphat Nhiều nghiên cứu đã kết

        Có khả năng di động (khi già khả. Luận án Tiến sĩ Sinh học Nguyễn Thị Hoài Hà. năng di động khụng rừ rệt). Sắc tố màu vàng lục. huỳnh quang trờn mụi trường. ngay khi mới phát triển. Sắc tố khuếch tán vào môi trường. có khả năng đồng. hoá natri benzoat ở nồng độ 1% và có khả nang đồng hoá mannit, ramnoza. tomonas agile): Tế bao có kích thước khoảng 1,5 x 3,0uum, khong tạo thành bào xác. Đôi khi các nhóm được gọi đơn giản là phenon va được đặt trước bởi một con số cho thấy mức độ tương tự ở trên cái mà chúng xuất hiện (ví dụ: 70-phenon là. một phenon với 70% hoặc hơn đặc điểm tương đồng trong các thành phần của nó).

        VIET NAM

        NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

        • MOI TRƯỜNG
          • PHUONG PHAP

            - Các chủng vi sinh vật được phân lập từ các mẫu đất, rác, thực phẩm lên men. CH,COONa Merk, Đức Deoxynucleosid triphosphate Sigma, My Proteaza K Merk, Đức Carboxymethyl celulose Sigma, My.

            EEE EE PPE COO er

            Phân lập vi khuẩn lactic [92]

            Tiến hành: Dùng pipet hút 2,5ml dung dịch mau cho vào bình định mức 50ml.

            Dac điểm, sinh lý, sinh hoá của các chung nghiên cứu [127]

            Sau đó, đổ ra dia Petri, để thạch đông, khi bề mặt khô thì tiến hành đục 16 thạch bằng nút khoan. - Nhỏ 0,1ml dung dịch axit lactic (có nông độ tương đương với nồng độ axit. lactic có trong dịch nuôi, với pH chỉnh về 7,0) vào lỗ thạch làm đối chứng.

            Xác định hoạt tính amylaza

              Nguyên tac: Phương pháp này cho phép xác định nhanh hàm lượng các hop chất đi qua dưới tác dụng của UV với độ tách tốt, kết quả cho độ chính xác cao nhưng đòi hỏi mâu và dung môi phải thật sạch. Hỗn hợp ADN và moi được ủ với enzym Taq polymeraza và dNTP giúp cho việc tổng hợp ADN mới bổ sung với sợi ADN gốc. Tiến hành: Tình sạch sản phẩm PCR: Dùng Spinfilter unit (bộ kít làm siêu. sạch sản phẩm PCR), lấy 20Hl sản phẩm PCR cho vào Eppendorf, lọc qua spinfilter unit có bổ sung 50ul chất đệm spinbind sau đó loại bỏ dung dịch bằng siêu ly tâm. Spinfilter unit được rửa bằng 20uLl chất đệm spinclean, đem ly tâm 2 lần với. Sau đó spinfilter unit được cài vào một. tách sản phẩm ADN ra khỏi spinfilter unit bằng siêu ly. - Xác định nồng độ ADN: Sản phẩm ADN sau được đo bằng cappilary cell. - Sử dụng kit BigDye Terminator để phân tích trình tự ADN trực tiếp từ sản. MicroAmp PCR), 21 BigDye.

              Hình 2.3. Đường chuẩn IAA (indole - 3 axetic - axit)
              Hình 2.3. Đường chuẩn IAA (indole - 3 axetic - axit)

              Số chủng vi khuẩn chuyển hoá photphat phân lập từ các mẫu đất

              • Đặc điểm hình thái, sinh lý và sinh hoá của 2 chủng H2 và H5
                • bataviensisAJ542507 trình tự gen mã hoá

                  Các đặc điểm vé hình thái, sinh lý, trao đổi chất, sinh thái, di truyền, phân tử đều có ích trong hệ thống học bởi vì chúng phản ánh tổ chức và hoạt động của hệ. Sử dụng Cluxtal 18.1 và chương trình điện toán MEGA 2.1 cùng các thông số tiến hoá cần thiết cho thấy mối quan hệ đã được thiết lập trên cơ sở phân tích phân đoạn. Sử dụng môi trường Gerretsen có điều chỉnh các độ pH ban đầu được 6n định bằng đệm Sorensen khác nhau: (3.0 - 8.0), nuôi cấy trên máy lac ổn nhiệt 220 vòng/phút ở nhiệt độ.

                  Hình 3. 12. Chuyển hoá photphat vô cơ Ca;(PO,); của chủng H2
                  Hình 3. 12. Chuyển hoá photphat vô cơ Ca;(PO,); của chủng H2

                  THỰC VẬT IAA

                  • 2]. Ảnh hưởng của vitamin đến sinh trưởng

                    Độ tương đồng rất cao đạt 27% với trình tự của chủng thuộc loài Sinorhizobium xinjiangensis với ký hiệu AJ420774 còn chủng HA4 là 98% với chủng thuộc loài Azotobacter chroococcum có ký hiệu. Trong các bước nghiên cứu thì việc lựa chọn các điều kiện nuôi cấy và các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình sinh trưởng của các chủng vi khuẩn phân lập được là. Mục đích tìm được nguồn cacbon thích hợp cho nuôi cấy, chúng tôi tiến hành, thay manitol lần lượt bằng các nguồn cacbon khác nhau trong môi trường cơ.

                    Hình 3. 80. Biến động của sinh trưởng và hàm lượng IAA của chung Rh
                    Hình 3. 80. Biến động của sinh trưởng và hàm lượng IAA của chung Rh

                    CHUNG AZOTOBACTER CHROOCOCCUM HA4 VA SINORHIZOBIUM

                    Luận án Tiến sĩ Sinh học Nguyễn Thị Hoài Hà cũng không han tỉ lệ thuận với khả năng sinh trưởng của vi khuẩn.

                    PHÂN HỮU CƠ ĐA CHỨC NĂNG

                    • Ảnh hưởng của một số yếu tố môi trường đến khả năng ủ phân
                      • Quá trình phối trộn phải được tiến hành sao cho đạt độ đồng đều về tất cả các thành phần tạo ra sản phẩm. Sản phẩm chứa vi sinh vật phải bảo đảm độ ẩm

                        Luận án Tiến sĩ Sinh học Nguyễn Thị Hoài Hà. Mo là thành phan không thể thiếu trong môi trường nuôi A. Mo tạo nên trung tâm hoạt động của nitrogenaza do vậy nồng độ. Đặc biệt nông độ Mo thích hợp ở 0,1M cho sinh trưởng và tổng hop IAA của chủng HA4 dat. BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU SỬ DUNG HON HOP VI KHUẨN ĐỂ U. Luận án Tiến sĩ Sinh học Nguyễn Thị Hoài Hà. Dich vi sinh vật có ty lệ vi khuẩn phân giải xenluloza, sinh amylaza: vi khuẩn. chuyển hoá photphat: vi khuẩn lactic : vi khuẩn sinh chất kích thích sinh trưởng thực. Cách tiến hành: Trộn đều cám gạo, rơm cỏ, phân gia súc, gia cam. Tạo đống với chiều cao 50cm, phủ bao day, rom, cần tránh mua, nang. phương pháp ủ phân Bokashi của Nhật Bản nhưng với tập đoàn vi sinh do chúng tôi. Trong thực tiên số lượng các chât thải sau thu hoạch và rác thải rất lớn. Việc lựa chọn các chủng vi sinh vật phân giải hợp chất lingo - xenluloza và hợp chất hydratcacbon là rất quan trọng. Các chủng này ngoài khả năng phân giải cơ chất. cao, còn phải thể hiện khả năng cạnh tranh để thích nghi với cơ chất trong điều kiện. 129] cũng có nhận định tương tự về việc bố sung hỗn. hợp các chung phân giải xenluloza, tinh bột đã phát huy được hiệu quả phân giải co. chất, đồng thời có tác dụng tích cực đến hệ vi sinh vật trong tự nhiên, tăng nhanh. quá trình phân giải chất thải hữu cơ. Động học của quá trình ủ phân vi sinh. Trong tự nhiên. luôn có sự biến đổi hoá học cũng như sinh học trong quá. Đây là kết quả của hoạt động kế tiếp của nhiều nhóm vi sinh vật. thời kỳ khác nhau của đống ủ, mà từng nhóm vi sinh vật xuất hiện chiếm da số. thời gian đầu khi nhiệt độ còn thấp. vi khuẩn ưa ấm hoạt động ở. các nhóm vi khuẩn ưa nhiệt vì chịu nhiệt. phát triển nhanh thay thế nhóm ưa ấm. Khi nhiệt độ giảm xuống. vi sinh vật ưa ấm lại xuất hiện và thực hiện các. chức nang của chúng. Dé nghiên cứu những thay đối về hoá hoc, sinh học trong quá. trình ủ, chúng tôi tiến hành ủ trong thời gian 25 ngày và xác định các chỉ số như. Luận án Tiến sĩ Sinh học Nguyễn Thị Hoài Hà. vi sinh vật tong số, vi sinh vật phân giải xenluloza, amylaza, độ giảm trọng. lượng cơ chất. Biến động số lượng vi sinh vật trong đống ủ phân vi sinh. Nhiệt độ phụ. thuộc rất nhiều vào kích thước và nguyên liệu của đống ủ. Khi nghiên cứu động học của đống ủ, nhận thấy vi sinh vật tổng số và vi sinh. vật phân giải xenluloza. khả năng phân giải xenluloza, còn các chủng vi khuẩn có khả nang phân giải tinh. Luận án Tiến sĩ Sinh học Nguyễn Thị Hoài Hà. 10’/g), nhận thấy một điều là số lượng các chủng vi khuẩn lactic xuất hiện ở đống. Khả năng phân giải sinh học hỗn hợp phân hữu cơ trong tự nhiên chịu ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố như nhiệt độ, độ ẩm, môi trường dinh dưỡng, độ thoáng khí. Rễ chính và các tóc rễ cũng phát triển rất dài, điều này rất thuận lợi cho việc hút chất dinh dưỡng trong đất dẫn đến cây sẽ phát triển tốt và tăng sức đề kháng với bệnh, tăng khả năng chống chịu (Hình 3.87, độ phóng x2000) còn cây đối chứng lá bị sâu (Hình 3.88, độ phóng x 2000).

                        TAI LIEU THAM KHẢO

                        (1996), “Indole-3-acetic acid, ethylene, and abscisic acid metabolism in developing muskmelon (Cucumis melo L.) fruit”, Plant Growth Regulation, (19), pp. (2002), “Biosynthesis, conjugation, catabolism and homeostasis of indole-3-acetic acid in Arabidopsis thaliana”, Plant Molecular Biology, (49),. “Growth and arginine metabolism of the wine lactic acid bacteria Lactobacillus buchneri and Oenococcus oeni at different pH values and arginine.