Ứng dụng cao chiết thảo dược để nâng cao khả năng kháng bệnh Streptococcus agalactiae ở cá rô phi Oreochromis spp.

Vật liệu nghiên cứu

Nghiên cứu sử dụng 06 loại thảo dược, có nguồn gốc từ các địa phương và được cung cấp bởi Viện Y học dân tộc (cụ thể ở Bảng 2.1). Thông tin cá bệnh sử dụng trong nghiên cứu và các ch ng vi khuẩn S. (Oreochromis sp.) nuôi ở xã Thanh Sơn huyện Định Quán, tỉnh Đồng Nai. Mắt lồi đục nhẹ, gan nhạt màu. niloticus) nuôi ở Trung tâm Giống th y sản và cây trồng, huyện C Chi, TP. Lồi mắt, xuất huyết hậu môn, gan nhạt màu. *: cung cấp bởi Trung tâm Quan trắc môi trường và bệnh thủy sản Nam Bộ, Viện Nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản II. niloticus) giống có khối ượng trung bình 4-6 gram/con, khỏe mạnh, sạch bệnh S.

Cá giống được vận chuyển về Phòng thí nghiệm ướt thuộc Viện Nghiên cứu Nuôi trồng th y sản II tại Quận Gò Vấp, Thành phố Hồ Chí Minh và nuôi dưỡng 5 ngày trong bể composite có sục khí liên tục trước khi tiến hành bố trí thí nghiệm. Đĩa giấy vụ tr ng đĩa giấy khỏng sinh Doxycycline (30 àg) do Cụng ty TNHH Dịch vụ và Thương mại Nam Khoa sản xuất.

Phương pháp nghiên cứu

Thí nghiệm này gồm hai bước: (1) Khảo sát hả năng háng huẩn c a dịch chiết nhằm sàng ọc và xác định được oại thảo dược và oại dung môi ph hợp để xem xét ựa chọn các oại dịch chiết thảo dược có hiệu quả cao trong việc háng vi huẩn S. Trước khi thực hiện quá trình chiết xuất, các loại thảo dược được sơ chế sạch sẽ sau đó được sấy đến khi khô hoàn toàn (thời gian sấy tùy thuộc loại thảo dược), và tiếp tục được nghiền nhỏ qua rây số 180 – 355 ( ích thước hạt thảo dược dao động từ 0 13 mm đến 0,24 mm). Để thu cao chiết các dịch chiết gốc được tiến hành cô quay để oại bỏ dung môi ở 60oC và áp suất chân hông thành dạng cao ỏng (10 ml) có hàm ượng hô c a thảo dược trong dung môi là 1 g/m được bảo quản trong t ạnh ở -20oC để sử dụng trong các thí nghiệm.

Kháng sinh Doxycycline được lựa chọn cho nghiệm thức đối chứng vì một số lý do sau: (1) Đây là một kháng sinh thuộc nhóm Tetracyclin, có phổ kháng khuẩn rộng, có tác dụng kìm hãm/ức chế sự phát triển c a vi khuẩn (cả Gram âm và Gram dương); (2) Đây à háng sinh không thuộc danh mục các kháng sinh cấm sử dụng trong nuôi trồng th y sản, được dùng phổ biến trong nuôi trồng th y sản đặc biệt à trong điều trị bệnh do vi khuẩn S. Sau khi kết thúc 8 tuần thí nghiệm, thu toàn bộ cá trong các bể để đánh giá các chỉ tiêu tăng trưởng, tỷ lệ sống, FCR ở các nghiệm thức có bổ sung cao chiết thảo dược vào thức ăn và so sánh với nghiệm thức không bổ sung cao chiết thảo dược. Sau đó tính toàn vẹn c a mẫu gDNA (một trong những yêu cầu c a phân tích Illumina) được kiểm tra bằng điện di trên gel Agarose 0.7% sử dụng đệm điện di TAE 1X, nồng độ và độ tinh sạch được xác định trên thiết bị quang phổ Biospectrometer Basic (Thái Kế Quân và ctv, 2016).

Thí nghiệm được bố trí riêng biệt nhưng cùng thời điểm với Thí nghiệm Xác định ảnh hưởng c a cao chiết lên khả năng bảo vệ cá rô phi, trong các bể nhựa 90 lít có sục khí liên tục, mật độ 40 con/bể cho ăn 4% hối ượng thân/ngày (Bhujel, 2013). Còn tại các Thời điểm 2 và 3, các mẫu ở toàn bộ các nghiệm thức c a nhóm 2 và 3 được thu, riêng nhóm 1 chỉ mẫu ở nghiệm thức 1.2 được thu (do mục tiêu c a nghiên cứu là khảo sát ảnh hưởng c a cao chiết trong việc hỗ trợ nâng cao sức đề kháng, miễn dịch c a cá khi tiếp xúc với tác nhân gây bệnh).

Xử lý số liệu

Thí nghiệm xác định MBC tr n cao chiết quy về hàm ượng hoạt chất chính được thực hiện tương tự mục 2.4.1.4.b.

Hoạt tính thực bào

Sau đó phiến ính được rửa nhẹ bằng đệm PBS cố định bằng metano 100% trong 5 phút rửa bằng metano 70% và àm hô trong hông hí trước hi nhuộm bằng Giemsa 3% trong 30 phút. Tiến hành hử màu ần cuối bằng cách sử dụng đệm àm hô bằng hông hí và gắn ết. Các tế bào được iểm tra dưới ính hiển vi ánh sáng có ngâm dầu (độ phóng đại x 100).

Chỉ số thực bào (PA %) = Số ượng tế bào thực bào/Tổng số ượng đại thực bào đếm được.