Phương pháp chiết xuất từ cây mù u
MỤC LỤC
PHƯƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT [1]
YÊU CẦU CỦA DUNG MÔI KHI CHIẾT
Cú khả năng hũa tan lớn cỏc hoạt chất nhưng rất bộ ủối với tạp chất, ủặc biệt ủối với nước phải ớt hũa tan. Khụng ủược tạo thành hỗn hợp nỗ với khụng khớ, khụng ủược cú những tạp chất khụng bay hơi và khi bay hơi khong ủược ủể cặn cú mựi lạ. Khụng gõy mựi lạ ủối với sản phẩm và khụng ủộc hại ủối vúi người sử dụng.
CÁC PHƯƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT
Phương phỏp ngấm kiệt là một trong những phương trớch ly ủược sử dụng phổ biến nhất vỡ khụng ủũi hỏi nhiều thao tỏc cũng như thời gian. Dụng cụ gồm một bỡnh ngấm kiệt hỡnh trụ ủứng, bằng thủy tinh, ở dưới ủỏy bỡnh là một van khúa cú ủiều chỉnh vận tốc của dung mụi chảy, khi ủó ngõm mẩu cõy trong dung mụi sau một thời gian nhất ủịnh.Dung mụi chảy ra ủược hứng trong một erlen ủể bờn dưới, trờn cao cú một bỡnh lúng chứa dung mụi ủể nhỏ vào bỡnh khuấy ngấm kiệt này. Tuy vậy mà người ta khụng thực hiện liờn tục ma mẫu cõy ủược ngõm liờn tục trong dung môi khoảng 12 giờ, cho dung môi bão hòa chảy ra rồi thay thế bằng dung môi mới và tiếp tục quỏ trỡnh trớch ly.
Phương pháp ngâm dầm không hiệu quả gì hơn so với phương pháp ngấm kiệt, chỉ là ngâm bột cây trong bình chứa thủy tinh hoặc thép không gỉ có nắp ủậy. Rút dung mụi phủ lớp bột cõy, ủể yờn ở nhiệt ủộ phũng, dung mụi sẽ thấm vào nguyên liệu và hòa tan các chất tự nhiên trong cây. Bột cõy ủược cho vào bỡnh chiết khỏc nhau, vớ dụ cú 3 bỡnh A, B, C bột cõy ủược cho vào cả ba bỡnh.
Như vậy, dung dịch chiết ra từ bỡnh chiết trước ủược làm dung mụi ủể ngõm bọt cõy cho bỡnh tiếp theo, cứ tiếp tục như vậy cho ủến cỏc bỡnh sau. Phương pháp này chỉ khác phương pháp ngấm kiệt là dịch chiết sau khi lấy ra không theo phương pháp nhỏ giọt mà mở khóa cho chảy thành dòng sau khi ngâm một thời gian nhất ủịnh. Phương phỏp này cú ưu ủiểm là sử dụng một lượng ớt dung mụi mà vẫn cú thể chiết kiệt ủược hoạt chất.
Muốn biết việc chiết xuất ủó cạn kiệt chưa, thỏo phần ống ngưng hơi, dựng pipette hỳt vài giọt dung mụi ủang chứa trong bỡnh chứa mẫu cõy, nhỏ lờn mặt kớnh hay giấy lọc, dung mụi bay hơi sẽ ủể lại vết cặn. Nếu thấy khụng cũn vết nữa nghĩa là việc chiết xuất ủó kiệt, nếu thấy cú vết thỡ tiếp tục chiết thờm một thời gian nữa. Nhược ủiểm của phương phỏp này là khụng chiết xuất ủược một lượng lớn mẫu cây nên chỉ thích hợp cho việc nghiên cứu trong phòng thí nghiệm.
Một bất tiện nữa trong suốt quỏ trỡnh chiết xuất mẫu cõy luụn luụn ở nhiệt ủộ sụi của dung môi nên những hợp chất kém bền nhiệt như Carotenoid có thể bị thủy giải, phân giải hoặc tạo các hợp chất Artefat. Hiếm khi người ta ủun bột cõy với dung mụi là nước, dự rằng trớch ly với nước mà phương phỏp mà dõn gian sắc thuốc ủể uống và một số chất cũng tan ủược trong nước, người ta thường dựng hỗn hợp CH3OH – H2O hoặc. Dụng cụ gồm một bỡnh cầu lớn ủể cung cấp hơi nước, hơi nước sẽ ủược dẫn sục vào bỡnh chứa mẫu cõy, hơi nước tiếp tục bay hơi và ngưng tụ bởi một ống sinh hàn, ta thu ủược hợp chất tinh dầu và nước.
PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ CỘT [1]
QUY TRÌNH CÔ LẬP CÁC CHẤT TỪ HẠT TRÁI MÙ U
THỰC NGHIỆM
- PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
- Dài 40 cm
- THỰC NGHIỆM
Cỏc dụng cụ như bỡnh tam giỏc, chai ủựng dụng dịch, chai bi ủược sử dụng cho quá trình ly trich và chay cột sắc ký. Mỏy cụ quay: Là một dụng cụ rất quan trọng, dựng ủể cụ cạn dung dịch trớch và thu hồi dung môi dưới áp suất thấp nhầm thu các cao của mẫu dung dịch trong quá trình chiết lỏng – lỏng hoặc giải ly cột sắc ký. Dựa vào nguyên tắc coumarin tan trong nước khi mở vòng lacton ở môi trường kiềm, và tan trong dung mụi hữu cơ kộm phõn cực khi ủúng vũng lacton trong mụi trường acid ủể chiết xuất coumarin từ dầu thụ.
Hệ dung môi khai triển benzen – ethyl acetate (9:1), petroleum ether - ethyl acetate (2:1), n-hexane - ethyl acetate (2:1) phát hiện vết dưới ủốn UV, phản ứng hơi Iod hoặc phun thuốc thử H2SO4 trong methanol. Từ cao ethanol thu ủược từ quỏ trỡnh trờn chung tụ bước ủầu tiến hành ủịnh tớnh sơ bộ thành phần hóa học của cao ethanol trước khi tiến hành tách coumarin bằng sắc ký bản mỏng với hệ dung môi giải ly là n –hexane/EtOAc (9:1). Dựa vào nguyên tắc coumarin tan trong nước khi mở vòng lacton ở môi trường kiềm, và tan trong dung mụi hữu cơ kộm phõn cực khi ủúng vũng lacton trong mụi trường acid ủể chiết xuất coumarin từ cao trớch từ cao ethanol.
Quỏ trỡnh kết tủa ở xóy ra chậm nờn cần ủợi 24 giờ ủể cú kết tủa màu trắng xanh (gọi là phần nhựa), rồi tỏch bỏ kết tủa. Phần cũn lại sau khi tỏch kết tủa ủược giữ lại ủể làm thớ nghiệm tiếp theo (gọi là dung dịch kiềm 2). Lấy phần tan trong dung môi ben zen ( dung dịch màu vàng), sau ủú cụ quay ỏp suất thấp ở 600 thu ủược 8,77 cao benzen vàng tươi.
Thực hiện sắc ký cột ủể chia cao benzene thành cỏc phõn ủoạn, theo dừi quỏ trỡnh giải ly bằng sắc ký bảng mỏng ủể gộp cỏc lọ cú Rf giống nhau thành một phõn ủoạn, cụ quay thu hồi dung mụi. Cách nhồi cột: Áp dụng phương pháp nhồi ướt, cân khoảng 150 gam silica gel rồi cho từ từ lượng nhỏ silica gel vào trong bình tam giác 250 mL chứa một lượng dung mụi n-hexane, khấy ủều ủể trỏnh vún cục lại. Chất phõn tớch: Lấy cao benzene ủược nạp dưới dạng dung dịch vào cột (chú ý rằng nên nạp từ từ vào cột nên tránh xáo trộn bề mặt cột).
Thuốc thử hiện hỡnh là hơi Iod, những lọ nào có vết sắc ký giống nhau và Rf gần bằng nhau thì gộp lại thành một phõn ủoạn. Thực hiện sắc ký cột ủể chia phõn ủoạn C thành cỏc phõn ủoạn, theo dừi quỏ trỡnh giải ly bằng sắc ký bảng mỏng ủể gộp cỏc lọ cú Rf giống nhau thành một phõn ủoạn, cụ quay thu hồi dung mụi. Cách nhồi cột: Áp dụng phương pháp nhồi ướt, cân khoảng 50 gam silica gel rồi cho từ từ lượng nhỏ silica gel vào trong bình tam giác 250 mL chứa một lượng dung mụi PE/EtOAc (3:1), khấy ủều ủể trỏnh vún cục lại.
Chất phõn tớch: Lấy phõn ủoạn C ủược nạp dưới dạng dung dịch vào cột (chú ý rằng nên nạp từ từ vào cột nên tránh xáo trộn bề mặt cột. Thuốc thử hiện hỡnh là hơi Iod, những lọ nào có vết sắc ký giống nhau và Rf gần bằng nhau thì gộp lại thành một phõn ủoạn.
