MỤC LỤC
Phương pháp thử miễn dịch dựa trên phản ứng giữa một kháng nguyên và một kháng thể là những protein có trọng lượng phân tử lớn thu được do tạo miễn dịch ở máu nóng của động vật có vú ( chuột, thỏ, ngựa, dê..) bằng những phân tử gây miễn dịch ( protein, polysaccharides, ARN 2 mạch bổ xung ,..).Trong trường hợp này kháng thể được gọi là kháng thể đa dòng. (polyclonaux) vì chúng được tạo ra từ các dạng hoạt hoá của một quần thể dị chất của những tế bào limpho B trong máu động vật. Chúng là một hỗn hợp của các kháng thể khác nhau phản ứng với nhiều điểm cuối của kháng nguyên hoạc những đỉnh của phân tử gây miễn dịch.
Phản ứng kháng thể – kháng nguyên là một công cụ rất hiệu nghiệm để chuẩn đoán bệnh virut, vi khuẩn, nấm, mycoplasma, tuyến trùng và các véc tơ truyền bệnh. Các phân tử đánh dấu cũng là một phức hợp kháng thể –kháng nguyên đã được sử dụng từ lâu để chuẩn đoán bệnh cho phép nhận thấy kết quả bằng mắt thường. Hiện nay việc sử dụng các phân tử phóng xạ để đánh dấu đã bị hạn chế .Bên cạnh đó, người ta thường dùng enzym (Alkaline phosphatasa), peroxidaza, chất floresence và Avidin –Biotin để tăng độ nhạy của phép chuẩn đoán ta cũng có thể sử dụng các chất huỳnh quang, phosphattase alkaline.
Phương pháp miễn dịch liên kết enzym được nhiều tác giả hoàn thiện vào năm 1971 (Avrameanvà Cs; Van Weemen và Cs; Engvall và Cs ). Nhóm cuối cùng đã sử dụng thuật ngữ ELISA (Enzym linked immuno –sorbent assay) lần đầu tiên vào năm 1971 để áp dụng vào phương pháp định lượng một vài kháng thể đặc hiệu. Đây là phương pháp được phát triển bởi rất nhiều tác giả và là một phương pháp nhanh nhậy trong chuẩn đoán và định lượng một số kháng nguyên, kháng thể.
Clack và Adams ở Anh là hai trong những người đầu tiên dùng phương pháp này để chuẩn đoán 2 bệnh virut là AWM ( Arabis Mosaic Virus) và PPV ( Plum PoxVirut). Sự đánh dấu kháng thể cho phép nhìn thấy phản ứng kháng nguyên kháng thể và tăng thêm khả năng thăm dò của những phản ứng đặc hiệu. Phản ứng của virus cũng tập trung và được tăng cường bằng một pha đưa thêm vào một kháng thể đặc hiệu có gắn một enzym đánh dấu, có phản ứng hoàn toàn với virus và được tìm ra bằng nhuộm màu trong diễn biến giảm dần của enzym ỏ chất nền thích hợp.
Phương pháp ELISA không những đáp ứng được những tiêu chí phức tạp mà còn dễ dàng tự động hoá và dễ dàng tìm kiếm những chất phản ứng trên thị trường. - Nhận biết các tác nhân gây bệnh chủ yếu, đưa ra những dữ liệu về bệnh dịch học, xác định được mức độ nhiễm để quản lý đánh giá các giống kháng bệnh…. - Theo dừi thường xuyờn cỏc loại vi sinh vật, phỏt hiện và diệt trừ ổ dịch cú thể là các kho chứa các vật truyền bệnh (côn trùng, tuyến trùng, nấm…).
Cũng như các vi sinh vật gây bệnh khác nấm gây bệnh là một trong những nguyên nhân chính gây nên sự sụt giảm năng suất, chất lượng, tàn phá mùa màng. Phần lớn nấm gây bệnh có hình thức sinh sản bằng bào tử và có vòng đời ngắn do đó chúng lây lan với một tốc độ vô cùng lớn và rất khó ngăn chặn. Chính vì vậy, việc phát hiện, nghiên cứu nấm bệnh là một nội dung vô cùng quan trọng giúp cho việc tìm ra các biện pháp phòng ngừa, tiêu diệt và ngăn chặn sự lây lan của chúng, bảo vệ mùa màng.
Ngày nay, các biện pháp hoá học bị hạn chế do những tác động phá hoại sự cân bằng sinh thái hay gây ô nhiễm môi trường của chúng. Các biện pháp sinh học như sử dụng vi sinh vật đối kháng, thuốc trừ sâu sinh học, chuyển gen chống chịu vào cây trồng…đang được nghiên cứu và áp dụng ngày càng nhiều nhờ những ưu điểm của chúng. Một trong những biện pháp sinh học có khả năng đem lại hiệu quả cao trong bảo vệ cây trồng là sử dụng vi sinh vật chống lại các vi sinh vật hại cây hay nói cách khác là tiêu diệt vi sinh vật gây bệnh cho cây nhờ các vi sinh vật đối kháng với chúng.
+ Tác động trực tiếp vào tác nhân gây bệnh: một số chủng vi sinh vật có khả năng sinh ra enzim thuỷ phân ức chế sự phát triển của vi sinh vật khác, phân giải thành thành tế bào hay tạo ra các lỗ rò dẫn tới sự rò rỉ tế bào. - Trong nội dung báo cáo này đề cập đến một số kỹ thuật phân lập nấm bệnh và nấm đối kháng phục vụ cho nghiên cứu ảnh hưởng của nấm đến cây trồng cũng như sản xuất ra các chế phẩm sinh học nhờ những nghiên cứu ấy. Vi sinh vật có trong đất sẽ bị thu hút bởi mô thực vật mà nó có thể sống kí sinh và gây bệnh trên đó, nhờ vậy ta tách riêng được chủng VSV cần nghiên cứu.
- Cấy chuyển sang môi trường WA (hình 1) hoặc môi trường trung gian PDA cho đến khi tạo thành canh trường thuần khiết (hình 2). - Cũng có thể phân lập nấm có trong mô thực vật bằng cách đặt mẫu cần phân lập lên đất đã khử trùng sạch bệnh để nấm xâm nhiễm và được nhân lên nhờ đất. - Nuôi mô thực vật bị nhiễm nấm bệnh trên môi trường nuôi cấy phù hợp để nấm phát triển mạnh mẽ tạo thành khuẩn lạc, nhờ đó tách riêng chúng.
- Quan sát khuẩn lạc của nấm mốc mọc lên trong môi trường đó và cấy chuyển nhiều lần sang môi trường WA hoặc PDA cho đến khi tạo được canh trường thuần khiết. - Đặt lên bề mặt một lớp vật liệu cellulose (giấy hay rơm rạ ). - Cấy chuyển bào tử nấm sang môi trường trung gian PDA cho đến khi tạo canh trường thuần khiết. - Quan sát bào tử nấm dưới kính hiển vi Stereo để nhận biết chủng loại. - Các bước trên thực hiện trong box cấy vô trùng Sơ đồ tiến hành: H4. Phân lập được một số chủng nấm từ đất phục vụ cho việc nghiên cứu nấm đối kháng. **Thành phần các môi trường sử dụng:. Kasem soytong). - Tiến hành thí nghiệm trên mẫu đất trồng Cam ở Huyện Văn Giang, tỉnh Bắc Giang là: CVG1 và mẫu đất trồng Hồng Môn tại VDTNN là HM1 - Các chủng vi sinh vật phân lập được là : Tricoderma; Aspergillus và.
- Tiến hành thí nghiệm trên mẫu đất trồng Hồng Môn tại VDTNN là HM1T, tuy nhiên do thời gian thí nghiệm hạn chế nên chưa thu được kết quả. Qua đợt thực tập này em đã phần nào hình dung và định hướng được công việc mình sẽ là trong tương lai.Tuy đây là đợt thực tập thứ hai của em nhưng là đợt thực tập ký thuật đầu tiên nên không tránh được những bỡ ngỡ nên em rất mong có được sự góp ý và giúp đỡ của cô để em có thể hoàn thiện hơn kiến thức của mình.
Quan niệm về bệnh hại thực vật Phần I: Nuôi cấy mô tế bào thực vật.