Tái sinh và tạo cây hoàn chỉnh từ chồi đỉnh lan vũ nữ Oncidium sp bằng nuôi cấy in vitro
MỤC LỤC
NHỮNG ỨNG DỤNG THỰC TIỄN.[11]
∗ Tạo được nhiều cây con từ mô và cơ quan của cây ( lóng thân, phiến lá, hoa, hạt phấn, chồi, phát hoa…) mà ngoài thiên nhiên không thể thực hiện được. Ý nghĩa thực tiễn quan trọng nhất của nuôi cấy mô tế bào là áp dụng kỹ thuật sản xuất đại trà có kiểm soát trong tạo giống và nhân giống cây trồng.
CÁC ĐẶC ĐIỂM VỀ PHONG LAN
Đặc Điểm Phân Bố Và Sinh Thái Họ Lan
Trước ngày 30/04/1975, một số nước như Mỹ, Thái Lan…đã đầu tư nuôi trồng lợi nhuận, nhưng ở nước ta nhu cầu về hoa lan chỉ mang tính chất giải trí đối với tầng lớp thượng lưu. Sau ngày 30/04/1975, đất nước đã hoàn toàn thống nhất, đời sống con người ngày càng được đổi mới và dần dần khá hơn do đó sự đòi hỏi về nhu cầu vật chất và tinh thần cũng cao hơn, từ đó thú chơi hoa cũng được con người ngày càng quan tâm nhất là đối với hoa lan.
Các Công Dụng Đặc Trưng Của Lan.[1]
Thị trường tiêu thụ lan trên thế giới rộng rãi như các nước: Mỹ, Hồng Kông, Nhật Bản, Pháp…riêng Thụy Điển hàng năm nhập 1 triệu US dollars cho hoa lan ( theo WIKESJO ). Ngoài việc tuyển chọn tìm giống tốt, lai tạo ra giống mới thì việc nhân giống cũng hết sức quan trọng nhất là nhân giống vô tính bằng phương pháp nuôi cấy mô.
GIỚI THIỆU VỀ LAN ONCIDIUM.[7,8]
Nguồn Gốc Và Sự Phân Bố Cây lan Oncidium thuộc
Sự xuất hiện u lồi trên cánh hoa hình môi mỗi bông hoa thật độc đáo, đó là những bông hoa to bầu bĩnh xinh tươi, mỗi hoa được ví như là một cô gái trong chiếc váy đầm đang khoe sắc. Giống này đòi hỏi ẩm độ cao, nhất là thời kỳ tăng trưởng vì vậy nếu chất trồng là than thì phải nhỏ hơn so với các cục than trồng Dendrobium, người ta thường trồng với xơ dừa và than vụn thành từng băng.
Đặc Điểm Hình Thái của lan Oncidium.[9]
Màu sắc hoa thay đổi từ màu vàng, cam, hồng, đỏ, trắng hay các màu trung gian hoặc có sự kết hợp giữa các màu. Dạng hoa rất đa dạng như : Dạng ong, bướm, ngài, ếch, cô gái với chiếc váy đầm,…. Hoa lan Oncidium không thể tự thụ phấn, muốn thụ phấn chúng cần sự giúp đỡ của côn trùng hay chim nhỏ.
Các Điều Kiện Ngoại Cảnh Aûnh Hưởng Đến Lan Oncidium.[4]
Nếu nhiệt thấm vào cây mà không tỏa ra được thì diệp lục tố sẽ bị thiêu hủy, lá sẽ ngả vàng và phản ứng quang hợp bị ủỡnh chổ. Cần lưu ý là ẩm độ trong vườn cao thì tốt hơn là ẩm độ cục bộ trong chậu cao, và lan ít bị chết do ẩm độ trong vườn cao mà thường bị chết do ẩm độ cục bộ trong chậu cao, cao nhất là ẩm độ cục bộ này tạo bởi các giá thể hoàn toàn giử ẩm hiện diện trong chậu. Aồm độ cục bộ chỉ được tăng lờn trong trường hợp không có cách nào khác, do ẩm độ trong vườn quá thấp không đủ cung cấp cho sự phát triển của cây khi sự thông gió quá độ.
Càng thiếu thông thoáng thì càng dễ gia tăng bệnh cho lan Oncidium nhưng sự thông thoáng quá lớn thì lại gia tăng sự bốc hơi làm cho môi trường có ẩm độ thấp, sự thoát hơi nước ở cây cao, cây kém phát triển. Dinh dưỡng đối với cây lan Oncidium hết sức quan trọng, tuy nó không đòi hỏi số lượng lớn nhưng nó đòi hỏi phải đầy đủ các thành phần dinh dưỡng. Chính vì thế, việc bón phân cho lan ngoài mục đích duy trì sự sinh trưởng và phát triển của cây lan, còn là nhằm điều khiển sự ra hoa các loài của giống này.
Vì thế khi tưới phân bón bằng phương pháp phun sương lên toàn bộ cây sẽ tốt hơn rất nhiều so với cách tưới thẳng vào các giá thể trong chậu.
CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM CƠ BẢN. [2]
- Chuyển Cây In Vitro Ra Vườn Ươm.[11,7]
Đối với cây trồng đã có kết quả nghiên cứu của các tác giả trên thế giới, môi trường nuôi cấy sẵn có thường được áp dụng, tuy nhiên với đối tượng mới, môi trường nuôi cấy thích hợp thường cần phải được nghiên cứu sâu sắc. Đối với những mẫu dễ bị hoá nâu, môi trường thường được bổ sung than hoạt tính hay ngâm mẫu trước khi cấy với hỗn hợp Ascorbic acid và Citric acid (25-150mg/l cho mỗi loại). Vật liệu nuôi cấy là những thể PLBs, thể chồi vừa được phân hoá, và từ những thể PLBs, thể chồi này ta sẽ tiến hành nhân nhanh PLBs từ các PLBS ban đầu, cũng như nhân chồi và từ đó sẽ được một số lượng thật nhiều cây con.
Cây in vitro được nuôi cấy trong điều kiện ổn định về dinh dưỡng, ánh sáng, nhiệt độ, độ ẩm… nên khi chuyển ra vườn ươm, với điều kiện tự nhiên hoàn toàn khác hẳn như dinh dưỡng thấp, ánh sáng có cường độ mạnh, nhiệt độ cao, ẩm độ thấp, cây con dễ dàng bị stress, dễ mất nước và mau héo. Đặc biệt đối với một số loại cây thân gỗ, những loại cây tạo được rễ in vitro nhưng những rễ này không phù hợp do đó những cây này sẽ tạo rễ mới sau khi được chuyển ra trồng trong đất. Lấy cây con ra khỏi chai phải kiên trì, cẩn thận, dùng kẹp gắp và kéo ra từng cây một, nên kéo ở phần gốc cho ra trước, phần ngọn lá ra sau, tránh chấn thương cho lá và rễ.
Ta cũng có thể trồng bằng than nhỏ: cho lan vào giữa và chêm than vào xung quanh nhưng trồng bằng than thì tốc độ phát triển của cây lan có phần chậm hơn trồng bằng xơ dừa.
K ẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN
❖ Thí Nghiệm 2: Khảo Sát Aûnh Hưởng Của BA Lên Sự Hình Thành PLBs Từ Chồi Đỉnh Và Lá. Chồi đỉnh (a) và lá (b) đang hình thành PLBs trên môi trường MS sau 10 tuần nuôi cấy. Chúng tôi ghi nhận ở mỗi nghiệm thức các chồi đỉnh đều có sự hình thành các PLBs, thí nghiệm được lập lại 3 lần, nhưng đối với lá trên môi trường có BA 0,5 mg/l thì không có lá nào hình thành PLBs.
Sau quá trình nuôi cấy chúng tôi thu được bảng giá trị phần trăm các PLBs được hình thành từ các chồi đỉnh. Môi trường KD thì cho kết quả kém hơn, sự tạo PLBs từ các chồi thấp hơn so với môi trường MS ở cùng các nồng độ BA, kết quả cao nhất là môi trường KDP4 với nồng độ 2mg/l BA (30 %) và thấp nhất là môi trường KDP1 với nồng độ 0,5mg/l BA (10 %), và các PLBs được hình thành có xu hướng biệt hóa thành. Đối với cả hai môi trường, thì khi nồng độ BA tăng cao 3mg/l thì hạn chế sự tạo PLBs ở các chồi đỉnh.
KẾT QUẢ SỰ HÌNH THÀNH PLBS TỪ CHỒI ĐỈNH
Với lá, môi trường MSP5 cho số lượng lá tạo PLBs nhiều nhất, môi trường có bổ sung 3mg/l BA với 40% lá hình thành PLBs. Môi trường KDP5 có bổ sung 3mg/l cho số lượng lá hình thành PLBs là 30%. Với thí nghiệm 2 chúng tôi đã thử nghiệm sự hình thành PLBs trên môi trường KD lỏng có bổ sung 2 mg/l BA lắc 30 vòng/ phút của một chồi chẻ đôi, kết quả đã được rất nhiều PLBs so với môi trường KD có agar.
Các PLBs được tạo trên môi trường KD lỏng, có bổ sung 2mg/l BA đặt trên máy lắc sau 8 tuần nuôi cấy. ❖ Thí Nghiệm 3 : Khảo Sát Aûnh Hưởng Của BA Lên Sự Nhân Nhanh Protocorm-Like Bodies (PLBs) Từ PLBs Ban Đầu. Với các PLBs thu được ở thí nghiệm 2 ta dùng môi trường thích hợp nhân nhiều PLBs từ PLBs ban đầu để thu được số lượng nhiều, phục vụ cho việc nhân giống số lượng nhiều sau này.
KẾT QUẢ NHÂN NHANH PLBS
❖ Thí Nghiệm 4 : Khảo Sát Aûnh Hưởng Của Sự Kết Hợp NAA Và BA Lên Sự Tạo Lập Cụm Chồi Trên Môi Trường MS và Trên Môi Trường KD. Chất điều hoà sinh trưởng thực vật Cytokinin trong môi trường tăng cao do đó cũng có sự hạn chế đối với sự nhân chồi. Và đối với các chồi được tạo thành, thì một số phát triển cao và có rễ, nên tạo một sự không đồng đều giữa các choài.
❖ Thí Nghiệm 5 : Khảo Sát Aûnh Hưởng Nồng Độ Kết Hợp NAA Và BA Lên Sự Hình Thành Rễ Ơû Các Chồi. Qua kết quả thu được, ta nhận thấy môi trường tốt nhất cho sự ra rễ và phát triển chiều cao là môi trường KDR4 có bổ sung thêm 1,5mg/l NAA và 1mg/l BA với chồi phát triển mạnh, mập, và có chiều cao trung bình là 60,59mm, chồi có bộ rễ nhiều và khoẻ. Nhưng với môi trường KDR6 có 2mg/l NAA và 1mg/l BA thì rễ phát triển nhiều làm hạn chế sự phát triển của chồi.
Còn đối với môi trường KDR7 với nồng độ chất điều hoà sinh trưởng cao nên cả chồi và rễ đều bị ức chế.
