Đánh giá tính an toàn và hiệu quả miễn dịch của vắc-xin Hipragumboro GM97 trên gà giống ISSA 3.4.3
MỤC LỤC
Đối t−ợng, địa điểm, nội dung, nguyên liệu và ph−ơng pháp nghiên cứu
Để làm thí nghiệm, chúng tôi sử dụng gà giống ISSA 3.4.3 Trang thiết bị, dụng cụ, hoá chất. Trang thiết bị, dụng cụ, hoá chất của phòng thí nghiệm thuộc trung tâm Kiểm nghiệm thuốc thú y Trung Ương I. Chỉ tiờu an toàn của vacxin đ−ợc đánh giá dựa vào phản ứng của đàn gà, sự tăng trọng, tỷ lệ chết,.
Theo dừi đàn gà trong 10 ngày về triệu chứng lâm sàng, tiến hành mổ khám kiểm tra bệnh tích đại thể của gà. ELISA là một trong những phương pháp quan trọng để xác định kháng thể Gumboro trong huyết thanh. Trong thí nghiệm chúng tôi sử dụng phương pháp ELISA gián tiếp để phát hiện kháng thể Gumboro trong huyết thanh của gà thí nghiệm.
Thực chất của phản ứng ELISA sử dụng kháng thể hoặc kháng kháng thể có gắn enzyme cho kết hợp trực tiếp hay gián tiếp với kháng nguyên. Nếu kháng thể tương ứng với kháng nguyên thì kháng thể hay kháng kháng thể có gắn enzyme không bị rửa trôi. Kháng nguyên đặc hiệu của virus gây bệnh viêm túi Fabricius truyền nhiễm (virus gây bệnh Gumboro) đ−ợc gắn vào đáy giếng của 1 vỉ gồm 96 giếng.
Khi ủ mẫu trong giếng kiểm tra, kháng thể đặc hiệu của virus Gumboro sẽ gắn kết với kháng nguyên đA đ−ợc gắn ở đáy giếng và không bị rửa trôi sau hoạt động rửa để loại bỏ những thành phần không kết hợp. Màu của hỗn dịch xuất hiện ở mỗi giếng tương ứng với lượng kháng thể đặc hiệu đối với virrut Gumboro của gà hiện diện trong mẫu đ−ợc pha loAng. Tủ ấp 37oC, pipette đơn và nhiều rAnh chính xác với các đầu gắn pipette chỉ sử dụng 1 lần, bản pha loAng dùng để pha loAng mẫu, bảng đọc 96 giếng, n−ớc cất hoặc tiệt trùng và thiết bị rửa vi bản.
Để diễn giải kết quả cần phải có chỉ số S/P (Sample value related to Positive value – Giá trị mẫu có liên quan đến giá trị dương tính). * Vaccin ở hầu hết các dòng cấp độ vừa chỉ có hiệu quả khi hiệu giá kháng thể mẹ truyền (MDA) thấp hơn 500 hoặc bằng 250. Số liệu thu đ−ợc từ kết quả nghiên cứu, đ−ợc xử lý bằng ph−ơng pháp thống kê sinh học (Ngô Nh− Hoà, 1981) và sử dụng ch−ơng trình Excel trên máy vi tính.
Kết quả nghiên cứu và thảo luận
Kết quả xác định thời điểm thích hợp dùng vacxin HipraGumboro- GM97 cho đàn gà con
Kết quả xác định hàm l−ợng kháng thể Gumboro thụ động ở gà con lúc 1 ngày tuổi bằng phản ứng ELISA. Vì vậy, dùng vacxin phòng bệnh Gumboro tại thời điểm này sẽ ảnh hưởng đến l−ợng kháng thể Gumboro chủ động sản sinh ra. Dựa vào kết qủa kiểm tra hàm l−ợng kháng thể Gumboro thụ động ở gà 1 ngày tuổi chúng tôi tính theo công thức của Kouwenhoven đA xác định đ−ợc với đàn gà nghiên cứu này, thời điểm thích hợp dùng vacxin Gumboro lần đầu là lúc 10 ngày tuổi.
Một lần nữa, để cú nhận xột rừ hơn về thời điểm dựng vacxin Gumboro cho đàn gà chúng tôi đA tiến hành kiểm tra hàm l−ợng kháng thể Gumboro thụ. Kết quả kiểm tra hàm l−ợng kháng thể Gumboro thụ động ở gà con 10 ngày tuổi bằng phản ứng ELISA. Kiểm tra 30 mẫu huyết thanh của gà con 10 ngày tuổi tại thời điểm này l−ợng kháng thể Gumboro thụ động còn rất thấp, giá trị s/p dao động từ 0,037.
1 ngày 10 ngày
Kết quả xác định chỉ tiêu an toàn của vacxin HipraGumboro-GM97 khi thử nghiệm trên thực địa
An toàn là một chỉ tiêu quan trọng của một loại vacxin đặc biệt với vacxin nh−ợc độc. Vacxin khi sử dụng cho động vật phải đạt chỉ tiêu an toàn, không có phản ứng, hoạt động bình thường, không ảnh hưởng đến khả năng sinh tr−ởng,. Để kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin HipraGumboro-GM97, chúng tôi tiến hành thí nghiệm trên 450 gà con 10 ngày tuổi.
Kết quả kiểm tra phản ứng của gà sau khi dùng vacxin HipraGumboro-GM97 trên thực địa. - ở lô III: gà đối chứng không dùng vacxin, cả 50 con vẫn hoạt động bình th−ờng. Nh− vậy, kết qủa thử nghiệm vacxin của chúng tôi cũng phù hợp với thông tin của nhà sản xuất vacxin đA đ−a ra: Vacxin HipraGumboro-GM97 sử dụng cho gà không có các phản ứng biểu hiện triệu chứng lâm sàng của bệnh, kể cả khi dùng gấp 10 lần liều sử dụng.
Khả năng tăng khối l−ợng cho cơ thể là một chỉ tiêu quan trọng đ−ợc các nhà chăn nuôi quan tâm, khả năng này phụ thuộc vào nhiều yếu tố khác nhau. Cựng với việc theo dừi phản ứng của đàn gà sau khi sử dụng vacxin chỳng tụi cũn theo dừi khả năng tăng trọng của đàn gà, kết quả thu đ−ợc trỡnh bày ở bảng 4.4. Kết quả kiểm tra khả năng tăng trọng của đàn gà sau khi sử dụng vacxin HipraGumboro-GM97 trên thực địa.
Kết quả nghiên cứu về chỉ tiêu an toàn của vacxin HipraGumboro- GM97 cho thấy: khi sử dụng vacxin HipraGumboro-GM97 cho đàn gà 10 ngày tuổi bằng ph−ơng pháp cho uống là an toàn, vì sau khi sử dụng vacxin. Nh− vậy, vacxin HipraGumboro-GM97 khi sử dụng cho đàn gà nuôi ở Việt Nam đạt chỉ tiêu an toàn. Nhận xét này của chúng tôi phù hợp với thông tin của nhà sản xuất đ−a ra.
Xác định chỉ tiêu hiệu lực của vacxin HipraGumboro-GM97
Kết quả kiểm tra l−ợng kháng thể Gumboro của đàn gà sau 21 ngày sau khi dùng vacxin HipraGumboro-GM97 bằng phản ứng ELISA. Kết quả kiểm tra hàm l−ợng kháng thể Gumboro của đàn gà sau 35 ngày dùng vacxin HipraGumboro-GM97 bằng phản ứng ELISA. Tổng hợp kết quả kiểm tra hàm l−ợng kháng thể Gumboro của đàn gà sau khi dùng vacxin tại thời điểm 21 và 35 ngày (bảng 4.7).
Kết quả xác định hiệu lực của vacxin HipraGumboro-GM97 khi sử dụng cho đàn gà bằng phương pháp công cường độc. Ngoài việc xác định hiệu lực của vacxin HipraGumboro-GM97 bằng việc định l−ợng kháng thể Gumboro, chúng tôi còn tiến hành xác định hiệu lực của vacxin bằng phương pháp công cường độc. Thực hiện chỉ tiêu này đ−ợc tiến hành trên hai lô gà: Lô đối chứng 10 con không dùng vacxin Gumboro, Lô thí nghiệm 20 con đA dùng 1 liều vacxin HipraGumboro-GM97 được 25 ngày.
Trước khi công cường độc, cả hai lô gà đ−ợc lấy máu chắt huyết thanh kiểm tra l−ợng kháng thể Gumboro bằng phản ứng ELISA. Tiến hành công cường độc cho hai lô gà bằng chủng virus Gumboro cường độc chuẩn CVL 52/70 tại Trung tâm kiểm nghiệm thuốc Thú y Trung −ơng I. Trong khi đó, ở lô thí nghiệm gà đ−ợc chủng một liều vacxin HipraGumboro tỷ lệ gà có triệu chứng bệnh là rất thấp.
Với triệu gà ỉa chảy phân trắng vàng, lông vũ quanh hậu môn bẩn trên lô gà đối chứng sau khi công cường độc thì trong 10 gà đối chứng đem công thử thách với virus Gumboro CVL-52/70, có 8 gà có biểu hiện t−ơng đ−ơng 80% số gà có biểu hiện triệu chứng của bệnh Gumboro, còn gà đA đ−ợc dùng vacxin hipraGumboro-GM97 tỷ lệ này chỉ là 5%. Nh− vậy, sau khi công thử thách với virus Gumboro cường độc chủng CVL-52/70 thì thấy có sự khác biệt rừ ràng giữa lụ đối chứng và lụ gà đ−ợc dựng một liều vacxin HipraGumboro- GM97 về tỷ lệ biểu hiện triệu chứng bệnh Gumboro. Kết quả này phần nào cho thấy vacxin HipraGumboro-GM97 có hiệu quả bảo hộ đàn gà chống lại sự xâm nhiễm của virus Gumboro.
Cựng với việc theo dừi cỏc biểu hiện triệu chứng lõm sàng của đàn gà, chúng tôi tiến hành mổ khám kiểm tra bệnh tích đại thể của gà sau khi công cường độc, kết quả trình bày ở bảng 4.10. + Kiểm tra túi Fabricius: ở lô gà đối chứng kiểm tra túi Fabricius trong 10 gà mổ khám có tới 8 gà có bệnh tích điển hình của bệnh Gumboro ở túi Fabricius, trong đó 3 gà có túi Fabricius s−ng thuỷ thũng, niêm mạc túi s−ng dầy lên, màu sắc túi màu trắng đục, bệnh tích này chiếm tỷ lệ 30,0%. Nh− vậy, qua kiểm tra xác định hàm l−ợng kháng thể Gumboro của đàn gà đA dùng 1 liều vacxin HipraGumboro-GM97 vào lúc 10 ngày tuổi tại các thời.
