Phân tích sắc tố lycopen và β-caroten trong cà chua chín, cà rốt và đu đủ chín bằng sắc kí bản mỏng

Licopen

− Từ xưa người ta cho rằng ăn rau quả sống sẽ cung cấp nhiều vitamin hơn là nấu chớn, thực ra ủiều này chỉ ủỳng với cỏc vitamin tan trong nước, cũn ủối với β-caroten là chất tan trong dầu và ủược bao bọc bởi cỏc bao sợi cơ của tế bào rau quả nờn việc nấu chín sẽ giúp giải phóng nhiều β-caroten hơn. Kể từ năm 1980 các nhà dinh dưỡng nhận thấy β-caroten khụng chỉ ủơn thuần là tiền vitamin A mà β-caroten cũn ủược biết là một chất chống oxi húa tế bào và chức năng này hoàn toàn ủộc lập với cơ thể cung cấp vitamin A. − Về cụng thức của licopen là một chuỗi dài cấu trỳc phõn tử gồm cú 13 nối ủụi, lycopen ủược kiểm nghiệm là rất hữu hiệu trong việc ngăn chặn cỏc oxygen ủơn trong cơ thể của con người một cách rất hiệu quả.

Sơ lược về lịch sử phát triển sắc kí [3]

Lederer dùng phương pháp của TsVet tách caroten thô thành β-caroten và nhận thấy giỏ trị của phương phỏp về phương diện ủiều chế, phương phỏp sắc kớ mới bắt ủầu ủược chỳ ý ủỳng mức và phỏt triển nhanh chúng. − Năm 1941 sắc kớ phõn bố ra ủời khi Martin và Synge ủề xuất tỏch khụng phải theo ỏi lực của cỏc cấu tử ủối với chất hấp thụ mà do sự phõn bố khỏc nhau của cỏc cấu tử giữa hai chất lỏng khụng trộn lẫn. Cỏc tỏc giả trờn ủó phỏt triển một dạng mới của sắc kớ phõn bố: sắc kớ giấy.Vào những năm 1941 – 1942 Martin ủó làm một bước ngoặc lớn trong sắc kớ do dựng sắc kớ giấy tỏch thành cụng cỏc ancaloit chiết ủược từ các cây thuốc.

Sắc kí bản mỏng [2].[3],[4]

− Năm 1938, Izmailov và Shraiber ủặt nền múng ủầu tiờn cho sắc kớ lớp mỏng và sau ủú những cụng trỡnh của Stahl ủó làm cho sắc kớ lớp mỏng phỏt triển nhanh chúng và ứng dụng rất rộng rãi. − Năm 1952 Martin cụng bố cụng trỡnh ủầu tiờn về sắc kớ khi dựa trờn sự phõn bố của chất giữa pha tĩnh là chất lỏng và pha ủộng là chất khớ. Chỉ trong vài ba chục năm, sắc kớ khớ ủó ủạt ủược nhiều thành tựu tuyệt vời và hiện nay là một trong những phương phỏp hiệu nghiệm nhất về phõn tớch hỗn hợp cỏc chất ủặc biệt là cỏc chất hữu cơ.

− Trong thời gian gần ủõy, nhờ sử dụng tổ hợp sắc kớ bản mỏng với cỏc phương phỏp phõn tớch cú ủộ nhạy cao như cực phổ, ủộng học xỳc tỏc, huỳnh quang… sắc kớ bản mỏng ủược phỏt triển thờm một bước. − Bản mỏng ủược chuẩn bị sẵn là loại bản cú thể tự trỏng hoặc mua loại cú sẵn trờn thị trường, sau ủú chấm mẫu phõn tớch (mẫu ủó ủược hũa tan trong một dung mụi dễ bay hơi sau ủú dựng vi quản ủể chấm) lờn bản mỏng, chấm thành một vết nhỏ gọn, sấy nhẹ ủể ủuổi phần dung mụi hũa tan mẫu, khi ủú mẫu chất chỉ cũn lại bột khụ trờn tấm lớp mỏng. Sau ủú cỏc vết sẽ ủược xỏc ủịnh bằng phương phỏp vật lý (nhỡn bằng mắt, soi dưới ủốn tử ngoại…) bằng phương phỏp húa học (phun lờn tấm bảng cỏc loại dung môi thuốc thử).

Sự hấp phụ các chất phân cực trong môi trường không phân cực mạnh hơn trong môi trường phân cực do sự cạnh tranh giữa chất tan và các phân tử của dung môi. Cột là một ống thủy tinh dưới ủỏy cú một robinet khúa, cột ủược bắt vào giỏ ở vị trớ thẳng ủứng dưới cú một bỡnh hứng, dưới ủỏy cột ủược lút một lớp bụng gũn dày 2 – 3 mm. Khi ủó cho chất hấp phụ hết vào cột theo một trong hai phương pháp trên tiếp tục cho dung môi chảy ngang qua chất hấp phụ liên tục trong một thời gian ủể giỳp cho việc nạp cột ủược chặt chẽ, trong quỏ trỡnh này khụng ủược ủể cột khụ.

− Sau khi cột ủó ổn ủịnh cho mẫu chất cần phõn tớch vào cột, nếu mẫu chất là chất lỏng cần làm bay hơi ủến khụ rồi hũa tan trở lại trong dung mụi, nếu mẫu là chất rắn hòa tan mẫu vào dung môi lượng dung môi là tối thiểu.

Thu mẫu cà chua chớn, cà rốt, ủu ủủ chớn

• Chạy sắc kớ bản mỏng với cỏc dịch chất màu của cà chua chớn, cà rốt, ủu ủủ chín chưa tinh khiết [1],[4]
• Tiến hành sắc kí cột phân tách licopen và β-caroten [1],[4]
• Kiểm tra cỏc phõn ủoạn tỏch ra từ sắc kớ cột của dịch cà chua, cà rốt, ủu ủủ chín bằng sắc kí bản mỏng [1],[4]

Kết quả chạy sắc kớ bản mỏng thu ủược chỳng tụi thấy rằng vết khụng trũn, vết cũn cú ủuụi chỳng tụi kết luận rằng dịch cà chua chớn, cà rốt, ủu ủủ chớn chưa tinh khiết vì vậy chúng tôi tiến hành tách licopen và β-caroten bằng sắc kí cột và kiểm tra lại bằng sắc kí bản mỏng. Mao quản cú chiều dài 7cm, ủường kớnh 1,5-1,6 mm, mao quản dựng ủể hỳt dung dịch chấm lờn bản mỏng yờu cầu mao quản phải cú ủường kớnh bộ hơn, với kớch thứơc này quỏ lớn ủể lấy mẫu cà chua chạy bản mỏng cỏc vết mẫu sẽ rất to làm cho kết quả khụng chớnh xỏc. Dùng mao quản ủó vuốt nhọn nhỳng nhẹ phần ủầu nhọn vào dung dịch mẫu cà chua chớn, lực mao dẫn sẽ hút dung dịch cà chua chín vào mao quản, khi dung dịch lên khoảng 6mm thì lấy ra.

Xỏc ủịnh Rf , quan sỏt vệt chỳng tụi thấy vệt cú màu da cam, vệt không tròn là do dịch chưa tinh khiết, nên muốn vệt chạy sắc kí bản mỏng tròn sắc nét thì dịch phải tinh khiết vì vậy chúng tôi phải tách dịch cà chua chín bằng cột sắc kí. Cột cú kớch thước 50cm ủược rửa sạch bằng hỗn hợp nước rửa sunfocromic, trỏng và làm khụ nước, sấy thật khụ cột, khúa cột, thoa vazơlin vào khúa cột cho ủều, cho một ớt bụng vào ủỏy cột, cột ủược ủổ ủầy ete dầu hỏa, vừa cho ete dầu hỏa chảy ra chầm chậm bờn dưới vừa cho từng ớt một của 20 g bột Al2O3 ở dạng khụ vào ủầu cột, vừa cho vừa gừ nhẹ vào thành cột, cho ủến hết 20 g bột Al2O3 và dừng lại.Tiếp tục cho ete dầu hỏa vào cột, dung mụi ete dầu hỏa ủược lấy ra ở phớa dưới cột với tốc ủộ 10 giọt/phỳt chứa vào cốc và dung mụi này tiếp tục ủược dựng ủể rút trở lại lờn ủầu cột vài ba lần ủể giỳp cho việc nạp cột ủược chặt chẽ và ủảm bảo khụng cú bọt khớ trong cột. Mở khúa ủể hạ mực dung dịch màu cà chua chớn xuống sỏt mặt thoỏng chất hấp phụ Al2O3, dựng ống nhỏ giọt cho một lượng nhỏ 5-10 ml ete dầu hỏa vào ủầu cột lại mở khúa ủể dịch màu cà chua chảy ra sao cho mặt thoỏng chất hấp phụ Al2O3 vừa vặn khụ.Tiếp tục khúa lại cho thờm 2 ml ete dầu hỏa nữa, làm như thế ủến khi thấy dịch chất màu cà chua chớn ủó gắn chặt vào chất hấp phụ Al2O3 ở phần ủầu cột.

Tiến hành sắc kí cột phân tách licopen và β-caroten của dịch cà rốt Tiến hành tách licopen và β-caroten trong dịch chất màu của cà rốt bằng sắc kí cột cũng qua cỏc bước chuẩn bị mẫu, cho mẫu vào cột, theo dừi quỏ trỡnh tỏch cỏc phõn ủoạn như ủó tiến hành ủối với dịch cà chua chớn. Tiến hành sắc kớ cột phõn tỏch licopen và β-caroten của dịch ủu ủủ chớn Tiến hành tỏch licopen và β-caroten trong dịch chất màu của ủu ủủ chớn bằng sắc kớ cột cũng qua cỏc bước chuẩn bị mẫu, cho mẫu vào cột, theo dừi quỏ trỡnh tỏch cỏc phõn ủoạn như ủó tiến hành ủối với dịch cà chua chớn. - Chọn dung mụi: Ban ủầu chạy sắc kớ bản mỏng với dịch chưa tinh khiết của cà chua chớn, cà rốt, ủu ủủ chớn chỳng tụi thấy rằng hệ dung mụi toluen:axeton cho hỡnh dạng vệt khụng trũn sắc nột, vệt cú ủuụi dài lan rộng nờn hệ dung mụi này khụng phự hợp do ủú mà chỳng tụi chỉ chọn cỏc dung mụi trỡnh bày trong bảng 2.2 ủể chạy sắc kớ bản mỏng kiểm tra cỏc phõn ủoạn tỏch ra từ sắc kớ cột.

Hũa tan hết tinh thể trong lọ thu ủược ở phõn ủoạn 1 của cà chua chớn vào 1 ml ete dầu hỏa dựng mao quản ủó ủược vuốt nhọn nhỳng nhẹ phần ủầu nhọn vào dung dịch mẫu của cà chua chớn. − Sau khi tiến hành việc phân tách sắc tố các mẫu bằng phương pháp sắc kí cột, chỳng tụi tiến hành thử lại với phương phỏp sắc kớ bản mỏng, cỏc bước tiến hành ủó ủược nờu ở trờn. Kết quả quan sỏt ban ủầu giỳp chỳng tụi cú cơ sở ủể kết luận rằng: cỏc phương phỏp sử dụng ở trờn ủối với cỏc mẫu khảo sỏt là cà chua chớn, cà rốt và ủủ chớn ủó thu ủược những sắc tố màu tương ủối sạch.