Tạo dòng tế bào lai sinh kháng thể đơn dòng chống lại kháng nguyên AFP để hỗ trợ chẩn đoán sớm ung thư tế bào gan ở người

Hệ thống các cơ quan và tế bào tham gia vào đáp ứng miễn dịch 1. các cơ quan dạng lympho

Các cơ quan dạng lympho trung tâm là nơi mà quá trình biệt hóa của lympho bào xảy ra không cần đến sự kích thích của kháng nguyên, đó là nơi biệt hóa của các tế bào nguồn thành các tế bào lympho T chín hoặc lympho B chín. Các đảo nằm phân bố rải rác ở ruột non (mảng payper), hay các phế nang, phế quản, đường sinh dục, tiết niệu cũng đều có các nang lympho nằm ngay dưới lớp biểu mô có chức năng trong miễn dịch.[2]. Các tế bào nguồn từ tủy xương di tản đến túi Fabricius (ở chim) hay lách (của thú) được huấn luyện, biệt hóa thành tiền lympho B, sau đó tiếp tục được biệt hóa thành các lympho chưa chín.

Ở hệ máu ngoại vi, các lympho chưa chín được biệt hóa thành các lympho B chín, rồi trở thành tương bào plasma, các tương bào này chính là tế bào trực tiếp sản xuất ra các kháng thể dịch thể Igg, IgM, IgD, IgE. Ở người và động vật không có túi Fabricius thì tủy xương và các cơ quan lympho khác như hạch, lá lách….đảm nhận chức năng của túi Fabricius trong quá trình hình thành tế bào lympho B. Các lympho chưa chín tiếp tục được biệt hóa thành lympho T chín, rồi đi vào hệ máu ngoại vi và đi đến các cơ quan tổ chức khác tại các vùng phụ thuộc tuyến ức của hạch, lách Khi đại thực bào đưa thông tin kháng nguyên đến, các lympho T tiếp nhận rồi biệt hóa trở thành Lympho T rồi tiếp tục trở thành nhóm tế bào mẫn cảm với kháng nguyên có chứa kháng thể đặc hiệu trên màng tế bào, gọi đó là kháng thể tế bào.

Ví dụ như đối với các bệnh nhiễm trùng gây bởi các vi sinh vật kí sinh nội bào (do virus, vi khuẩn, nấm, động vật đơn bào) thì các mầm bệnh này chỉ có thể bị tiêu diệt hoàn toàn khi có ĐƯMD tế bào (Nguyễn Như Thanh, 1997) [10].

Giới thiệu về kháng nguyên (Antigen) 1. khái niệm kháng nguyên

Tính đặc hiệu của kháng nguyên là đặc tính mà kháng nguyên chỉ được nhận biết bởi đáp ứng miễn dịch (kháng thể đặc hiệu) do nó gây ra, chứ không phải những đáp ứng miễn dịch do các kháng nguyên khác. Tính đặc hiệu của kháng nguyên rất chặt chẽ, bởi vì nếu có một thay đổi nhỏ về cấu trúc hóa học của kháng nguyên cũng làm mất tính đặc hiệu, kháng nguyên đã thay đổi không còn khả năng kết hợp với kháng thể do nó kích thích sinh ra trước nó. Ví dụ: đối với kháng nguyên là protein chỉ cần thay đổi một axit amin hoặc axit amin dạng D thay thế cho dạng L đã làm thay đổi tính đặc hiệu của kháng nguyên được nhận biết bởi hệ thống miễn dịch được gọi là nhóm quyết định kháng nguyên hay Epitope.

Kháng nguyên xâm nhập vào cơ thể, các tế bào trình diện kháng nguyên bắt giữ và biến chúng thành các Epitope khác nhau, vì thế mà kích thích cơ thể sinh ra nhiều kháng thể tương ứng. Điều này giải thích tại sao khi tiêm chủng vacxin và khuẩn nhược độc A sẽ thu được huyết thanh chứa nhiều loại kháng thể chống lại A được gọi là một họ kháng thể A (Vũ Triệu An và cs, 1998) [1]. Để trở thành kháng nguyên hoàn toàn, kháng nguyên không hoàn toàn này phải gắn với một chất mang (Carrier), tạo thành phức hợp hapten-carier, phức hợp này kích thích cơ thể sinh kháng thể.

Tuy nhiên có chất có trọng lượng phân tử nhỏ nhưng chúng tìm cách gắn với protein khác để trở thành kháng nguyên hoàn chỉnh, ngược lại một số chất có trọng lượng phân tử lớn như Dextran tới 200000 Dalton nhưng không có tính sinh miễn dịch hoặc có nhưng rất yếu (Lê Văn Hùng, 2002) [5].

Kháng thể và phản ứng kháng nguyên – kháng thể 1. Khái niệm kháng thể (Antibody)

- Kháng nguyên phải có ít nhất một Epitope khác loài vì hệ thống miễn dịch không phản ứng với Epitope cùng loại. Epitope là những cấu trúc trên bề mặt tác nhân gây bệnh, có khả năng tác dụng tương hỗ riêng biệt với những thụ thể đặc hiệu trên bề mặt của một số tế bào lympho. Như vậy toàn bộ cấu trúc (tác nhân gây bệnh, những hạt phân tử) mà trên đó những epitope hiện diện được gọi là kháng nguyên.

VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 1. Động vật thí nghiệm

Các hóa chất thông thường khác được mua từ các hãng Sigma (Hoa kỳ), Fisher (Hòa Kỳ), Merck (Đức), Trung Quốc v.v. - Kháng nguyên FSH mua từ hãng CALBIOTECH (Hoa Kỳ) 2.1.5 Thời gian và địa điểm nghiên cứu.

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Sau khi những con chuột này được tiêm kháng nguyên để gây đáp ứng miễn dịch, lại tiếp tục được đem nuôi trong điều kiện bình thường để phục vụ cho những thí nghiệm tiếp theo. Trộn kháng nguyên AFP với một dung lượng cùng thể tích của tá dược CFA có tác dụng làm tăng hoạt tính kháng nguyên và kích thích hệ thống miễn dịch. Chuột được tiêm nhắc lại vào dưới da bụng với cùng một lượng kháng nguyên trộn với cùng thể tích IFA để có nồng độ tiêm cho mỗi chuột trên là 0,2 ml vào tuần thứ 2 và thứ 4 sau lần tiêm thứ nhất.

Chuột được tiêm lần cuối cùng với một số lượng kháng nguyên AFP trong 0,1ml dung dịch nước sinh lý không trộn với tá dược vào tĩnh mạch đuôi lúc 3-4 ngày trước khi lấy tế bào lách dung hợp với tế bào myeloma. Sau khi tế bào được đánh thức thành công, phát triển bình thường, không bị nhiễm khuẩn, nhân nuôi để đạt lượng tế bào cần thiết 104 – 105 tế bào/ml môi trường nuôi cấy trung bình sau 2- 3 ngày môi trường phải được thay mới. Sau khi kiểm tra khả năng tạo kháng thể bằng ELISA, ta biết được giếng nào có kháng thể, tuy nhiên đây là kháng thể đa dòng do nhiều dòng tế bào lai tạo thành.

* Nguyên lý: Dùng kháng thể( kháng thể 1) liên kết với kháng nguyên sau đó liên kết với kháng thể 2- gắn enzyme, tiếp đó cho cơ chất vào, cơ chất sẽ bị enzyme tác động tạo nên màu( do enzyme phân hủy cơ chất).