Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm liposome amphotericin b trong điều trị nhiễm nấm toàn thân

TỔNGQUANVỀVITAMIND

Nó đƣợc hydroxyl hóa ở gan và sau đó ởthận, tạo ra 1,25D (1,25 dihyroxy vitamin D), dạng vitamin D sinh lý hoạtđộng ở các vị trí đích trong xương và tế bào miễn dịch, cũng như tế bào gan.Chú thích: CYP = cytochrom P450, UVB = tia cực tím B, hν = biểu thị phảnứngquanghóa. Khi nồng độ Ca2+, PO43-trong máugiảm, sản xuất 1,25(OH)2D ở thận tăng lên thông qua các cơ chế khác nhau.Giảm nồng độ PO43-trong máu hoạt hóa 1α-hydroxylase ở thận và giảm nồngđộ Ca2+máu kích thích bài tiết hormone cận giáp trạng [30] - hormone gâyhoạt hóa 1α-hydroxylase ở thận. Điều này đã đƣợc chứng minh qua các quan sát trên môhình thực nghiệm ở những con chuột đã bị loại bỏ thụ thể cảm thể VDR, làmảnhhưởngđếnchứcnăngcủavitaminD[36],[37].SựtươngtácgiữavitaminD và thụ thể của nó VDR có thể điều chỉnh phản ứng miễn dịch liên quan đếnsinh bệnh học của nhiều loại ung thƣ [38].

SỰTHIẾUHỤTVITAMIND

Ngoài ra, các nghiên cứu cũng cho thấy nồng độ vitamin D có mốitương quan thuận với nồng độ albumin và số lượng tiểu cầu, tương quannghịch với nồng độ ALT ở bệnh nhân viêm gan mạn tính [13], [35], [59].Nồng độ vitamin D<10 ng/ml là yếu tố tiên lƣợng đánh giá mức độ nghiêmtrọng của cácbệnhganmạn tính[15],[67]. Tác giả đã chỉ rangƣỡng giá trị cơ bản của vitamin D không liên quan đến kết quả điều trị ởnhững bệnh nhân sử dụng thuốc tenofovir disoproxil fumarate (TDF) kết hợpvới Peg-IFNαhoặcđiềutrịriêngbằngTDFhoặc Peg-IFNα[13]. Nghiên cứu cho thấy nồng độ vitamin D trongmáu ở các bệnh nhân UTBMTBG thường ở mức thấp; ngoài ra những bệnhnhân có nồng độ vitamin D càng thấp thì tiên lƣợng bệnh xấu hơn trong đápứng với các phương pháp điều trị ung thư gan [80].

Hóa chấtchínhdùngtrongnghiêncứu

• ĐẠOĐỨCNGHIÊNCỨU

Định lƣợng nồng độ và độ tinh sạch của DNAbằng phương pháp đo độ hấp thụ quang (OD: Optical Density) với các bướcsóng A260/A280trênmáyNanodrop2000củahãng Implen -CHLBĐức. Sau đó tiếp tục thực hiện PCR lần 2 để giải trình tự trên hệ thốngABI PRISM 3500, sử dụng BigDye™ Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kitvới cùngloạimồidùngđểPCR. Nồng độ vitamin D toàn bộ huyết thanh đƣợc định lƣợng bằng phươngphápELISA.SinhphẩmElisasửdụngcủahãngGentaur,Kampenhout,Belgi um.ĐịnhlƣợngnồngđộvitaminDhuyếtthanhđƣợctiếnhànhtạiKhoaSinh học phân tử - Bệnh.

Các số liệu đƣợc trình bày theotrung bình hoặc trung vị và khoảng giá trị của các biến liên tục khi phù hợp.Số liệu được trình bày dưới dạng tỷ lệ cho các kiểu gen và alen của các biếnthể di truyền nghiên cứu. Chỉ số OR (Odds ratio: tỷ xuất chênh), 95%CI(khoảngtincậy95%),đƣợctínhtoánđểđánhgiákhảnăngbệnhhoặcn guycơ tiến triển bệnh. Kruskal-Wallis test và Mann-Whitney-Wilcoxon test đƣợc sử dụng đểso sánh giá trị trung bình giữa các nhóm cho các biến liên tục.

Trong nghiên cứu này chúng tôi sử dụng mô hình hồi quytuyến tính và logistic đa biến để xác định mối liên quan giữa sự thiếu hụtvitamin D với các yếu tố nguy cơ độc lập. Trong nhóm bệnh nhân nhiễm VRVGB mạn tính, nhóm XGvà UTBMTBG có độ tuổi trung bình tương tự nhau và cao hơn so với nhómVGBMT. PCR,sảnphẩmPCRcủamộtsốmẫusauphảnứngtetra-primer-ARMS-PCRsaukhiđã được kiểm tra trên gel agarose sẽ được kiểm chứng lại bằng phương pháp giảitrìnhtựgen(Sangersequencing)nhưhìnhminhhọabêndưới.

Kiểu gen đồng hợp tửCCcó một đỉnh C duy nhất; kiểu gen dị hợp tửCAcó hai đỉnh nucleotide C và nucleotid A lồng vào nhau; Kiểu gen đồng hợp tửlặnAAcómộtđỉnh Aduynhất.

Đa hìnhVDR ApaIvànguycơ nhiễmvirútviêmgan B

Mối liên quan giữa tính đa hình VDR ApaI đối với nguy cơ nhiễmvi rútviêmgan Bvàtiếntriểnbệnh.

Đa hìnhVDRApaIvà nguy cơxơgan

Không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê về tần suất xuất hiện kiểugen và alen của VDRApaIkhi so sánh giữa hai nhóm XG và VGBMT trongcácmôhìnhsosánhditruyền. Đa hình VDR ApaI và nguy cơ ung thƣ biểu mô tế bào gan (nhómchứng:NKM). Kết quả phân tích vẫn cho thấy có sự khác biệt cóý nghĩa thống kê khi phân tích hồi quy logistic điều chỉnh cho tuổi và giớitrong hai mô hình đồng trội (OR=3,17;. Không có sự khác biệt về sựphânbố alengiữa 2nhómtrongphântích. Viêmgan Bmạn tính) Phân.

Đa hình VDR ApaI và nguy cơ ung thƣ biểu mô tế bào gan (nhómchứng:Xơgan). Không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê về sự phân bố kiểu gen vàalen giữa 2 nhóm UTBMTBG và XG trong các mô hình phân tích thống kê ditruyền.

Đa hìnhVDR ApaIvà nguy cơ tiến triển bệnh lý gan giai đoạn cuối(Xơgan+Ung thƣbiểumô tếbàogan)

Kiểu gen đồng hợp tửGGcó một đỉnh G duy nhất; kiểu gen dị hợp tửGAcóhaiđỉnhnucleotide GvànucleotidAlồngvàonhau;Kiểugenđồ nghợp tửlặnAAcómộtđỉnhAduynhất.

Mốiliênquan giữacáchaplotype và cácchỉsốcậnlâmsàng

Người mang haplotypeTCTT (fbaT)có chỉ số AST, ALT cao hơn có ýnghĩa thống kê so với người mang haplotype khác:CCGT (FbAT), TCGT(fbAT), CCTT (FbaT)với P=0,01 và 0,025 (Chi-squared test). Không có sựkhác biệt có ý nghĩa thống kê khi phân tích cho các chỉ số cận lâm sàng khácbao gồm nồng độ bilirubin, albumin, tỷ lệ prothrombin, số lƣợng tế bào tiểucầu, tải lƣợng HBV DNA (dữ liệu không đƣợc trình bày ở đây). Biểu đồ hìnhhộp (boxplot) miêu tả giá trị trung vị và các điểm tứ phân vị 25% và 75% vớicácgiá trị lớnnhấtvànhỏ nhấtvàgiá trị ngoạituyến.

Không có sự khác biệt về nồng độ vitamin D ở nhóm người khỏe mạnhvà bệnh nhân nhiễm VRVGB với P>0,05.

91,4) 9(8,6) 105(100) Chú thích:*Kiểmđịnh 2

• ĐA HÌNH GENVDRTRONG BỆNH LÝ VIÊM GẠN MẠN TÍNHDOVIRÚT VIÊMGANB

Mặc dù các nghiên cứu về tính đa hình gen FokI đối với nguy cơ nhiễmVRVGB cũng nhƣ tiến triển bệnh còn chƣa thống nhất, tuy nhiên các kết quảphân tích từ các nghiên cứu trên thể hiện rằng đa hình FokI của VDR là mộtdấuấnsinhhọcrất cótiềm năngtrongtheo dừicỏctrường hợpnhiễmVRVGBnúi chungvà trongchẩnđoánUTBMTBGnóiriêng. Nghiên cứu của chúng tôi cũng nhƣ hầu hếtcác nghiên cứu đã đƣợc thực hiện về mối liên quan giữa tính đa hình của haibiến thể này đối với nguy cơ nhiễm VRVGB hoặc tiến triển bệnh lý gan mạnđều không cho kết quả có ý nghĩa.Trong một phân tích tổng hợp bao gồm 15nghiên cứu về mối liên quan của 4 SNPs và nguy cơn h i ễ m V R V G B c ũ n g nhƣ tiến triển lâm sàng của VGBMT. Đối với đa hình TaqI, 9 nghiên cứu vềmối liên quan giữa biến thể TaqI và nguy cơ nhiễm VRVGB đƣợc đƣa vàotrong phân tích tổng hợp này với 2702 trường hợp nhiễm VRVGB mạn tínhvà 1570 người thuộc nhóm chứng (xét nghiệm phát hiện VRVGB và VGVRCâm tính) đƣợc đƣa vào để phân tích.

Liên quan đến sự liênquan của đa hình TaqI với ung thƣ gan, nghiên cứu của chỳng tụi xỏc nhận rừràng cỏc nghiờn cứu khỏc, cho thấy khụng cú mối liờn quan đáng kể nào giữađa hình TaqI và tiến triển bệnh gan cũng nhƣ sự phát triển của UTBMTBGtrong cảnhiễmVRVGBvà VRVGC[8],[113],[121]. Ở phần trênchúng tôi đã bàn luận về mối liên quanc ủ a c á c b i ế n t h ể VDR đối với nguy cơ nhiễm VRVGB, nguy cơ phát triển XG và ung thƣ gan.Trong phần bàn luận này chúng tôi sẽ bàn luận thêm về vai trò của các kiểugen và haplotype đối với mức độ nặng của bệnh lý gan mạn tính và mối liênquan của nó đối với các thông số xét nghiệm liên quan đến chức năng gan.Cho đến nay không nhiều các nghiên cứu về biến thể VDR ở các bệnh nhânVGBMT đánh giá mối liên quan của các biến thể FokI, BsmI, ApaI, TaqI đốivới mức độ nặng của bệnh và tương quan đối với các thông số chức năng gan.Huang Y.W. Suneetha[111], chúng tôi không thấy có sự khác biệt có ý nghĩa thốngkê khi phân tích cho các chỉ số cận lâm sàng khác bao gồm tải lƣợng HBVDNA, nồng độ bilirubin, albumin, tỷ lệ prothrombin, số lƣợng tế bào tiểu cầu.Đối với các biến thể BsmI, FokI và TaqI, không có sự khác biệt có ý nghĩathốngkê khi phântíchcho tấtcảcácchỉsốcậnlâmsàngnêutrên.

Thiếu hụt vitamin D trong huyết thanh là tình trạng rất thườnggặp và có mối liên quan chặt chẽ đối với rất nhiều bệnh, không chỉ xuất hiện ởcác bệnh rối loạn về xương mà nó còn được phát hiện ở một số các bệnh vềmiễn dịch và các bệnh truyền nhiễm, hen suyễn, các bệnh ác tính cũng nhƣtìnhtrạngtâmthần[28],[130],[131].TỷlệthiếuhụtvitaminDcóthểlêntới. Nồng độ vitamin D huyết thanh bị ảnh hưởng bởi nhiềuyếu tố bao gồm tình trạng tiếp xúc với ánh nắng mặt trời, mùa tại thời điểmthu thập mẫu nghiên cứu, và chế độ ăn của bệnh nhân…Tuy nhiên nhữngthông tin này không sẵn có và vì vậy không đƣợc phân tích trong nghiên cứunày. Mức độ thiếu hụt vitamin D liênquan đến UTBMTBG ở bệnh nhân Việt Nam nhiễm VRVGB trong nghiêncứu của chúng tôi là cơ sở dữ liệu quan trọng và có thể là tiền đề cho cácnghiên cứu tiếp theo để nhằm tiếp tục tìm hiểu về ảnh hưởng của nồng độvitamin D đối với quá trình tiến triển UTBMTBG cùng với đó là ứng dụngtrong chẩnđoánvàđiềutrị UTBMTBG.

Đây là nghiên cứu đầu tiên tại Việt Nam khảo sát tính đa hình của bốnbiếnthểcủagenmãhóathụthểvitaminD(TaqI,FokI,ApaIvàBsmI)tr êncác đối tượng bệnh nhân nhiễm VRVGB mạn tính và đánh giá mối tươngquan của chúng đối với nguy cơ nhiễm VRVGB, diễn biến bệnh và bệnh cảnhlâm sàng. (ii)Nồng độ vitamin D huyết thanh bị ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố bao gồm tìnhtrạng tiếp xúc với ánh nắng mặt trời, mùa tại thời điểm thu thập mẫu nghiêncứu, và chế độ ăn của bệnh nhân…Tuy nhiên những thông tin này khó đánhgiá khách quan và không đƣợc thu thập và do đó không đƣợc phân tích trongnghiên cứu này. - Kiểu gen đơn bội CCGT (hoặc FbAT) và TCTT (fbaT) là yếu tố bảo vệ đốivới nguy cơ tiến triển XG và ung thƣ gan ở bệnh nhân nhiễm VRVGB mạntính. Nồng độ vitamin D huyết thanh ở bệnh nhân viêm gan mạn, xơ gan vàungthƣbiểumô tếbàogando nhiễmvirútviêmganB. mL)chỉgặpởbệnhnhânnhiễmVRVGBmạntính(8,7%)sovới0%ởNKM. mL)tăngtheotiếntriểnvàgiaiđoạnbệnh(VGBMT:70,7%;XG: 77,5%;.