Ứng dụng kỹ thuật ELISA trong nghiên cứu di truyền nông nghiệp

MỤC LỤC

Khái niệm

Kỹ thuật miễn dịch liên kết enzym

Phơng pháp thử miễn dịch dựa trên phản ứng giữa một kháng nguyên và một kháng thể là những protein có trọng lợng phân tử lớn thu đợc do tạo miễn dịch ở máu nóng của động vật có vú ( chuột, thỏ, ngựa, dê..) bằng những phân tử gây miễn dịch ( protein, polysaccharides, ARN 2 mạch bổ xung ,..).Trong trờng hợp này kháng thể đợc gọi là kháng thể đa dòng (polyclonaux) vì chúng đợc tạo ra từ các dạng hoạt hoá của một quần thể dị chất của những tế bào limpho B trong máu động vật. Chúng là một hỗn hợp của các kháng thể khác nhau phản ứng với nhiều điểm cuối của kháng nguyên hoạc những đỉnh của phân tử gây miễn dịch. Hiện nay kỹ thuật ELISA còn giúp chúng ta xác định đợc hàm lợng thuốc trừ sâu (pesticide) tồn d trong đất.

Các phân tử đánh dấu cũng là một phức hợp kháng thể –kháng nguyên đã đợc sử dụng từ lâu để chuẩn đoán bệnh cho phép nhận thấy kết quả bằng mắt thờng. Hiện nay việc sử dụng các phân tử phóng xạ để đánh dấu đã bị hạn chế .Bên cạnh đó, ngời ta thờng dùng enzym (Alkaline phosphatasa), peroxidaza, chất floresence và Avidin –Biotin để tăng độ nhạy của phép chuẩn đoán ta cũng có thể sử dụng các chất huỳnh quang, phosphattase alkaline. Phơng pháp miễn dịch liên kết enzym đợc nhiều tác giả hoàn thiện vào năm 1971 (Avrameanvà Cs; Van Weemen và Cs; Engvall và Cs ).

Đây là phơng pháp đợc phát triển bởi rất nhiều tác giả và là một phơng pháp nhanh nhậy trong chuẩn đoán và định lợng một số kháng nguyên, kháng thể. Clack và Adams ở Anh là hai trong những ngời đầu tiên dùng phơng pháp này để chuẩn đoán 2 bệnh virut là AWM ( Arabis Mosaic Virus) và PPV ( Plum PoxVirut). Sự đánh dấu kháng thể cho phép nhìn thấy phản ứng kháng nguyên kháng thể và tăng thêm khả năng thăm dò của những phản ứng đặc hiệu.

Phản ứng của virus cũng tập trung và đợc tăng cờng bằng một pha đa thêm vào một kháng thể đặc hiệu có gắn một enzym đánh dấu, có phản ứng hoàn toàn với virus và đợc tìm ra bằng. Trong trờng hợp không có virus trong mẫu kiểm tra, enzym gắn với kháng thể không giữ lại đợc giữ lại và sẽ không có mẫu. Phơng pháp ELISA không những đáp ứng đợc những tiêu chí phức tạp mà còn dễ dàng tự động hoá và dễ dàng tìm kiếm những chất phản ứng trên thị trờng.

- Nhận biết các tác nhân gây bệnh chủ yếu, đa ra những dữ liệu về bệnh dịch học, xác định đợc mức độ nhiễm để quản lý đánh giá các giống kháng bệnh…. - Thu đợc các nguyên liệu thực vật sạch bệnh bằng quy trình chọn giống sạch bệnh ở những giai đoạn nhân giống khác nhau. - Theo dõi thờng xuyên các loại vi sinh vật, phát hiện và diệt trừ ổ dịch có thể là các kho chứa các vật truyền bệnh (côn trùng, tuyến trùng, nấm )….

Một số kỹ thuật phân lập nấm bệnh và nấm đối kháng

    - Khi so sánh giá trị OD đối với đối chứng bệnh và đối chứng sạch của thí nghệim ở tại các thời điểm sau khi cho kháng thể hút bám bề mặt giếng cho thấy thời gian bảo quản đĩa khác nhau không ảnh hởng tới giá trị OD. Giá trị OD thay đổi rất lớn trong cùng một mẫu khi có bọt khí và không có bọt khí trong các giếng, thậm chí trong một số trờng hợp đối chứng sạch bệnh cho kết quả. Nghiên cứu về hệ vi sinh vật tham gia vào sự sinh trởng, phát triển cũng nh duy trì nòi giống ở thực vật là một trong những nội dung quan trọng giúp cho việc nâng cao sức sống, năng suất cũng nh phẩm chất tốt của cây trồng.

    *Nhóm vi sinh vật gây bệnh sống nhờ vào chất hữu cơ của thực vật đang sống, chúng tiết ra các hợp chất phân huỷ mô và tế bào thực vật làm cây chết (khác với nhóm hoại sinh- sống trên những tế bào thực vật đã chết). Vi sinh vật gây bệnh có khả năng tồn tại trong đất hoặc trên tàn d thực vật từ vụ này qua vụ khác dới dạng bào tử hoặc các dạng tiềm sinh khác tạo thành nguồn bệnh tiềm tàng. Cũng nh các vi sinh vật gây bệnh khác nấm gây bệnh là một trong những nguyên nhân chính gây nên sự sụt giảm năng suất, chất lợng, tàn phá mùa màng.

    Các biện pháp sinh học nh sử dụng vi sinh vật đối kháng, thuốc trừ sâu sinh học, chuyển gen chống chịu vào cây trồng đang đ… ợc nghiên cứu và áp dụng ngày càng nhiều nhờ những u điểm của chúng. Một trong những biện pháp sinh học có khả năng đem lại hiệu quả cao trong bảo vệ cây trồng là sử dụng vi sinh vật chống lại các vi sinh vật hại cây hay nói cách khác là tiêu diệt vi sinh vật gây bệnh cho cây nhờ các vi sinh vật đối kháng với chúng. Các chủng vi sinh vật đối kháng thờng phát triển nhanh làm biến đổi dinh dỡng và không gian sống của vi sinh vật gây bệnh.

    + Tăng sức đề kháng ở vật chủ: Một số chủng vi sinh vật có khả năng kích thích sự tạo thành các chất chống chịu ở vật chủ. - Trong nội dung báo cáo này đề cập đến một số kỹ thuật phân lập nấm bệnh và nấm đối kháng phục vụ cho nghiên cứu ảnh hởng của nấm đến cây trồng cũng nh sản xuất ra các chế phẩm sinh học nhờ những nghiên cứu ấy. Vi sinh vật có trong đất sẽ bị thu hút bởi mô thực vật mà nó có thể sống kí sinh và gây bệnh trên đó, nhờ vậy ta tách riêng đợc chủng VSV cần nghiên cứu.

    - Cũng có thể phân lập nấm có trong mô thực vật bằng cách đặt mẫu cần phân lập lên đất đã khử trùng sạch bệnh để nấm xâm nhiễm và đợc nhân lên nhờ đất. - Nuôi mô thực vật bị nhiễm nấm bệnh trên môi trờng nuôi cấy phù hợp để nấm phát triển mạnh mẽ tạo thành khuẩn lạc, nhờ đó tách riêng chúng. - Quan sát khuẩn lạc của nấm mốc mọc lên trong môi trờng đó và cấy chuyển nhiều lần sang môi trờng WA hoặc PDA cho đến khi tạo đợc canh trờng thuần khiết.

    - Tiến hành thí nghiệm trên mẫu đất trồng Cam ở Huyện Văn Giang, tỉnh Bắc Giang là: CVG1 và mẫu đất trồng Hồng Môn tại VDTNN là HM1 - Các chủng vi sinh vật phân lập đợc là : Tricoderma; Aspergillus và. - Tiến hành thí nghiệm trên mẫu đất trồng Hồng Môn tại VDTNN là HM1T, tuy nhiên do thời gian thí nghiệm hạn chế nên cha thu đợc kết quả.